一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶及其制备方法，属于药物制备技术领域。所述含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，包括以下步骤：1)凝胶剂使用PBS缓冲液溶解混匀，于37℃条件下振荡混匀过夜，获得第一凝胶；2)将步骤1)获得的第一凝胶与血小板裂解液按(8

【技术实现步骤摘要】
一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶及其制备方法


[0001]本专利技术属于药物制备
，尤其涉及一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶及其制备方法。

技术介绍

[0002]女性在进入绝经期后常常会出现相应的生理和心理变化，与生理症状紧密相连的改变主要有泌尿生殖道症状、血管舒缩症状、骨质疏松、精神神经症状、代谢异常和心血管疾病。萎缩性阴道炎是绝经期女性容易患的疾病之一，它常见于自然绝经及卵巢去势后妇女，其主要病理改变是雌激素减少导致的阴道鳞状上皮萎缩，并且常伴随糖原减少和阴道内pH值增高。变薄的上皮对阴道内菌群变化的抵抗力下降，使得致病菌容易侵犯阴道导致炎症的发生，常见的致病菌包括：链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等。大多数患者发病没有症状，但主要发病症状是阴道少量流血、瘙痒、排尿困难或性交困难。阴道萎缩的表现为黏膜苍白、瘀斑及皱襞消失。镜下可见表层及中间层细胞不同程度的减少或消失。伴急性炎症及和肉芽组织构成的小溃疡散在分布在完好的上皮中，也可见粘膜下层淋巴细胞及浆细胞浸润。
[0003]目前对与萎缩性阴道炎的治疗根据病情的严重程度分为激素治疗和非激素治疗。激素治疗主要是通过补充雌激素的方式来弥补卵巢功能减退导致的雌激素减少。根据用药方式可以分为全身激素治疗和局部激素治疗，因为全身激素的使用会导致激素相关肿瘤发生几率增加，因此一般在无明显禁忌症的时候通常采用局部激素治疗，即阴道雌激素治疗。阴道雌激素治疗可以有效对的缓解阴道萎缩等症状，但是有研究也表明局部激素的治疗也会可能导致肿瘤、脑卒中和静脉栓塞的风险，因此有相关风险的患者禁用激素治疗。
[0004]间充质干细胞可以通过分泌蛋白质和激素的旁分泌活动，或者通过隧道纳米管或微泡传递线粒体，以及通过含有核酸的外泌体或微泡的方式参与组织修复过程。间充质干细胞作为细胞因子的丰富来源，研究以证明其可以分泌FGF2、IGF
‑
1、HGF、VEGF、PDGF等在内的多种细胞因子。而这些细胞因子在组织修复中都起到了重要作用。
[0005]在免疫调节方面，间充质干细胞可以抑制T细胞的增殖和分泌IL
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2来调节免疫活性，同时还可以通过激活Fas
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FasL配体轴来诱导炎性T细胞凋亡，单核细胞趋化蛋白
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1是间充质干细胞向外界分泌一种重要的细胞因子，通过该细胞因子可以刺激T细胞定向迁移，当炎性T细胞凋亡后，其细胞碎片被吞噬细胞所吞噬，并刺激吞噬细胞向周围环境分泌TGFβ，而这一过程可以导致间充质干细胞所诱导的T细胞转变为促进全身免疫耐受的Treg细胞。
[0006]血小板裂解液是一种含有生长因子、蛋白质、细胞因子和与关键愈合过程有关的趋化因子的饱和溶液，用于治疗各种疾病，如脱发、口腔粘膜炎、根性疼痛、骨关节炎、软骨和肌腱疾病。目前未见在阴道凝胶产品中应用。

技术实现思路

[0007]本专利技术实施例提供一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶及其制备方法，旨在解决有效改善阴道组织的萎缩现象的药剂凝胶缺乏的问题。
[0008]本专利技术实施例是这样实现的：
[0009]一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，具体包括以下步骤：
[0010]1)称取0.05g
‑
0.1g的凝胶剂，使用10ml PBS缓冲液(phosphate buffered saline，磷酸缓冲盐溶液)溶解混匀，于37℃条件下振荡混匀过夜，获得第一凝胶；
[0011]2)将步骤1)获得的第一凝胶与血小板裂解液按(8
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9.9):(0.1
‑
2)的比例混合；
[0012]3)待凝胶剂全部溶解后调节pH至7；
[0013]4)选取间充质干细胞，使用TrypLETMExpress酶进行消化，PBS清洗，台盼蓝计数；
[0014]5)使用配好的凝胶调整间充质干细胞密度为106‑
107/ml，获得含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶。
[0015]步骤1)中所述凝胶剂为卡波姆、海藻酸钠、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、黄原胶、卡拉胶、瓜尔胶中的任意一种或几种的混合物；优选地，所述凝胶剂为卡波姆。
[0016]步骤2)中所述第一凝胶与血小板裂解液优选的混合比例为9:1。
[0017]步骤3)中所述调节pH优选采用三乙醇胺、氢氧化钠、或盐酸中的一种。
[0018]步骤4)中所述间充质干细胞，为羊膜间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞的任意一种或几种的混合物；优选地间充质干细胞为羊膜间充质干细胞。
[0019]作为优选的实施方式，所述间充质干细胞，选用对数生长期的间充质干细胞。进一步地，所述间充质干细胞为对数生长期的羊膜间充质干细胞。
[0020]上述的羊膜间充质干细胞的分离与培养，具体步骤如下：
[0021]取产妇剖宫产后的羊膜，使用含有1％双抗的DPBS清洗羊膜，去除凝固的血块和多余组织；将羊膜剪碎，加入0.5％的胰酶于37℃条件下振荡消化1h，随后将消化后的组织通过200目的筛网过滤，使用含有1％双抗的DPBS充分清洗，随后将组织碎片收集，使用1mg/ml的胶原酶I于37℃条件下振荡消化1h；将消化后的组织于200目筛网过滤，取滤过液，于1500rpm/min条件下离心5min，收集细胞沉淀；将细胞沉淀使用DMEM/F12培养基重悬，培养于37℃5％CO2细胞培养箱中；定期给羊膜间充干细胞换液，获得羊膜间充质干细胞。
[0022]所述含有1％双抗的DPBS为DPBS溶液中含有青霉素100U/ml，链霉素0.1mg/ml。
[0023]一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶由上述制备方法获得。
[0024]本专利技术的含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶，是通过提取间充质干细胞和血小板裂解液使用凝胶剂制成外泌体凝胶，该凝胶无刺激性气味呈粘稠状，并且具有很好的水溶性和粘附性，可以很好的吸附于女性阴道内，并且该凝胶pH值为中性，在阴道酸性环境下该凝胶粘稠度缓慢下降，逐渐释放所包被的物质并覆盖受损阴道组织。使用时将凝胶挤入阴道深处，覆盖在子宫颈或者苍穹部位，通过凝胶的附着间充质干细胞可以局部不断释放多种细胞因子，并随着凝胶的溶解，间充质干细胞可以到达阴道黏膜层表面，通过与阴道黏膜上皮细胞的接触促进其生长。通过间充质干细胞的旁分泌作用于受损的阴
道上皮，促进上皮细胞的修复，从而对阴道炎症进行有效控制和治疗，通过凝胶附着于病变部位，从而达到保护创面的作用。通过间充质干细胞、血小板裂解液和凝胶的联合作用，提升病变部位阴道上皮对病原微生物的抵抗力，修复受损阴道上皮，恢复阴道微环境的稳态，从而达到治疗女性阴道炎、宫颈糜烂，修复受损阴道的作用。
[0025]本专利技术的技术方案与现有技术对比如下：
[0026]1.现有技术专利技术专利申请说明书CN2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)称取0.05g
‑
0.1g的凝胶剂，使用10mlPBS缓冲液溶解混匀，于37℃条件下振荡混匀过夜，获得第一凝胶；2)将步骤1)获得的第一凝胶与血小板裂解液按(8
‑
9.9):(0.1
‑
2)的比例混合；3)待凝胶剂全部溶解后调节pH至7；4)选取间充质干细胞，使用TrypLE
TM
Express酶进行消化，PBS清洗，台盼蓝计数；5)使用配好的凝胶调整间充质干细胞密度为106‑
107/ml，获得含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶。2.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述凝胶剂为卡波姆、海藻酸钠、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、黄原胶、卡拉胶、瓜尔胶中的任意一种或几种的混合物。3.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述第一凝胶与血小板裂解液的混合比例为9:1。4.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，其特征在于：步骤3)中所述调节pH采用三乙醇胺、氢氧化钠、或盐酸中的一种。5.根据权利要求1所述的含有间充质干细胞及血小板裂解液的阴道复合凝胶的制备方法，其特征在于：步骤4)中所述间充质干细胞，为羊膜间充质干细胞、脂肪间充...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹文君，曾鹏辉，周英杰，刘思健，
申请(专利权)人：尹文君，
类型：发明
国别省市：