一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽及其制备方法与应用。所述制备方法操作简单、成本低廉、分离效率高，适用于大批量工业生产。所得马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白含量为75

【技术实现步骤摘要】
一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种具有显著抗光老化活性的马氏珠母贝肉多肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]马氏珠母贝是生产珍珠的主要母贝，属重要的海水养殖贝类，广泛分布于我国东南沿海一带。研究发现，马氏珠母贝肉肽具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、免疫调节、延缓衰老等多种功效，但在抗光老化方面的研究与应用报道较少。马氏珠母贝的主要经济价值来源于珍珠，而贝肉主要用作饲料，经济附加值低。因此，对马氏珠母贝肉进行酶解，可拓宽其应用领域，有利于马氏珠母贝的进一步开发利用。
[0003]皮肤光老化是指自然界中的日光或人工来源的紫外线辐射对皮肤造成损伤并使其老化的过程，能够诱发表皮的角质化和真皮层的老化，并且降低皮肤胶原蛋白的合成，引起皮肤真皮层变薄，弹性变差，临床症状包括皱纹、色素沉着、弹性降低、毛细血管扩张和紫癜区。
[0004]目前，在已研究的抗皮肤光老化的活性物质中，已经有相当多的报道证明天然植物提取物中黄酮类和多酚类等天然产物拥有较好的抗氧化、抗光老化活性；动物源抗光老化活性物质主要有胶原蛋白和胶原蛋白肽、弹性蛋白和弹性蛋白肽；也有大量的研究证明生长因子和细胞因子对皮肤光老化有显著改善作用。
[0005]现有技术中，CN 113481271 A公开了一种可有效减轻皮肤晒伤的海洋生物活性肽及其制备方法和应用，通过中性蛋白酶酶解扇贝，并通过超滤以及葡聚糖凝胶分离，收集洗脱组分，通过细胞和动物实验研究活性肽对皮肤光老化的影响；
[0006]CN113337565A公开了一种具有显著皮肤晒伤防护作用的海洋生物活性肽及其制备方法和应用，通过胰蛋白酶酶解扇贝，并通过超滤以及葡聚糖凝胶分离，收集洗脱组分，并测定各分离组分对UVB照射HaCaT细胞活性的影响，但在现有技术中，通过胰蛋白酶、中性蛋白酶等酶解得到的活性肽生物利用率低，其原因为通过胰蛋白酶、中性蛋白酶等酶解得到的活性肽在胃肠道环境中蛋白结构改变，降低生物利用率，而通过前期研究发现体外模拟胃肠酶解能够提高活性多肽的生物利用率，进而更有利于其在体内外发挥抗光老化作用，并且通过胃肠酶解马氏珠母贝肉得到的活性肽在抗光老化活性方面还缺少更多的研究。

技术实现思路

[0007]为了克服现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种具有显著抗光老化活性的马氏珠母贝肉多肽及其制备方法与应用。
[0008]本专利技术采用体外模拟胃肠酶解、超滤以及葡聚糖凝胶G
‑
25分离制备得到马氏珠母贝肉抗光老化多肽。该方法简单、成本低廉、绿色环保，适用于大批量工业生产，能提高马氏珠母贝肉的深加工技术，拓宽马氏珠母贝肉的应用范围。
[0009]本专利技术的目的之一在于提供一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白质含量为75
‑
93％，分子量为200
‑
3000Da、氨基酸含量为11
‑
25％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.2
‑
0.5mg/mL，生物利用率为60
‑
83％。
[0010]进一步的，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白质含量为80
‑
91％，分子量为220
‑
2000Da、氨基酸含量为10
‑
23％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.21
‑
0.40mg/mL，生物利用率为65
‑
80％。
[0011]更进一步的，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白含量为85
‑
90％，分子量为250
‑
1000Da、氨基酸含量为9
‑
20％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.22
‑
0.35mg/mL，生物利用率为67
‑
71％。
[0012]本专利技术的另一个目的在于提供一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0013]将水加入马氏珠母贝肉中混合稀释，体外模拟胃肠消化酶解，酶解液经过超滤分离、G
‑
25葡聚糖凝胶分离得到马氏珠母贝肉肽。
[0014]具体的，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0015](1)体外模拟胃肠消化酶解：将马氏珠母贝肉进行预处理，加入蒸馏水与马氏珠母贝肉混合，调整pH值，加入蛋白酶1进行酶解后得到混合液1；调整混合液1的pH值，加入蛋白酶2进行酶解后到混合液2；将混合液2沸水浴灭酶，离心，取上清液。
[0016](2)超滤分离：将步骤(1)所得上清液超滤后通过不同截留分子量的超滤膜超滤，收集不同分子量范围的截留液和透过液，并进行浓缩与冻干。
[0017](3)葡聚糖凝胶柱分离：将步骤(2)所述抗光老化活性最佳的组分，经过葡聚糖凝胶G
‑
25分离，收集各个洗脱峰组分，冻干制得马氏珠母贝肉肽。
[0018]优选的，步骤(1)中，所述马氏珠母贝肉的预处理为：将新鲜马氏珠母贝去壳，取软体部位，清洗，沥干水分后匀浆。
[0019]进一步优选的，步骤(1)中，所述混合液1中料液比为1:2
‑
1:4(w/v)，pH值为2.0
‑
4.0，蛋白酶1为胃蛋白酶，酶的添加量为300
‑
1000U/(g原料)，酶解温度为37℃，酶解时间为2
‑
4h；所述混合液2的pH值为7.0
‑
8.0，蛋白酶2为胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶，酶的添加量分别为50
‑
400U/(g原料)和40
‑
150U/(g原料)，酶解温度为37℃，酶解时间为2
‑
4h；
[0020]以及，所述沸水浴灭酶时间为10
‑
15min；所述离心的转速为6000
‑
12000r/min，离心时间为10
‑
20min。
[0021]优选的，步骤(2)中，所述超滤分离的截留分子量为10kDa、5kDa和3kDa，收集不同分子量大小范围的截留液和透过液，分别得到>10kDa、5kDa
‑
10kDa、3kDa
‑
5kDa和<3kDa的活性肽组分。
[0022]优选的，步骤(3)中，所述葡聚糖凝胶柱分离纯化的葡聚糖凝胶为G
‑
25，流动相为蒸馏水，分离纯化样品为由超滤分离所得抗光老化活性最好的组分，上样浓度为20
‑
25mg/mL，上样体积为4
‑
6mL，流速为1.0
‑
1.2mL/min，收集时间为4
‑
5min/管，收集各个洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽，其特征在于，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白质含量为75
‑
93％，分子量为200
‑
3000Da、氨基酸含量为11
‑
25％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.2
‑
0.5mg/mL，生物利用率为60
‑
83％。2.根据权利要求1所述的一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽，其特征在于，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白质含量为80
‑
91％，分子量为220
‑
2000Da、氨基酸含量为10
‑
23％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.21
‑
0.40mg/mL，生物利用率为65
‑
80％。3.根据权利要求1或2所述的一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽，其特征在于，所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的蛋白含量为85
‑
90％，分子量为250
‑
1000Da、氨基酸含量为9
‑
20％(甘氨酸与丙氨酸)，弹性蛋白酶抑制率IC
50
值为0.22
‑
0.35mg/mL，生物利用率为67
‑
71％。4.一种如权利要求1
‑
3任一项所述马氏珠母贝肉抗光老化多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将新鲜的马氏珠母贝去壳，取软体部位，清洗，沥干水分后匀浆，按照一定料液比加水混匀，加入蛋白酶1和蛋白酶2依次进行酶解，反应完成后沸水浴灭酶，离心取上清液，上清液抽滤后得到马氏珠母贝肉酶解液；2)将步骤1)得到的马氏珠母贝肉酶解液经超滤、葡聚糖凝胶柱分离纯化，收集各洗脱峰组分，浓缩、冻干后制得马氏珠母贝肉抗光老化多肽。5.根据权利要求4所述的一种马氏珠母贝肉抗光老化多肽的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述料液比为1:2

【专利技术属性】
技术研发人员：游丽君，韦梦汾，张学武，周婕，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：