一种低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液制造技术

本发明专利技术公开了一种低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，包含等体积比混合的发光剂溶液A和氧化剂溶液B；其中，所述发光剂溶液A包括鲁米诺或其衍生物，浓度为1mM

【技术实现步骤摘要】
一种低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液


[0001]本专利技术涉及免疫分析领域，更具体地说，涉及一种以辣根过氧化物酶为酶促反应的检测体系的低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液。

技术介绍

[0002]化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)，是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术；是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。辣根过氧化物酶(HRP)广泛分布于植物界，辣根中含量高，因其比活性高、廉价易得、易标记等特点被广泛应用于化学发光酶免疫技术中。酶如辣根过氧化物酶(HRP)常被用来标记抗原或抗体，免疫反应后，鲁米诺作为发光底物，在酶标免疫反应物和发光试剂的作用下通过氧化还原反应发光，然后根据发光强度确定抗原或抗体的浓度。但，只使用鲁米诺作为发光底物，发光强度低，信号持续时间短，稳定性差。
[0003]近些年来，一些可增强辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺化学发光强度和信号持续时间的化学试剂被人们陆续发现且统称为增强剂。例如酚类的增强剂有对碘苯酚、对香豆素和荧光素等。U.S.Pat.No.5,171,668首次描述了用吩噻嗪
‑
N
‑
烷基磺酸衍生物作为鲁米诺化学发光的增强剂。但发光强度仍较低，灵敏度不高。US.Pat.No.20080241868描述添加酰化催化剂可以显著增加化学发光的强度。该类酰化催化剂是一些4
‑
氨基吡啶类物质，可与增强剂结合使用可以进一步增强发光强度，因此可称为共增强剂。然而使用吩噻嗪
‑
N
‑
烷基磺酸衍生物及4
‑
氨基吡啶共增强体系虽然信号强度强，但衰减速度快，稳定性差，对空气中氧化性物质抗干扰能力差。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是在于提供了一种以辣根过氧化物酶为酶促反应的检测体系的低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，具有发光信号强度强、灵敏度高、化学信号持续时间长和可有效避免空气中的氧化物的干扰等特点。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：以辣根过氧化物酶为酶促反应的检测体系的低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，包含等体积比混合的发光剂溶液A和氧化剂溶液B。
[0006]其中，所述发光剂溶液A包括：
[0007]发光剂：鲁米诺或其衍生物，浓度为1mM
‑
5mM；
[0008]增强剂：N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐，浓度为0.4
‑
1mM；
[0009]共增强剂：4
‑
二烷基氨基吡啶或N
‑
唑，浓度为1mM
‑
5mM；
[0010]抗干扰试剂：硫辛酸或其钠盐，浓度为0.5mM
‑
1.5mM；
[0011]稳定剂：乙二胺四乙酸，浓度为0.5mM
‑
2.5mM；
[0012]缓冲液：环己基
‑2‑
氨基乙磺酸
‑
HCl缓冲液，浓度为0.02
‑
0.2M，pH为8.5
‑
9.5；
[0013]所述氧化剂溶液B包括：
[0014]氧化物：过氧化氢或者过硼酸钠或者过氧化脲，浓度为4
‑
6mM；
[0015]稳定剂：乙二胺四乙酸，浓度为0.5mM
‑
2.5mM；
[0016]缓冲液：醋酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，浓度为0.02
‑
0.1M，pH为5.0
‑
5.5。
[0017]本专利技术中，所述N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐为3
‑
(吩噻嗪
‑
10
‑
基)丙1
‑
磺酸或其钠盐。
[0018]进一步地，所述发光剂溶液A是经过如下配置方法配置而成的(以1升为例)：
[0019](1)取N
‑
环己基
‑2‑
氨基乙磺酸溶解于超纯水中，浓度为0.02
‑
0.2M，用浓盐酸调节pH值至8.5
‑
9.5；
[0020](2)按浓度为0.5mM
‑
2.5mM加入乙二胺四乙酸，搅拌至完全溶解；
[0021](3)按浓度为0.5mM
‑
1.5mM加入硫辛酸或其钠盐，搅拌至完全溶解；
[0022](4)按浓度为1mM5mM加入鲁米诺或其衍生物，搅拌至完全溶解；
[0023](5)取N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐和4
‑
二烷基氨基吡啶或N
‑
唑溶于DMF，加入到步骤(4)所得的溶液中，搅拌均匀，N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐浓度为0.4
‑
1mM，4
‑
二烷基氨基吡啶或N
‑
唑浓度为1mM
‑
5mM；
[0024](6)超纯水定容至1L，2
‑
8℃避光保存。
[0025]进一步地，所述氧化剂溶液B是经过如下配置方法配置而成的(以1升为例)：
[0026]1)取醋酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，浓度为0.02
‑
0.1M，pH为5.0
‑
5.5；
[0027]2)按浓度为0.5mM
‑
2.5mM加入乙二胺四乙酸，搅拌均匀；
[0028]3)按浓度为4
‑
6mM加入过氧化氢或者过硼酸钠或者过氧化脲，搅拌均匀；
[0029]4)超纯水定容至1L，2
‑
8℃保存。
[0030]本专利技术相对于现有技术包括有以下有益效果：
[0031]1.本专利技术使用3
‑
(吩噻嗪
‑
10
‑
基)丙1
‑
磺酸或其钠盐作为增强剂，4
‑
二甲基氨基吡啶或N
‑
唑作为共增强剂，具有发光信号强度强、灵敏度高的特点；
[0032]2.本专利技术使用乙二胺四乙酸作为稳定剂，可大大提高信号持续性；
[0033]3.本专利技术使用硫辛酸或其钠盐作为抗干扰试剂，可有效抵抗空气中氧化物的干扰。
附图说明
[0034]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0035]图1为本专利技术实施例1中增强剂对鲁米诺化学发光反应的发光强度和时间的影响图；
[0036]图2为本专利技术实施例2中未添加抗干扰试剂及添加抗干扰物质对底物本底信号值的比较图。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，其特征是，包含等体积比混合的发光剂溶液A和氧化剂溶液B；其中，所述发光剂溶液A包括：发光剂：鲁米诺或其衍生物，浓度为1mM
‑
5mM；增强剂：N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐，浓度为0.4
‑
1mM；共增强剂：4
‑
二烷基氨基吡啶或N
‑
唑，浓度为1mM
‑
5mM；抗干扰试剂：硫辛酸或其钠盐，浓度为0.5mM
‑
1.5mM；稳定剂：乙二胺四乙酸，浓度为0.5mM
‑
2.5mM；缓冲液：环己基
‑2‑
氨基乙磺酸
‑
HCl缓冲液，浓度为0.02
‑
0.2M，pH为8.5
‑
9.5；所述氧化剂溶液B包括：氧化物：过氧化氢或者过硼酸钠或者过氧化脲，浓度为4
‑
6mM；稳定剂：乙二胺四乙酸，浓度为0.5mM
‑
2.5mM；缓冲液：醋酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，浓度为0.02
‑
0.1M，pH为5.0
‑
5.5。2.根据权利要求1所述的低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，其特征是，所述N
‑
烷基吩噻嗪或其钠盐为3
‑
(吩噻嗪
‑
10
‑
基)丙1
‑
磺酸或其钠盐。3.根据权利要求1或2所述的低空气干扰高灵敏度的化学发光底物液，其特征是，所述发光剂溶液A是经过以下配置方...

【专利技术属性】
技术研发人员：董亚玲，李冰，
申请(专利权)人：郑州凌思生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：