免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体、其核酸编码序列及应用制造技术

本发明专利技术提供一种免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其与人类白细胞抗原

【技术实现步骤摘要】
免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体、其核酸编码序列及应用


[0001]本专利技术是涉及一种免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体、其核酸编码序列及其应用。
[0002]先前技术
[0003]癌症又名为恶性肿瘤，为细胞不正常增生，且这些增生的细胞可能侵犯身体的其他部分，为由控制细胞分裂增殖机制失常而引起的疾病。全世界罹患癌症的人口有不断增加的趋势，癌症是国人十大死因之一，且已连续多年居十大死因之榜首。
[0004]常规的肿瘤治疗方法包括手术治疗、放射线治疗、化学治疗及标靶治疗等。肿瘤免疫治疗为上述治疗方法以外的另一种治疗肿瘤的方法，是通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫及体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散及复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。然而，目前的肿瘤治疗方法仍存在效果不明显及副作用强烈的问题，甚至会衍生出其他免疫相关疾病。
[0005]人类白细胞抗原
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G(human leukocyte antigen
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G,HLA
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G)已被发现高度表达于多种实体肿瘤上，且有抑制免疫细胞的特性。因此，已有研究人员致力于研发以HLA
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G作为辨识肿瘤的靶分子并找出这些靶分子是否具有成为抗癌药物的潜力。
[0006]程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD
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L1)被发现表达于多种实体肿瘤的细胞表面。因此，已有研究人员致力于研发以PD
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L1作为辨识肿瘤的靶分子并找出这些靶分子是否具有成为抗癌药物的潜力。
[0007]CD3ε(CD3 epsilon)为在T细胞上发现的一种跨膜蛋白，已被发现与肿瘤及调节免疫功能有关联性。因此，已有研究人员致力于研发以CD3ε作为辨识肿瘤及调节免疫功能的靶分子并找出这些靶分子是否具有成为抗癌药物或免疫调节药物的潜力。
[0008]为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出新颖且更有效治疗癌症及免疫相关疾病、免疫调节及活化免疫细胞的药物以造福有此需求的广大群体。

技术实现思路

[0009]有鉴于此，本专利技术的目的为提供一种免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其与人类白细胞抗原
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G(human leukocyte antigen
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G,HLA
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G)、程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD
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L1)及一CD3ε(CD3epsilon)专一性结合，该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体包含下列氨基酸序列的组合：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2，及SEQ ID NO：3。
[0010]在本专利技术的一实施例中，该氨基酸序列是该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体的重链可变域(heavy chain variable domain,VHH)的氨基酸序列。
[0011]在本专利技术的一实施例中，该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体进一步包含可结晶片段区域(fragment crystallizable region,Fc区域)。
[0012]在本专利技术的一实施例中，该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体与第二抗体缀合以形成三特异性T
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细胞衔接器(triple specific T
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cell engager,TriTE)。
[0013]在本专利技术的一实施例中，该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体活化及/或聚集CD3阳性细胞。
NO：8；VHH1表示重链可变域1(VHH1)，即为抗
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PD
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L1纳米抗体；柔性接头(Flexible linker)，即为接头(Linker)，其氨基酸序列为SEQ ID NO：9，编码柔性接头的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID NO：10；VHH2表示重链可变域2(VHH2)，即为抗
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HLA
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G纳米抗体；VHH3表示重链可变域3(VHH3)，即为抗
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CD3ε纳米抗体；铰链(Hinge)；CH2及CH3表示人类IgG1可结晶片段区域(fragment crystallizable region,Fc区域)，即为人类IgG1 Fc
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域(Human IgG1 Fc
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domain)，其氨基酸序列为SEQ ID NO：11，编码人类IgG1 Fc
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域的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQ ID NO：12。
[0023]图1B显示Nb
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TriTE的限制酶消化结果，其中泳道1(lane 1)表示质体，泳道2(lane 2)表示以XbaI
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BamHI消化的质体，泳道M(lane M)表示DNA分子量标准(DNA marker)。
[0024]图1C显示纯化的Nb
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TriTE的凝胶电泳分析结果。
[0025]图2A显示Nb
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TriTE与PD
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L1结合的SPR动力学分析，配体为PD
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L1，分析浓度为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nM，流速为30μL/分钟，缔合时间(association time)为120秒，解离时间(dissociation time)为900秒，阿替利珠单抗(Atezolizumab)是一种用于治疗尿路上皮癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌及肝细胞癌的IgG1同种型完全人源化抗PD
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L1单克隆抗体，抗
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PDL1表示抗
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PD
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L1纳米抗体，Response表示反应，Time表示时间。
[0026]图2B显示Nb
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TriTE与HLA
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G结合的SPR动力学分析，配体为HLA
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G，分析浓度为305、152.5、76.25、38.125、19.0625nM，流速为30μL/分钟，缔合时间为180秒，解离时间为360秒，抗
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HLA
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G表示抗
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HLA
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G纳米抗体，抗
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CD3e表示抗
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CD3ε纳米抗体，87G表示商用抗
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HLA
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G单克隆抗体，Response表示反应，Time表示时间。
[0027]图2C显示Nb
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TriTE与CD3ε结合的SPR动力学分析，配体为CD3ε，分析浓度为28.125、56.25、112.5、225、450、900、1800、3600nM，流速为15μL/分钟，缔合时间为350秒，解离时间为900秒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其与人类白细胞抗原
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G(HLA
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G)、程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)及CD3ε专一性结合，该免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体包含下列氨基酸序列的组合：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2，及SEQ ID NO：3。2.如权利要求1所述的免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其中，所述氨基酸序列是所述免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体的重链可变域的氨基酸序列。3.如权利要求2所述的免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，进一步包含可结晶片段区域(Fc区域)。4.如权利要求3所述的免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其与第二抗体缀合以形成三特异性T
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细胞衔接器(TriTE)。5.如权利要求4所述的免疫调节及抗肿瘤相关纳米抗体，其活化及/或聚集CD3阳性细胞。6.如权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：周德阳，邱绍智，黄士维，潘志明，陈美智，林育全，陈晔，
申请(专利权)人：圣安生医股份有限公司，
类型：发明
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