一种靶向BCMA的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种纳米抗体，其包括含CDR1、CDR2和/或CDR3的重链可变区，并具有识别并结合BCMA的功能，具体CDR序列详见正文。本发明专利技术还公开了一种BCMA结合分子、含所述纳米抗体或BCMA结合分子的组合物、BCMA检测剂，以及所述纳米抗体、BCMA结合分子或组合物在制备治疗与BCMA相关疾病的药物中的应用。本发明专利技术的纳米抗体、BCMA结合分子以及组合物可识别并结合BCMA，具有潜在的治疗与BCMA相关的疾病的效用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向BCMA的纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物制药领域，涉及一种靶向BCMA的纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]单域抗体(sdAb)由于具有单个单体抗体可变域而不同于传统的4链抗体。例如，骆驼科动物和鲨鱼产生天然缺乏轻链的抗体，其被称为仅重链抗体(HcAb，或简称为重链抗体)。骆驼科动物仅重链抗体的每个臂中的抗原结合片段具有单个重链可变域(VHH)，所述重链可变域可在无需轻链的帮助下，对抗原具有高亲和力。骆驼科动物VHH即纳米抗体被称为最小的功能性抗原结合片段，分子量为大约15kD。
[0003]纳米抗体具有稳定性高、穿透力强、结合表位广的天然优势(Muyldermans S.Annu Rev Biochem.2013；82:775
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97)。纳米抗体自发现以来，逐渐受到人们关注，对其的基础研究已比较成熟，在应用方面，已有自身免疫病、血液疾病、病毒感染及骨科疾病等进入临床，在抗感染、抗炎症性疾病以及神经退行性疾病等方面也都表现出了极大的优势(Morrison C.Nat Rev Drug Discov.2019Jul；18(7):485
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487)。
[0004]多发性骨髓瘤(MM)是第二常见的造血系统恶性肿瘤，占血液恶性肿瘤的10％。MM主要病状是骨髓(BM)中的浆细胞无限度的扩增和富集，进而导致骨坏死。MM受累患者可能经历因骨髓浸润、骨质破坏、肾衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担而经历多种与疾病相关的症状。目前主要的治疗方案为化疗和干细胞移植，化疗药物主要是类固醇、沙利度胺、来那度胺、硼替佐米或多种细胞毒素试剂的组合，对于较年轻的患者可采用高剂量化疗理念配合自体干细胞移植。然而，由于耐药克隆体的不断出现和进化，MM疾病复发仍然是一个主要障碍，显著的不良反应是不可避免的。因此，迫切需要更有效和更少毒性的治疗方法以克服耐药、改善复发难治性MM患者的生活质量、延迟生存期(Cho,S.
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F.,Frontiers in Immunology,9)。
[0005]BCMA(B
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cell maturation antigen)是B细胞成熟抗原，由184个氨基酸残基组成的III型跨膜蛋白，属TNF受体超家族，其配体属于TNF超家族，如增殖诱导配体(APRIL)、B淋巴细胞刺激因子(BAFF)，BCMA与其配体结合后，可激活NF
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κB和MAPK8/JNK信号从而介导B细胞的增殖和存活，对于长寿命浆细胞存活起重要作用。BCMA特异性高表达于晚期B细胞、短寿命增殖浆母细胞和长寿命浆细胞表面，并在一定程度上存在于记忆B细胞上，而在初始B细胞、CD34阳性造血干细胞和其他正常组织细胞中未见报道。研究表明BCMA的表达与血液恶性肿瘤有关，最明显的是多发性骨髓瘤(MM)；BCMA的过表达与MM的发生、发展和差的愈后有关，因此BCMA是MM靶向性治疗的理想靶点(Tai,Immunotherapy,7(11),1187
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1199)。高亲和力的抗体可阻断BCMA和其天然配体BAFF和APRIL之间的结合。抗BCMA sdAb可与使用CAR
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T细胞的细胞免疫疗法组合使用，例如以增强针对肿瘤细胞的细胞毒性作用。目前缺乏效果好、毒性低的抗BCMA的纳米抗体。

技术实现思路

[0006]为克服现有技术中缺乏效果好、毒性低的靶向BCMA的纳米抗体的缺陷，本专利技术提供一种靶向BCMA的纳米抗体及其应用。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术技术方案的第一方面为：一种纳米抗体，其包括含CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区，并具有识别并结合BCMA的功能，且：
[0008]其中，所述CDR1选自以下组：
[0009](1)如SEQ ID NO:4的氨基酸序列所示，或在如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；
[0010](2)如SEQ ID NO:6的氨基酸序列所示，或在如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；
[0011]所述CDR2为如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，或在如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；
[0012]所述CDR3选自如SEQ ID NO:27～52所示的氨基酸序列。
[0013]优选地，当所述CDR1为在如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自G1E、T3I、S5R和S6P/I；当所述CDR1为在如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自F4S/D、S5R和I6F；和/或，当所述CDR2为在如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自I1V、Y2T、S3P/G/T、D4G/E/A、G5S/N、S6R/N/G/T和T7A/P/S。
[0014]在一较佳的具体实施例中，所述CDR1选自如SEQ ID NO:2～7所示的氨基酸序列；所述CDR2选自如SEQ ID NO:8～26所示的氨基酸序列；和/或，所述CDR3选自如SEQ ID NO:27～52所示的氨基酸序列。
[0015]在一更佳的具体实施例中，所述重链可变区包括以下组1到组26中任一组所示的CDR1、CDR2和CDR3：
[0016][0017]在一更佳的具体实施例中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:53～78所示，或与如SEQ ID NO:53～78所示的氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
[0018]在一些实施方式中，本专利技术还提供与本专利技术的任何纳米抗体结合BCMA相同表位的纳米抗体、重链抗体、抗体或其抗原结合片段，即能够与本专利技术的任何纳米抗体交叉竞争与
BCMA的结合的纳米抗体、重链抗体、抗体或其抗原结合片段。
[0019]为解决上述技术问题，本专利技术技术方案的第二方面为：一种BCMA结合分子，其中，所述BCMA结合分子包含如第一方面所述的纳米抗体，例如为包含一条、两条或多条如第一方面所述的纳米抗体的单价或多价纳米抗体、多特异性纳米抗体、重链抗体或其抗原结合片段。
[0020]在一较佳的具体实施例中，所述BCMA结合分子为重链抗体。
[0021]在一更佳的具体实施例中，所述重链抗体的CH2和CH3的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。
[0022]本专利技术中，术语“纳米抗体”代表重链抗体的可变区(重链可变区)。纳米抗体、VHH、单域抗体(sdAb)在本专利技术中代表相同的分子。术语“重链抗体”除包括纳米抗体以外，还包括常规重链的CH2和CH3区本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米抗体，其特征在于，其包括含CDR1、CDR2和/或CDR3的重链可变区，并具有识别并结合BCMA的功能，且其中：所述CDR1选自以下组：(1)如SEQ ID NO:4的氨基酸序列所示，或在如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；(2)如SEQ ID NO:6的氨基酸序列所示，或在如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；所述CDR2为如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，或在如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列发生1～3种氨基酸残基的替换、缺失或增加；所述CDR3选自如SEQ ID NO:27～52所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，当所述CDR1为在如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自G1E、T3I、S5R和S6P/I；当所述CDR1为在如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列上发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自F4S/D、S5R和I6F；和/或，当所述CDR2为在如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列发生1～3种氨基酸残基的替换时，所述替换选自I1V、Y2T、S3P/G/T、D4G/E/A、G5S/N、S6R/N/G/T和T7A/P/S；优选地，所述CDR1选自如SEQ ID NO:2～7所示的氨基酸序列；所述CDR2选自如SEQ ID NO:8～26所示的氨基酸序列；和/或，所述CDR3选自如SEQ ID NO:27～52所示的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的纳米抗体，其特征在于，所述重链可变区包括以下组1到组26中任一组所示的CDR1、CDR2和CDR3：
4.如权利要求1～3任一项所述的纳米抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:53～78所示，或与如SEQ ID NO:53～78的氨基酸序列具有至少80％、90％、95％、96％、97％...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭波，李加国，于海翔，刘祥箴，孙艳，朱伟民，钱其军，
申请(专利权)人：浙江纳米抗体技术中心有限公司，
类型：发明
国别省市：