人表皮生长因子受体结合分子及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种人表皮生长因子受体结合分子及其应用。本发明专利技术的人表皮生长因子受体结合分子包含抗人表皮生长因子受体单域抗体，所述单域抗体的互补决定区CDR包括SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2、和SEQ ID NO:3所示的CDR3。本发明专利技术还提供编码所述结合分子的多核苷酸、含有所述多核苷酸的核酸构建物，以及相应的噬菌体、宿主细胞、药物组合物、生产方法、非诊断性方法和用途。非诊断性方法和用途。非诊断性方法和用途。

【技术实现步骤摘要】
人表皮生长因子受体结合分子及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学或生物制药
，更具体地涉及一种人表皮生长因子受体(EGFR)结合分子及其应用。

技术介绍

[0002]人表皮生长因子受体(EGFR，epidermal growth factor receptor，简称为EGFR、ErbB
‑
1或HER1)是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。该家族包括HER1(erbB1，EGFR)、HER2(erbB2，NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。EGFR表达于正常上皮细胞表面，在许多实体肿瘤细胞中存在EGFR的高表达或异常表达，包括头颈癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、肾癌、结肠癌以及非小细胞肺癌等，尤其是肺癌，亚裔肺癌人群中EGFR突变率可达到50％(Seshacharyulu P等,Expert Opin Ther Targets,2012；16:15
–
31)。EGFR是肿瘤靶向治疗的热门靶点。
[0003]EGFR位于细胞膜表面，通过与配体结合来激活，其配体包括EGF和TGFα。激活后，EGFR由单体转化为二聚体，尽管也有证据表明，激活前也存在二聚体。EGFR还可能和ErbB受体家族的其他成员聚合来激活。EGFR二聚后可以激活它位于细胞内的激酶通路，包括Y992、Y1045、Y1068、Y1148和Y1173等激活位点，自磷酸化可以引导下游的磷酸化，包括MAPK、Akt和JNK通路。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。EGFR下游的信号转导通路主要有两条：一条是Ras/Raf/MEK/ERK
‑
MAPK通路，而另一条是PI3K/Akt/mTOR通路(R Roskoski Jr.Pharmacological research,2014:79:34
–
74.)。
[0004]目前，全球范围内批准上市的EGFR单抗共4个，即西妥昔单抗、帕尼单抗、耐昔妥珠单抗和尼妥珠单抗。主要用于治疗直肠癌、头颈癌。有研究表明，EGFR胞外段非常容易发生突变，容易产生耐药性。而纳米抗体结合表位要比scFv抗体结合表位小许多，受突变的影响较小，能够一定程度上提高EGFR有效抗肿瘤活性。且纳米抗体具有稳定性高、穿透力强、结合表位广的天然优势(Muyldermans S.Annu Rev Biochem.2013；82:775
‑
97.)，针对EGFR近膜端的纳米抗体还鲜有研究。开发一种新型抗人表皮生长因子受体纳米抗体，使其具有较好的特异性、阻断活性、临床药效，并且生产简便、成本低、减轻用药负担，已经成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种新型抗人表皮生长因子受体结合分子及其应用。
[0006]本专利技术第一方面提供一种人表皮生长因子受体结合分子，包含抗人表皮生长因子受体单域抗体，所述单域抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列。
[0007]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:1是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为G，X2为S、F、G、L或R，X3为G、T、V、P、A、S或I，X4为F、L或D，X5为T、S、E、D、L或I，X6为I、D、S或T，X7为Q、Y、H或
F，X8为A或T。
[0008]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:1是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为G，X2为F或L，X3为T、P或A，X4为F或L，X5为S、E、D、L或I，X6为D或T，X7为Y，X8为A或T。
[0009]在一个或多个实施方案中，CDR1包含SEQ ID NO:4
‑
12中任一所示的序列。优选地，CDR1包含SEQ ID NO:5、7、8、9、11中任一所示的序列。
[0010]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:2是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为I、L、V，X2为H、T、F、A或S，X3为Q、G、S、P、T、I或N，X4为G、T、D、A、S或Y，X5为G、H、E或N，X6为S、E、K、D、G或A，X7为T、H、I、K、S或无，X8为S、T、I、P或无。
[0011]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:2是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为I或L，X2为T、F、A或S，X3为G、S、P、T或I，X4为T、D、A或S，X5为G或E，X6为E、K、D或G，X7为T、H、I、K、S或无，X8为S、T、I或P。
[0012]在一个或多个实施方案中，CDR2包含SEQ ID NO:13
‑
21中任一所示的序列。优选地，CDR2包含SEQ ID NO:14、16、17、18、20中任一所示的序列。
[0013]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:3是X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
10
X
11
X
12
X
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X
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X
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X
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X
25
，其中，X1为N、S、A、K或H，X2为V、I、R、K、A或L，X3为V、Y、S、D、L、T或N，X4为P、H、L、V、S、K或Y，X5为P、Y、S、R、T或A，X6为L、P、T、F、A、S或D，X7为R、P、F、S、A、I或D，X8为V、D、G、A或Y，X9为Y、N、T、R、F或无，X
10
为P、A、W、E或无，X
11
为S、H、L、Y或无，X
12
为F、D、N、L或无，X
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为Y、V或无，X
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为I、G或无，X
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为G或无，X
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为Y、A或无，X
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为G或无，X
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为G或无，X
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为G或无，X
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为E或无，X
21
为V或无，X
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为R或无，X
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为Y或无，X
24
为E或无，X
25
为Y或无。
[0014]在一个或多个实施方案中，SEQ ID NO:3是X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
10
X
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15<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人表皮生长因子受体结合分子，包含抗人表皮生长因子受体单域抗体，所述单域抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列，其中，SEQ ID NO:1是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为G，X2为S、F、G、L或R，X3为G、T、V、P、A、S或I，X4为F、L或D，X5为T、S、E、D、L或I，X6为I、D、S或T，X7为Q、Y、H或F，X8为A或T；SEQ ID NO:2是X1X2X3X4X5X6X7X8，其中，X1为I、L或V，X2为H、T、F、A或S，X3为Q、G、S、P、T、I或N，X4为G、T、D、A、S或Y，X5为G、H、E或N，X6为S、E、K、D、G或A，X7为T、H、I、K、S或无，X8为S、T、I、P或无；SEQ ID NO:3是X1X2X3X4X5X6X7X8X9X
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，其中，X1为N、S、A、K或H，X2为V、I、R、K、A或L，X3为V、Y、S、D、L、T或N，X4为P、H、L、V、S、K或Y，X5为P、Y、S、R、T或A，X6为L、P、T、F、A、S或D，X7为R、P、F、S、A、I或D，X8为V、D、G、A或Y，X9为Y、N、T、R、F或无，X
10
为P、A、W、E或无，X
11
为S、H、L、Y或无，X
12
为F、D、N、L或无，X
13
为Y、V或无，X
14
为I、G或无，X
15
为G或无，X
16
为Y、A或无，X
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为G或无，X
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为G或无，X
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为G或无，X
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为E或无，X
21
为V或无，X
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为R或无，X
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为Y或无，X
24
为E或无，X
25
为Y或无。2.如权利要求1所述的人表皮生长因子受体结合分子，其特征在于，所述单域抗体的CDR1包含SEQ ID NO:4
‑
12中任一所示的序列，CDR2包含SEQ ID NO:13
‑
21中任一所示的序列，和CDR3包含SEQ ID NO:22
‑
30中任一所示的序列，优选地，所述单域抗体含有以下组a1到组a9中任一组的SEQ ID NO所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李加国，刘祥箴，朱伟民，孙艳，丁娜，钱其军，
申请(专利权)人：浙江纳米抗体技术中心有限公司，
类型：发明
国别省市：