一种白及多糖及其制备方法和应用、包含所述白及多糖的免疫佐剂和纳米疫苗技术

本发明专利技术提供了一种白及多糖及其制备方法和应用、包含所述白及多糖的免疫佐剂和纳米疫苗，属于免疫调节技术领域。本发明专利技术的白及多糖具有免疫调节作用，本发明专利技术的白及多糖和蛋白疫苗混合后，会发生自组装现象生成纳米疫苗，自组装后的纳米疫苗为较为均一的圆形颗粒。利用纳米疫苗免疫小鼠时，其能够通过激活抗原呈递细胞(APCs)并提高其对抗原的摄取，该纳米疫苗产生了比传统疫苗强2～10倍的抗体和细胞应答。答。答。

【技术实现步骤摘要】
一种白及多糖及其制备方法和应用、包含所述白及多糖的免疫佐剂和纳米疫苗


[0001]本专利技术涉及免疫调节
，尤其涉及一种白及多糖及其制备方法和应用、包含所述白及多糖的免疫佐剂和纳米疫苗。

技术介绍

[0002]中药白及为兰科(Orhidaceae)植物白及属(Bletilla)白及Bletilla striata (Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，具有收敛止血，消肿生肌，补肺止咳的功效。目前文献报道的白及属的主要化学成分为联苄(bibenzyls)、菲类(phenanthrenes)及其衍生物、甾体皂苷、三萜、黄酮、花青素等，共150余种。这些成分在后续的研究中表现出多样的生物活性，如抗炎、抗氧化，抗菌、止血、抗肿瘤和抑制络氨酸酶等。
[0003]白及富含多糖，目前报道的白及多糖骨架类型主要为1,2
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或1,4
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链接甘露糖残基与葡萄糖残基1,4
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链接方式，传统白及多糖的制备与应用多集中在伤口愈合方面，或者作为加工代血浆、血管栓塞剂用于肿瘤的介入治疗。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种白及多糖及其制备方法和应用、包含所述白及多糖的免疫佐剂和纳米疫苗，本专利技术提供的白及多糖具有免疫调节作用。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种白及多糖，化学结构式如式I所示；所述白及多糖的相对分子量为42.0～42.5KDa；
[0007][0008]优选的，所述白及多糖的相对分子量为42.4KDa。
[0009]本专利技术还提供了上述方案所述白及多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0010]1)对白及块茎粉进行脱脂处理，得到脱脂原料；
[0011]2)将所述脱脂原料和水混合进行水提，得到水提液；
[0012]3)采用乙醇对所述水提液进行醇沉，固液分离，收集沉淀；
[0013]4)对所述沉淀进行脱蛋白处理，得到白及粗多糖；
[0014]5)依次采用水和浓度为0.05mol/L的NaCl水溶液对所述白及粗多糖进行第一色谱柱层析，收集NaCl水溶液的洗脱部分；采用水对NaCl水溶液的洗脱部分进行第二色谱柱层析，收集洗脱液，对所述洗脱液进行HPLC
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ELSD 检测，收集出峰时间为9.32min的组分，得到白及多糖。
[0015]优选的，步骤3)中所述采用乙醇对所述水提液进行醇沉包括：对所述水提液依次进行过滤和浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液和乙醇混合，得到混合液，静置进行醇沉；所述混合液中乙醇的体积浓度＞70％。
[0016]优选的，步骤4)中所述脱蛋白处理包括：对所述沉淀复溶，得到复溶液；将所述复溶液与Sevage试剂按照体积比为4：1的比例混合、振荡、离心，变性后的蛋白质介于复溶液与Sevage试剂交界处；所述Sevage试剂是将氯仿和正丁醇按照4：1的体积比混合得到。
[0017]本专利技术还提供了上述方案所述白及多糖或者上述方案所述制备方法制备得到的白及多糖在制备免疫调节产品中的应用。
[0018]优选的，所述免疫调节产品包括免疫调节药品、免疫调节化妆品或免疫调节功能食品。
[0019]本专利技术还提供了上述方案所述白及多糖或者上述方案所述制备方法制备得到的白及多糖作为免疫佐剂在制备疫苗中的应用。
[0020]本专利技术还提供了一种纳米疫苗，包括多糖和蛋白疫苗，所述多糖为上述方案所述白及多糖或者上述方案所述制备方法制备得到的白及多糖。
[0021]优选的，所述蛋白疫苗包括SARS
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CoV
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2RBD蛋白。
[0022]本专利技术提供了一种白及多糖。本专利技术的白及多糖具有免疫调节作用，本专利技术的白及多糖和蛋白疫苗混合后，会发生自组装现象生成纳米疫苗，自组装后的纳米疫苗为较为均一的圆形颗粒。利用纳米疫苗免疫小鼠时，其能够通过激活抗原呈递细胞(APCs)并提高其对抗原的摄取，该纳米疫苗产生了比传统疫苗强2～10倍的抗体和细胞应答。
附图说明
[0023]图1为实施例1中白及多糖提取的流程图；
[0024]图2为实施例1中白及多糖分离纯化的流程图；
[0025]图3为BPS纯品HPLC图谱；
[0026]图4为BPS纯品PMP
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HPLC图谱；
[0027]图5为BPS纯品IR图谱；
[0028]图6为BPS纯品UV图谱；
[0029]图7表示BPS纯品中所有的氢质子信号；
[0030]图8表示BPS纯品中所有的氢原子信号；
[0031]图9表示BPS纯品中碳与其附着氢质子之间的关联性；
[0032]图10表示BPS纯品中氢质子与碳(包括非质子碳、远离质子的两个或三个键)之间的关联；
[0033]图11表示BPS纯品中氢质子与氢质子之间的关联；
[0034]图12表示BPS纯品中从质子到直接连接到碳以及同一质子自旋系统中的质子碳的碳维度的关联；
[0035]图13为BPS纯品与SARS
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CoV
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2RBD蛋白自组装电镜图谱；标尺为 500nm；
[0036]图14为BPS与SARS
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CoV
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2RBD蛋白形成的纳米疫苗的免疫调节活性结果。
具体实施方式
[0037]本专利技术提供了一种白及多糖，化学结构式如式I所示；所述白及多糖的相对分子量为42.0～42.5KDa；
[0038][0039]在本专利技术中，所述白及多糖的相对分子量优选为42.4KDa。
[0040]在本专利技术中，所述白及多糖的单糖构成为甘露糖：葡萄糖＝3.08：1；所述白及多糖的重复序列为1,4
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β
‑
D
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葡萄糖(A)、1,4,6
‑
β
‑
D
‑
甘露糖(C)和1,4
‑
β
‑
D
‑ꢀ
甘露糖(B)按式I的重复单元为主链，单元(C)上乙酰基摩尔百分比含量为7.54％。
[0041]本专利技术还提供了上述方案所述白及多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0042]1)对白及块茎粉进行脱脂处理，得到脱脂原料；
[0043]2)将所述脱脂原料和水混合进行水提，得到水提液；
[0044]3)采用乙醇对所述水提液进行醇沉，固液分离，收集沉淀；
[0045]4)对所述沉淀进行脱蛋白处理，得到白及粗多糖；
[0046]5)依次采用水和浓度为0.05mol/L的NaCl水溶液对所述白及粗多糖进行第一色谱柱层析，收集NaCl水溶液的洗脱部分；采用水对NaCl水溶液的洗脱部分进行第二色谱柱层析，收集洗脱液，对所述洗脱液进行HPLC
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ELSD 检测，收集本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白及多糖，化学结构式如式I所示；所述白及多糖的相对分子量为42.0～42.5KDa；2.根据权利要求1所述的白及多糖，其特征在于，所述白及多糖的相对分子量为42.4KDa。3.权利要求1或2所述白及多糖的制备方法，包括以下步骤：1)对白及块茎粉进行脱脂处理，得到脱脂原料；2)将所述脱脂原料和水混合进行水提，得到水提液；3)采用乙醇对所述水提液进行醇沉，固液分离，收集沉淀；4)对所述沉淀进行脱蛋白处理，得到白及粗多糖；5)依次采用水和浓度为0.05mol/L的NaCl水溶液对所述白及粗多糖进行第一色谱柱层析，收集NaCl水溶液的洗脱部分；采用水对NaCl水溶液的洗脱部分进行第二色谱柱层析，收集洗脱液，对所述洗脱液进行HPLC
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ELSD检测，收集出峰时间为9.32min的组分，得到白及多糖。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述采用乙醇对所述水提液进行醇沉包括：对所述水提液依次进行过滤和浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液和乙醇混合，得到混合液，静置进行醇沉；所述混合液...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡江苗，刘野，杨柳，陈思思，李金玉，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：