一种抗人CD137抗体、核酸分子及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人CD137抗体、核酸分子及应用，涉及生物医药技术领域。该抗体可交叉结合猴CD137，表现出偏弱的协同刺激T细胞刺激的活性，该克隆命名为BXME8，具有独特的可变区序列，其对CD137分子的天然配受体结合有封阻活性，为“封阻型”抗体。本发明专利技术实现了全抗体真核表达、纯化批量制备，抗体可用于人或猴CD137检测，在功能上表现出较为温和的协同刺激T细胞活化、增殖，显示出对CD8+T细胞的选择扩增作用，基于该抗体的全长序列可以实施进一步的工程化改造、表达和应用，具有潜在的体内外适宜免疫调节活性。外适宜免疫调节活性。外适宜免疫调节活性。

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CD137抗体、核酸分子及应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及一种抗人CD137抗体、核酸分子及应用。

技术介绍

[0002]肿瘤的免疫治疗获得突破进展，T细胞是主要效应细胞，近几年来以PD
‑
1抗体为代表的T细胞免疫调节抗体快速进入临床，广谱用于肿瘤治疗，但有效人群比例较低，在最大适应症肺癌有效率约为18％。联合免疫治疗是提高疗效的发展方向，包括PD
‑
1抗体联合化疗、放疗、抗血管生成药物和联合治疗策略，此对于扩大收益人群，延长病人存活、甚至治愈肿瘤具有现实意义，也是国际公认的研究方向。
[0003]1993年Kwon首先从CD8+T细胞克隆出了4
‑
1BB(CD137)，具有协同刺激T细胞作用，随后报道了CD137抗体体内具有调节免疫、根除小鼠肿瘤移植模型效能，随后临床前系列抗肿瘤治疗研究中显现了该靶点抗体优异的抗肿瘤活性，包括低免疫原性肿瘤。CD137分子调控因此成为最受关注的抗肿瘤免疫调控靶点之一。CD137是一个经典的T细胞协同活化分子，呈抗原诱导性表达，特别是偏于CD8+T细胞表达，其调控有助于CD8+T细胞存活，促进记忆T细胞分化，CD8+T细胞是抗肿瘤的核心效应细胞。CD137分子被引入嵌合抗原受体T细胞(CAR
‑
T cells,Chimeric Antigen Receptor T
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Cells)被认为是迄今CAR
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T细胞的最佳调节分子，也显示出该分子对肿瘤免疫调控治疗具有重要意义。CD137一直以来是受到高度关注的免疫调节点，包括肿瘤和某些自身免疫病治疗潜力，其抗体调节制剂是最主要的应用形式。
[0004]Urelumab是第一个准入临床的CD137抗体，充分表现出高效的体内免疫T细胞免疫激活能力，超强的免疫激活甚至出现一定的免疫过激反应，随后，另一个不同的抗体Utomilumab准入临床实验，但其临床效果不及Urelumab，这两个抗体仍在持续的临床验证中[1,2]。基于此，国际上正立足开发更好临床效果的CD137抗体，近来报道有新的CD137抗体进入临床前研究，考量进入临床可能，包括CD137单独和PD
‑
1联合治疗，表现出对新型抗体的渴望及其研发的发展趋向[3]。
[0005]立足近年基础研究分析，早期产生的Urelumab和Utomilumab特异性结合位点存在明显的不同点，一个是天然配受体非封阻性，另一个则具有天然配受体封阻性，这可能导致不同的免疫治疗效果和毒性反应，平衡协同刺激效能和毒性反应，这是临床需要考量的重要问题。鉴于上述超强的协同刺激CD137抗体的系统应用(即，静脉用药)可能产生免疫过激活化现象，产生系统炎症副反应，而适度刺激强度的协同刺激CD137抗体，增加安全性，也适于导向肿瘤，进一步降低用量，有效的进行局部免疫调节[4]，有可能避免系统应用过程中的伴随毒性。就抗体本身而言，急切需要认知个性化CD137抗体“强”协同刺激T细胞和“弱”协同刺激T细胞产生的机理和分子基础，才可能适于不同需要的临床检测和治疗应用，基于这些新的认知，需要产出特征鲜明的新一代抗人CD137单克隆抗体。这一过程通常是从众多CD137抗体中“精细”筛选出差异性和特征鲜明的CD137抗体克隆，而活性特点根本上由抗体
克隆独特序列、并与其形成独特空间结构的个性密切相关。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种抗人CD137抗体，被命名为BXME8，该抗体具有明显“偏弱”协同刺激T细胞刺激活性，具有突出的特点。对抗人CD137的天然配受体结合有封阻活性，为“封阻型”抗体，且全抗体实现了真核表达、纯化批量制备，可用于人和猴CD137检测，在功能上仍能适宜地协同刺激T细胞活化、增殖，尤其是用于扩增CD8+T细胞，抗体的全长序列可以进一步工程化改造表达。
[0008]除非另外定义，在此使用的所有技术术语、注释以及其他科学术语或科学术语是旨在具有本专利技术涉及领域普通技术人员所通常理解的含义。在一些情况中，为了清楚和/或为了便于引用在此定义了具有通常理解含义的术语，并且在此包括这类定义不必解释成表示与本领域通常理解的具有显著差异。在此说明或引用的许多技术和步骤被本领域普通技术人员良好地理解并且使用常规方法一般性地使用。除非另外说明，通常地根据制造商限定的实验方案和/或参数来执行涉及使用可商购的试剂盒和试剂的步骤。
[0009]本专利技术是这样实现的：
[0010]专利技术人通过对一组抗人CD137抗体比较研究，探寻了具有不同协同活性特征且特征独特的抗体，特别是对抗体结合CD137胞外区CRDs(cysteine rich domains)进行了作图，明确抗体结合CD137
‑
CRD的结构分区，印证了不同抗体克隆协同刺激活性与配受体结合封阻性无关，同时靠近结合CD137
‑
CRDI抗体也不是产生高协同刺激活性的主要原因，显示不同协同抗体免疫协同刺激活性抗体产生，具有高度的空间结构依赖性。成功筛选出其中一株明显偏弱协同刺激T细胞刺激活性的CD137抗体(命名为：BXME8)，特点突出，获取了该抗体特异性可变区序列。本专利技术将系统介绍该株抗体特点及基本特征、生产制备，并提供其应用范围。
[0011]第一方面，本专利技术提供了一种抗人CD137的抗体或其功能性片段，该抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
[0012]CDR
‑
VH1：SYWIN；
[0013]CDR
‑
VH2：NIYPSDSYTNYNQKFKD；
[0014]CDR
‑
VH3：FYYGGSYYAMDY；
[0015]CDR
‑
VL1：RASQDISNYLN；
[0016]CDR
‑
VL2：YTSRLHS；
[0017]CDR
‑
VL3：QQGYTLPYT。
[0018]本专利技术提供了一种新型抗人CD137(也称为抗人4
‑
1BB)抗体，该抗体可交叉结合猴(Rhesus)天然CD137膜表达蛋白，对人T细胞活化特征偏弱，专利技术人将其命名为克隆BXME8，该单克隆抗体有独特的可变区序列，对该分子的天然配受体结合有封阻活性，为“封阻型”抗体，全抗体实现了真核表达、纯化批量制备，可用于人和猴4
‑
1BB检测，在功能上适度协同刺激T细胞活化、增殖，尤其是用于激活CD8+T细胞的扩增，抗体的全长序列可以进一步工程化改造表达。
[0019]本专利技术提供的BXME8抗体具有较高的亲和力，为CD137靶点相关的癌症治疗提供了
一种新的抗体选择。
[0020]术语“抗体”特别地是指包含通过二硫键连接的至少两个重链和两个轻链的蛋白质。术语“抗体”包括天然产生的抗体以及抗体的重组形式，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD137的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：CDR
‑
VH1：SYWIN；CDR
‑
VH2：NIYPSDSYTNYNQKFKD；CDR
‑
VH3：FYYGGSYYAMDY；CDR
‑
VL1：RASQDISNYLN；CDR
‑
VL2：YTSRLHS；CDR
‑
VL3：QQGYTLPYT。2.根据权利要求1所述的抗人CD137的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体包括序列依次如SEQ ID NO:1
‑
4所示的轻链骨架区FR1
‑
L、FR2
‑
L、FR3
‑
L及FR4
‑
L，和/或，序列依次如SEQ ID NO:5
‑
8所示的重链骨架区FR1
‑
H、FR2
‑
H、FR3
‑
H及FR4
‑
H；优选地，所述抗体还包括恒定区；优选地，所述恒定区选自IgM、IgD、IgG、IgA和IgE中的任意一种的恒定区；优选地，所述恒定区的种属来源为小鼠；所述恒定区的轻链恒定区的序列如SEQ ID NO.9所示，所述恒定区的重链恒定区的序列如SEQ ID NO.10所示；优选地，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、双特异性抗体和scFv中的任意一种。3.一种检测CD137蛋白的试剂或试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1
‑
2任一项所述的抗人CD137的抗体或其功能性片段。4.一种如权利要求1
‑
2任一项所述的抗人CD137的抗体或其功能性片段在如下任一项中的应用：(1)扩增T细胞亚群；(2)制备促进T淋巴细胞IFN
‑
γ分泌产品；(3)制备促进T淋巴细胞IL
‑
10分泌产品；(4)制备促进T淋巴细胞活化和/或增殖产品；(5)制备检测CD137产品；(6)制备免疫调节和联合免疫调节治疗药物；优选地，所述T细胞亚群选自：CD4+T细胞和CD8+T细胞中的至少一种；优选地，所述T细胞亚群选自CD8...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪涛，金鑫，王敬慧，易玲，闫卓红，王小珏，韦攀健，杨斌，
申请(专利权)人：北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：