一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法及其应用。将天然的RNA引发链与Poly(U)聚合酶反应缓冲液混合，以含有非天然碱基的核糖核苷三磷酸为底物，在Poly(U)聚合酶或其突变株的催化下，通过酶促反应获得3'末端含有非天然碱基的RNA链。3'末端含有非天然碱基衍生物TPT3<supgt;Al</supgt;TP的RNA链则可以继续与N<subgt;3</subgt;‑AF488等叠氮修饰的荧光或其它功能性基团进行click反应，实现RNA的荧光或其它功能的正交标记。该方法合成含有非天然碱基的RNA效率高，成本低，操作方便，副产物少，不产生污染性废物，在酶法合成含有非天然碱基的RNA链和功能性RNA末端标记中具有潜在应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及利用poly(u)聚合酶野生型(pup wt)及其突变株pup h336r和pup(h336r, n171a, t172s)无模板合成含非天然碱基的核糖核酸（rna）链的方法及其应用。

技术介绍

1、rna是存在于生物细胞以及部分病毒或类病毒中的遗传信息载体，在基因的编码、解码、调节和表达中具有多种生物学作用。rna药物在疾病治疗方面展现出了良好的应用前景，基于rna的疾病预防、诊断和治疗也迅速兴起。rna的应用场景非常广阔，主要包括用于疾病预防的rna疫苗；用于疾病诊断的rna探针；用于疾病治疗的rna药物，包括sirna、mrna药物、rna适配体和反义寡核苷酸（aso）药物等。在分子生物学领域，具有催化活性的rna，即核酶，可作为生物催化剂，降解特异的mrna序列，参与rna的加工与成熟。guide rna则在crispr-cas9系统中发挥重要作用，指导cas蛋白识别dna序列进行切割和编辑。

2、非天然核酸的开发大大增加了遗传信息载体的类型，扩大了遗传物质的范围，非天然碱基的发展更是扩大了核酸的遗传信息容量本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Poly(U)聚合酶反应缓冲液包含40-60 mM氯化钠，5-15 mM Tris-HCl，5-15 mM氯化镁和0.5-1.5 mM二硫苏糖醇。

3.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述Poly(U)聚合酶反应缓冲液包含50 mM氯化钠，10 mMTris-HCl，10 mM氯化镁和1 mM二硫苏糖醇。>

4.根据权利...

【技术特征摘要】

1.一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述poly(u)聚合酶反应缓冲液包含40-60 mm氯化钠，5-15 mm tris-hcl，5-15 mm氯化镁和0.5-1.5 mm二硫苏糖醇。

3.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述poly(u)聚合酶反应缓冲液包含50 mm氯化钠，10 mmtris-hcl，10 mm氯化镁和1 mm二硫苏糖醇。

4.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述poly(u)聚合酶反应缓冲液的ph为7-8。

5.根据权利要求1所述无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，步骤(1)中，天然的rna引发链的终浓度为20-200 nm；所述poly(u)聚合酶反应缓冲液的终浓度为1×。

【专利技术属性】
技术研发人员：陈庭坚，孙乐平，马杰钊，王雅鑫，王学婷，杜宇辉，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：

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