【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，具体涉及一种葡萄糖脱氢酶突变体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、传统的化学合成被广泛用于生产操作复杂、对环境有害的化学品。酶法因其条件温和、催化效率高、特异性好而成为一种替代方法。其中，氧化还原酶作为一种重要的酶，可以催化氧化还原反应生成各种化合物。氧化还原酶由于其高度的选择性特异性、催化活性和可持续发展，越来越多地被用作催化氧化还原反应的有力工具，常用于高价值药物和高分子材料的生产。大多数氧化还原酶使用还原烟酰胺(nad(p)h)作为辅因子。在实际应用中，需要人为添加辅助因子来实现氧化还原酶的连续催化。然而，辅因子的高成本和稳定性差严重限制了其大规模应用。因此，有必要构建低成本、高效的nad(p)h再生系统，以维持氧化还原平衡，提高化学品的产量。
2、葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase,gdh)是一种nad(p)+依赖的氧化还原酶，作为生物催化中重要的辅助酶，用于氧化还原酶催化反应中还原烟酰胺辅因子的再生。在葡萄糖检测试剂盒、葡萄糖生物传感器、辅因子再生和生物燃料细胞中都有应用。然而，低催化效率阻碍了gdh在工业应用中的应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种葡萄糖脱氢酶突变体及其制备方法和应用，能用于氧化还原酶催化反应中还原烟酰胺辅因子的再生，提高催化效率。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用了以下技术方案：
3、一种葡萄糖脱氢酶突变体，其是将野生型葡萄糖脱氢酶氨基酸序列中的第1
4、根据易错pcr方法对野生型葡萄糖脱氢酶基因进行突变，从而获得该葡萄糖脱氢酶突变体目的基因，上述葡萄糖脱氢酶突变体基因的核苷酸序列如seq id no:3所示。
5、上述葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如seq id no:4所示。
6、同时，本专利技术还提供一种含有上述葡萄糖脱氢酶突变体的重组载体。
7、还提供一种生产上述葡萄糖脱氢酶突变体的基因工程菌，该基因工程菌中包含上述葡萄糖脱氢酶突变体基因或上述重组载体；该基因工程菌的宿主细胞为大肠埃希氏菌(escherichia coli)bl21(de3)。
8、另外，本专利技术还提供上述葡萄糖脱氢酶突变体基因或重组载体或基因工程菌在制备葡萄糖脱氢酶中的应用。
9、提供一种葡萄糖脱氢酶突变体的制备方法，包括培养上述基因工程菌，获得重组表达的葡萄糖脱氢酶突变体；还包括在发酵条件下，制备葡萄糖脱氢酶的步骤。
10、最后，本专利技术记载了上述葡萄糖脱氢酶突变体在氧化还原反应中辅酶nadh以及nadph的再生中的应用。
11、上述技术方案中提供的葡萄糖脱氢酶突变体，用于氧化还原反应中辅酶nadph的再生时，其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的活力，野生型的酶活为6.05u/mg、突变体的酶活为7.42u/mg，较野生型提高了22.64％。用于氧化还原反应中辅酶nadh的再生时，其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的活力，野生型的酶活为16.04u/mg、突变体的酶活为17.77u/mg，较野生型提高了10.79％。
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1.一种葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其是将野生型葡萄糖脱氢酶氨基酸序列中的第115位的苏氨酸突变成缬氨酸获得的，该野生型葡萄糖脱氢酶的核苷酸序列如SEQ IDNo:1所示，氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。
2.一种如权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNo:3所示。
3.一种如权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNo:4所示。
4.含有权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶突变体的重组载体。
5.一种生产权利要求3所述的葡萄糖脱氢酶突变体的基因工程菌，其特征在于：该基因工程菌中包含权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶突变体或权利要求4所述的重组载体。
6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于：基因工程菌的宿主细胞为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21(DE3)。
7.权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶突变体、权利要求4所述的重组载体、权利要求5～6中任一项所述的基因工程菌在制备葡萄糖脱氢酶中的应用。
8.一种葡萄
9.根据权利要求8中所述的方法，其特征在于：包括在发酵条件下，制备葡萄糖脱氢酶的步骤。
10.权利要求2或3所述的葡萄糖脱氢酶突变体在氧化还原反应中辅酶NADH以及NADPH的再生中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其是将野生型葡萄糖脱氢酶氨基酸序列中的第115位的苏氨酸突变成缬氨酸获得的，该野生型葡萄糖脱氢酶的核苷酸序列如seq idno:1所示，氨基酸序列如seq id no:2所示。
2.一种如权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其核苷酸序列如seqidno:3所示。
3.一种如权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如seqidno:4所示。
4.含有权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶突变体的重组载体。
5.一种生产权利要求3所述的葡萄糖脱氢酶突变体的基因工程菌，其特征在于：该基因工程菌中包含权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶突变体或权利要求4所述的重...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨光，周丹，李杰，孙丰来，
申请(专利权)人：常州合全药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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