CTLA-4结合分子及其应用制造技术

本发明专利技术涉及CTLA

【技术实现步骤摘要】
CTLA
‑
4结合分子及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学或生物制药
，更具体地涉及一种细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T
‑
lymphocyte associated antigen 4，CTLA
‑
4)结合分子及其应用。本专利技术的CTLA
‑
4结合分子能够高特异性地结合CTLA
‑
4胞外区，具有较高的亲和力和生物活性，以及低的免疫原性，结构稳定，成药性良好。

技术介绍

[0002]T细胞活化需要两个信号：第一信号由T细胞受体复合物(TCR)识别APC表面的抗原肽
‑
MHC复合物(p
‑
MHC)所启动(Weiss,J.Clin.Invest.86:1015(1990))；第二信号由T细胞和APC间共刺激分子的相互作用所启动(Schwartz,Science248:1349(1990))。最重要的一对共刺激分子是表达在专职APC表面的B7分子和T细胞表面的二聚体分子CD28之间的结合，CD28向T细胞内传递信号可启动T细胞应答，包括促进产生IL
‑
2分子和初始T细胞分化成效应T细胞和记忆T细胞。
[0003]而细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T
‑
lymphocyte associated antigen 4，CTLA
‑
4)与CD28分子同为T细胞表面共刺激受体，属B7分子家族。CTLA
‑
4分子也是免疫球蛋白(Ig)超家族成员，含有单一胞外Ig结构域；CTLA
‑
4包含有6个氨基酸序列MYPPPY，与CD28分子结构具有70％的同源性，两者结合相同的配体，即B7
‑
1(CD80)和B7
‑
2(CD86)。但CTLA
‑
4分子的作用与CD28分子相反，CD28分子表达于静止或活性T细胞，与配体结合后促使T细胞激活及产生细胞因子；而CTLA
‑
4仅表达于激活后的T细胞，其高峰出现在T细胞激活后的24小时左右，而在静止T细胞中几乎检测不到，具有抑制T细胞增殖和减少细胞因子IL
‑
2产生的作用，与维持机体的免疫自稳及外周耐受功能有关(Linsley PS等.J Exp Med，1992,176(6)：1595—1604；Bour
‑
Jordan H等,Immunol Rev,2011,241(1):180
‑
205.)。CTLA
‑
4也在调节性T细胞(treg)中发现，并有助于其抑制功能。同时，CTLA
‑
4比CD28具有更高的结合亲和力，这使其成为一种潜在的自身免疫性疾病的治疗方法。
[0004]鉴于CTLA
‑
4分子的免疫抑制功能，阻断CTLA
‑
4可以增强T细胞的活化和增殖。目前针对CTLA
‑
4分子的药物开发主要以融合蛋白、单克隆抗体、双特异性抗体等为主，分别用于治疗自身免疫性疾病和肿瘤。目前，全球已有2个CTLA
‑
4融合蛋白和1个CTLA
‑
4抗体上市，分别是2005年上市的Orencia(Abatacept)，2011年上市的Nulojix(Belatacept)以及Yervoy(ipilimumab)。其中，Abatacept融合蛋白被批准用于类风湿性关节炎的治疗，可有效地改善症状和体征，并可延缓关节放射学的进展；Belatacept被批准用于预防成人肾移植受者发生急性排斥反应。而ipilimumab单抗则被批准与纳武单抗联合用于包括黑色素，肾癌，肺癌，结直肠癌等癌症的治疗，显示出比单一抗体更优的抗肿瘤效果。在双特异性抗体方面，国内康宁杰瑞开发了针对CTLA
‑
4和PD
‑
L1的双特异性抗体(KN046)，开始进入澳大利亚的I期临床，该抗体还获得了中国国家药品监督管理局的I临床批件，并将进入国内的临床试验。KN046被靶向用于肿瘤微环境，从而减少对人类外周系统的副作用。在临床前研究中，KN046具有绝佳的抗肿瘤功效，与现有的CTLA
‑
4抗体ipilimumab相比，其毒性显著降低。正
在进行的临床试验也显示出其对人类的良好耐受性。
[0005]纳米抗体具有易表达、稳定性高、亲和力高等天然优势，根据纳米抗体自身优势和CTLA
‑
4生物学机制，开发CTLA
‑
4纳米抗体具有非常广阔的应用前景。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供CTLA
‑
4结合分子及其应用。
[0007]本专利技术第一方面提供一种CTLA
‑
4结合分子，包含抗CTLA
‑
4单域抗体，所述单域抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列。
[0008]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:1是GX1X2X3X4X5X6X7，其中，X1为S、L、D、F或G，X2为T、N或S，X3为L、F或S，X4为D、G或E，X5为P、I、S、D或Y，X6为F、Y、H、Q或W，X7为V、D、A或S。
[0009]在一个或多个实施方案中，CDR1包含SEQ ID NO:4
‑
10中任一所示的序列。
[0010]SEQ ID NO:2是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为I或M，X2为N、G、S或R，X3为R、P、S或G，X4为S、N、D或T，X5为R或G，X6为T、A、D、E、R、G或L，X7为I、F、T、S、G、R或无，X8为T或无。
[0011]在一个或多个实施方案中，CDR2包含SEQ ID NO:11
‑
18中任一所示的序列。
[0012]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:3是X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
10
X
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X
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X
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，其中，X1为A、G或T，X2为A、L、S或G，X3为S、G、E、V、A或K，X4为P、R或L，X5为D、E、L、T、I或A，X6为K、R、V、L、S或H，X7为P、A、Y、F、G或Q，X8为F、H、T、V或S，X9为Y、S、L、A、H或M，X
10
为T、I、C、A或W本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CTLA
‑
4结合分子，包含抗CTLA
‑
4单域抗体，所述单域抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列，其中，SEQ ID NO:1是GX1X2X3X4X5X6X7，其中，X1为S、L、D、F或G，X2为T、N或S，X3为L、F或S，X4为D、G或E，X5为P、I、S、D或Y，X6为F、Y、H、Q或W，X7为V、D、A或S，SEQ ID NO:2是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为I或M，X2为N、G、S或R，X3为R、P、S或G，X4为S、N、D或T，X5为R或G，X6为T、A、D、E、R、G或L，X7为I、F、T、S、G、R或无，X8为T或无，SEQ ID NO:3是X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
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X
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，其中，X1为A、G或T，X2为A、L、S或G，X3为S、G、E、V、A或K，X4为P、R或L，X5为D、E、L、T、I或A，X6为K、R、V、L、S或H，X7为P、A、Y、F、G或Q，X8为F、H、T、V或S，X9为Y、S、L、A、H或M，X
10
为T、I、C、A或W，X
11
为D、Y、S、L或V，X
12
为Q、A、L、M或C，X
13
为T、S、N或C，X
14
为M、E、H、Q、A或无，X
15
为C、Y、G、H、A、N或无，X
16
为N、D、M、Y、S、E或无，X
17
为K、I、Y、R、F或无，X
18
为H、D、S、G或无，X
19
为Y、T、D、L或无，X
20
为Y或无，X
21
为G或无，X
22
为Y或无。2.如权利要求1所述的CTLA
‑
4结合分子，其特征在于，所述单域抗体的CDR1包含SEQ ID NO:4
‑
10中任一所示的序列，CDR2包含SEQ ID NO:11
‑
18中任一所示的序列，和CDR3包含SEQ ID NO:19
‑
26中任一所示的序列，优选地，所述单域抗体含有以下组a1到组a9中任一组的SEQ ID NO所示的CDR1、CDR2和CDR3：CDR3：3.如权利要求1或2所述的CTLA
‑
4结合分子，其特征在于，所述单域抗体的FR区包含选自SEQ ID NO:27
‑
73的任一VHH的FR区，和/或所述单域抗体VHH如SEQ ID NO:27
‑
7...

【专利技术属性】
技术研发人员：李加国，朱伟民，孙艳，钱其军，
申请(专利权)人：浙江纳米抗体技术中心有限公司，
类型：发明
国别省市：