免疫调控奈米抗体暨其核酸编码序列及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种免疫调控奈米抗体，其与一程序性细胞死亡配体1专一性结合。本发明专利技术亦提供该免疫调控奈米抗体的核酸编码序列、该免疫调控奈米抗体用于治疗癌症及免疫相关疾病的用途，及用于检测PD

【技术实现步骤摘要】
death protein
‑
1,PD
‑
1)。
[0012]本专利技术的另一目的为提供一种经分离的核酸，其编码一如前所述的免疫调控奈米抗体的胺基酸序列，该经分离的核酸包含一选自于下列所组成的群组中的核苷酸序列：SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.4，及SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6的任意组合。
[0013]本专利技术的另一目的为提供一种医药组成物，包含一如前所述的免疫调控奈米抗体及一医药学上可接受的载剂。
[0014]本专利技术的另一目的为提供一种如前所述的免疫调控奈米抗体用于制备一治疗癌症及免疫相关疾病的医药品的用途。
[0015]本专利技术的另一目的为提供一种用于检测PD
‑
L1表现量的方法，包含对一待测样品投予一如前所述的免疫调控奈米抗体。
[0016]在本专利技术的一实施例中，该待测样品是血液、尿液、痰液、唾液或体液。
[0017]综上所述，本专利技术免疫调控奈米抗体的功效在于：藉由表面电浆子共振结合分析(surface plasmon resonance binding assay,SPR binding assay)证明抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体分别以0.27及0.41nM内的KD有效结合PD
‑
L1蛋白质、由PD
‑
1/PD
‑
L1阻断生物分析套组(Blockade Bioassay kit)测定抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体的PD
‑
1/PD
‑
L1轴阻断(axis blockade)证明抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体在PD
‑
L1、APC/PD
‑
1效应子共培养系统中阻断PD
‑
L1/PD
‑
1讯号传递、抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体增强γδT细胞
‑
诱导的对肿瘤细胞(MDA
‑
MB
‑
231)的细胞毒性、藉由西方墨点分析(Western blotting)证明抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体在PD
‑
L1接合后恢复OKT3(抗
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CD3单株抗体)
‑
诱导的T细胞增殖，及藉由流动式细胞测量分析及免疫细胞化学(immunocytochemistry)分析证明抗
‑
PDL
‑
1奈米抗体可用来侦测细胞样品中PD
‑
L1的表现，藉此可达到治疗癌症及免疫相关疾病的效用。特别地，相较于习知的抗体必须藉由载体将基因转染至细胞中表现抗体功能而有低产量及效果不彰的缺点，本专利技术免疫调控奈米抗体可在体外大规模制备后直接投药至需要的个体内进行治疗。另外，本专利技术也可达到检测PD
‑
L1表现量的效用。
[0018]以下将进一步说明本专利技术的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本专利技术，并非用以限定本专利技术的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本专利技术的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本专利技术的保护范围当视权利要求书所界定者为准。
[0019]【图式简单说明】
[0020]图1A及图1B显示抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体的表面电浆子共振结合分析结果，其中clone表示选殖株，nb表示奈米抗体，RU表示反应单元(response unit)，即涂覆的PD
‑
L1重组蛋白质(Sino Biological,Cat:10084
‑
H05H)的CM5晶片。
[0021]图2显示由PD
‑
1/PD
‑
L1阻断生物分析套组(Blockade Bioassay kit)测定抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体的PD
‑
1/PD
‑
L1轴阻断(axis blockade)的结果，其中clone表示选殖株，PD
‑
L1 nb表示抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体，阿替利珠单抗(Atezolizumab)是一种用于治疗尿路上皮癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌及肝细胞癌的IgG1同种型完全人源化抗PD
‑
L1单株抗体。
[0022]图3显示抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体的T细胞增殖分析结果，其中**表示p<0.01；***表示p<0.001。
[0023]图4显示抗
‑
PD
‑
L1奈米抗体增强对人类乳癌细胞株MDA
‑
MB
‑
231的γδT(GDT)
‑
诱导的细胞毒杀作用，其中最左边组别表示单纯γ
‑
δT细胞处理组，未与任何抗体合并；*表示p<0.05；**表示p<0.01。
[0024]图5显示抗
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PD
‑
L1奈米抗体的西方墨点分析(Western blotting)结果，其中箭头表示PD
‑
L1蛋白位置，与商用抗体一致的分子量位置；所用细胞株为非小细胞肺癌细胞株H1975(NCI
‑
H1975[H
‑
1975,H1975],ATCC)，mAb表示单株抗体，Nb表示奈米抗体；商用抗体为PD
‑
L1单株抗体(66248
‑1‑
Ig,Proteintech)，商用抗体组的初级抗体为PD
‑
L1单株抗体(1:2500)，二级抗体为抗
‑
兔子
‑
辣根过氧化酶(anti
‑
rabbit
‑
horseradish peroxidase,anti
‑
Rab
‑
HRP)(1:10000)；实验组抗
‑
PD
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L1奈米抗体的浓度为1ng/ml，二级抗体为抗
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VHH
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HRP(1:10000)。
[0025]图6A及图6B显示抗
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PD
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L1奈米抗体的流动式细胞测量分析结果，其中图6A的(a)中nb表示奈米抗体，Ab表示抗体，FITC表示萤光异硫氰酸盐(fluorescein isothiocyanate)，图6A的(b)中mAb表示单株抗体，H1975是一种非小细胞肺癌细胞株，Alexa Fluor 488
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫调控奈米抗体，其特征在于，所述免疫调控奈米抗体与一程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD
‑
L1)专一性结合，所述免疫调控奈米抗体包含一选自于下列所组成的群组中的胺基酸序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，及SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的任意组合。2.根据权利要求1所述的免疫调控奈米抗体，其特征在于，其中所述胺基酸序列是所述免疫调控奈米抗体的一重链可变域(heavy chain variable domain,VHH)的一胺基酸序列。3.根据权利要求2所述的免疫调控奈米抗体，其特征在于，所述免疫调控奈米抗体与一可结晶片段区域(fragment crystallizable region,Fc region)缀合。4.根据权利要求3所述的免疫调控奈米抗体，其特征在于，所述免疫调控奈米抗体与一第二抗体缀合以形成双特异性T细胞连接(bispecific T
‑
cell engager,BiTE)、三特异性T
‑
细胞连接(triple specific T
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cell engager,TriTE)、双特异性杀手细胞连接(bispecific killer cell enager,BiKE)、三特异性杀手细胞连接(triple specific k...

【专利技术属性】
技术研发人员：周德阳，邱绍智，黄士维，潘志明，陈美智，林育全，陈晔，
申请(专利权)人：台湾中国医药大学附设医院，
类型：发明
国别省市：