一种制备2制造技术

本发明专利技术公开了一种制备2

【技术实现步骤摘要】
一种制备2
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脱氧
‑2’‑
氟
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β
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D
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阿拉伯糖腺苷类似物的方法


[0001]本专利技术属于医药
，特别是涉及一种制备2
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脱氧
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氟
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β
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D
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阿拉伯糖腺苷类似物的方法。

技术介绍

[0002]2’‑
脱氧
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氟
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β
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D
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阿拉伯糖腺苷类似物是一种核苷类似物，其具有良好的抗病毒以及抗肿瘤活性，能够有效地嵌入病毒的DNA链以及RNA链中，从而抑制细胞的分裂和复制。
[0003]RNA干扰作为一种控制正常基因表达的技术，近年来多用于肿瘤、传染病和代谢性疾病的治疗。然而，RNA干扰技术仍然存在一定的发展障碍，如1）寡核苷酸会被核酸酶降解；2）与靶RNA的结合选择性和稳定性差；3）触发不必要的免疫反应；4）转运和结合蛋白存在一定的障碍。经过化学修饰后的核苷酸可以解决上面提到的一些障碍。在修饰的化学基团中，2'
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脱氧
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2'
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氟
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β
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D
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阿拉伯糖修饰的核苷具有独特的RNA干扰特性，2'
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脱氧
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2'
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氟
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β
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Dr/>‑
阿拉伯糖修饰的核苷酸拆入合成的siRNA效果是普通siRNA的4倍多，在血清中的半衰期大概有6h，是普通siRNA半衰期的24倍多。因此，使用2'
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脱氧
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2'
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氟
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β
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阿拉伯糖对核苷酸进行化学修饰，是克服RNA干扰技术的较佳选择。
[0004]目前，2
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脱氧
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β
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阿拉伯糖腺苷类似物一般采用化学合成法和酶法合成。化学合成法是一个多步骤过程，为了实现区域和立体选择性，需要进行保护与脱保护基团的过程，操作步骤复杂，成本高昂，容易产生有毒有害物质，对环境造成污染。酶法合成由于其高度的区域选择性、立体选择性、温和的反应条件、绿色环保无污染等因素越来越受到人们的重视，但是，2
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脱氧
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β
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阿拉伯糖腺苷类似物的酶法合成中表现出了底物转化率低的缺点，这严重地限制了其在制备和生产上的应用。
[0005]现有技术中，酶法合成2'
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脱氧
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2'
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氟
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β
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阿拉伯糖腺苷及其类似物以2'
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脱氧
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β
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阿拉伯糖尿苷为底物，在核苷磷酸化酶的转糖基作用下生成产物。但是E.coli的嘌呤核苷磷酸化酶（PNP,EC.2.4.2.1）和嘧啶核苷磷酸化酶（PyNP,EC.2.4.2.2）在以2'
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脱氧
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2'
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氟
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β
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阿拉伯糖修饰的核苷酸为底物时转化率很低，限制了其大规模应用。
[0006]因此，本领域需要开发一种新的2
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脱氧
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氟
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β
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阿拉伯糖腺苷类似物的制备方法。

技术实现思路

[0007]为解决以上技术问题，本专利技术提供了一种2
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脱氧
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氟
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β
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阿拉伯糖腺苷类似物的制备方法，包括如下步骤：步骤1：在液态反应体系中，以式II化合物和式III化合物为底物，在脱氧核糖转移酶NDT的催化下进行酶催化反应，形成式I化合物；其中，R选自NH2、Cl、S或F；
步骤2：从所述步骤1的反应后的反应体系中分离出式I化合物；其中，所述脱氧核糖转移酶NDT的Genbank序号为WP_011253881.1，所述式II化合物为2
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脱氧
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氟
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阿拉伯糖尿苷，所述式III化合物为腺嘌呤类似物。
[0008]在一些实施方式中，所述式II化合物浓度为0.1
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500g/L。较佳地，所述式II化合物浓度为0.1g/L以上、0.2g/L以上、0.5g/L以上、1g/L以上、10g/L以上、25g/L以上、50g/L以上、75g/L以上、100g/L以上、125g/L以上、150g/L以上、175g/L以上、200g/L以上、220g/L以上、240g/L以上、260g/L以上、280g/L以上、300g/L以上、320g/L以上、350g/L以上、400g/L以上、或450g/L以上。
[0009]较佳地，所述式II化合物浓度为1
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500g/L；更佳地，所述式II化合物浓度为10
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400g/L；最佳地，所述式II化合物浓度为50
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350g/L。
[0010]在一些实施方式中，所述式II化合物与式III化合物的摩尔比为1：（1~10）。较佳地，所述式II化合物与式III化合物的摩尔比为1：（1.1~5）。更佳地，所述式II化合物与式III化合物的摩尔比为1：（1.5~3）。
[0011]在一些实施方式中，所述脱氧核糖转移酶NDT与所述式II化合物的质量比(w/w)为（0.1~10）：1。较佳地，所述脱氧核糖转移酶NDT与所述式II化合物的质量比(w/w)为（0.1~5）：1。更佳地，所述脱氧核糖转移酶NDT与所述式II化合物的质量比(w/w)为（0.5~2）：1。
[0012]在一些实施方式中，所述液态反应体系为水性体系。较佳地，所述水性体系含有缓冲液。
[0013]在一些实施方式中，所述液态反应体系的缓冲液为柠檬酸
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柠檬酸钠缓冲液、Na2HPO4‑
NaOH磷酸氢二钠
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氢氧化钠缓冲液或三羟甲基甲胺盐缓冲液。较佳地，所述反应体系的缓冲液为三羟甲基甲胺盐缓冲液（Tris
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HCl）。
[0014]在一些实施方式中，所述步骤1中，酶催化反应的温度为20℃~90℃。较佳地，酶催化反应的温度为40℃~80℃。更佳地，酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备2
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脱氧
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氟
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β
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D
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阿拉伯糖腺苷类似物的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：在液态反应体系中，以式II化合物和式III化合物为底物，在脱氧核糖转移酶NDT的催化下进行酶催化反应，形成式I化合物；其中，R选自NH2、Cl、S或F；步骤2：从所述步骤1的反应后的反应体系中分离出式I化合物；其中，所述脱氧核糖转移酶NDT的Genbank序号为WP_011253881.1，所述式II化合物为2
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脱氧
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氟
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β
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阿拉伯糖尿苷，所述式III化合物为腺嘌呤类似物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式II化合物浓度为1~500g/L。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，式II化合物与式III化合物的摩尔比为1：（1~10）。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱氧核糖转移酶NDT与所述式II化合物的质量比为（0.1~10）：1。5.如权利要求1所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张波琨，谢磊，李杰，黄月园，孙丰来，谈宏宇，
申请(专利权)人：常州合全药业有限公司，
类型：发明
国别省市：