一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法技术

本发明专利技术提供一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，采集黑公子小丑鱼受精卵；S2，进行ARTP照射，所述ARTP照射的参数为：射频输入功率为240

【技术实现步骤摘要】
一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法


[0001]本专利技术涉及一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，属于观赏鱼育种


技术介绍

[0002]黑公子小丑鱼(Amphiprion ocellaris var)属于雀鲷科，双锯鱼属，分布于澳洲珊瑚区、达尔文海域。随着年龄增长体色会转为淡褐、黑褐色，至成鱼时则会呈现黑白相间的模样，且年龄越大色泽越黑。黑公子小丑鱼是公子小丑鱼因地域性而产生的变异种，是一种常见的海洋观赏鱼。但是，黑公子小丑鱼只是呈现黑白相间的模样，颜色不够丰富，降低了观赏性。若对黑公子小丑鱼进行诱变育种，使其体色艳丽，则可以增强其观赏性和商品价值。
[0003]ARTP是常温室压等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma)的简称，能够在大气压下产生温度在25
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40C之间的、具有高活性粒子(包括处于激发态的氦原子、氧原子、氮原子、OH自由基等)浓度的等离子体射流。常压室温等离子体(ARTP)是一种以氦射频辉光放电等离子体射流(RF APGD)为核心部件的新型微生物突变系统。RF APGD可以在射频电源驱动的两个水冷裸露金属电极之间产生。工作时，等离子体气体(氦气纯度为99.99％或更高)流经两电极之间的放电区在外部射频电场的作用下将其电离，因此，在下游的等离子喷嘴处便形成了由多种化学性质活泼的粒子组成的非热等离子体射流。RF APGD中各种化学性质活泼的粒子可以通过破坏碱基与核糖之间的C
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N键、碱基上的氨基以及磷酸二酯键的P
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O键来改变DNA序列。对ARTP诱变的专利技术表明，利用ARTP辐照是一种快速、有效、方便、多方位的方法，可以产生具有足够多样性的突变体文库，以改善微生物表型。ARTP诱变机理专利技术表明，与紫外诱变和化学诱变剂相比，ARTP能引起更强的DNA损伤，从而导致更高的突变率。ARTP已成功应用于细菌、真菌、微藻等100多种微生物的诱变育种中。但是，目前尚未见ARTP应用于海洋观赏鱼诱变育种相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，可以有效解决上述问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，包括以下步骤：
[0007]S1，采集黑公子小丑鱼受精卵；
[0008]S2，对受精卵进行ARTP照射，所述ARTP照射的参数为：射频输入功率为240
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320W，氦气流量为8
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12L/min，照射距离为1.8
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2.2mm，照射时间为3
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10min；
[0009]S3，将ARTP照射后的受精卵进行孵化后培育成幼鱼，即得体色变红的小丑鱼。
[0010]作为进一步改进的，步骤S1中，采集黑公子小丑鱼受精卵为在黑公子小丑鱼产卵受精1h后采集，采集后置于海水中充氧待用。
[0011]作为进一步改进的，步骤S3中，所述孵化为：将ARTP照射后的受精卵放置于海水中充氧，水温28
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30℃，盐度26
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28，pH8.0
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8.2，氨氮<0.1mg/L，溶解氧≥5.8mg/L，光照周期为12L:12D，光照时间为6:00
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18:00，每天换水30％。
[0012]作为进一步改进的，步骤S3中，所述培育包括以下步骤：
[0013]S31，初孵仔鱼移入培养桶，水温为27
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29℃,盐度28
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30，pH为8.0
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8.2，氨氮量<0.1mg/L，溶解氧≥5.8mg/L，每天吸底并换水20％；孵化后的第1天至第7天投喂经小球藻强化的褶皱臂尾轮虫，轮虫的密度保持在8
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12个/mL；第5天开始投喂经小球藻强化的卤虫幼体,卤虫幼体的密度控制在4
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6个/mL；第10天开始投喂桡足类；20天后逐渐过渡到粉末饲料；
[0014]S32，一个月后，幼鱼移入循环水系统，每周换水20％，培育期间水温26
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28℃，盐度30
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32，pH8.0
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8.2，氨氮<0.1mg/L，溶解氧≥5.8mg/L，水流控制在5000
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7000L/H，光照周期为12L:12D，时间为6:00
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18:00；每日分别在9:00和15:00投喂2次喂颗粒饲料。
[0015]作为进一步改进的，步骤S3中，所述体色变红的小丑鱼为体色红白相间的小丑鱼。
[0016]本专利技术的有益效果是：本专利技术的方法通过ARTP诱变黑公子小丑鱼，能够可重复得到使黑公子小丑鱼体色变成红白相间的小丑鱼，提高小丑鱼的观赏价值和商品价值。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1是本专利技术对比例1例提供的受精卵未照射孵化的黑公子小丑鱼，体色为黑白相间。
[0019]图2是本专利技术实施例1
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3提供的受精卵照射后孵化的变异的黑公子小丑鱼，体色为红白相间。
[0020]图3是本专利技术实施例4提供的2种黑公子小丑鱼受精卵、皮肤组织基因表达差异。图中ALDZ表示未照射受精卵，ALSY表示照射受精卵，AYDZ表示未照射小丑鱼黑色皮肤组织，AYSY表示照射小丑鱼变红皮肤组织。
[0021]图4是本专利技术实施例4提供的基于差异表达基因对2种样本和基因进行层次聚类图。图中ALDZ表示未照射受精卵，ALSY表示照射受精卵，AYDZ表示未照射小丑鱼黑色皮肤组织，AYSY表示照射小丑鱼变红皮肤组织。
[0022]图5是本专利技术实施例4提供的基于受精卵组、皮肤组织间差异表达基因GO Term生物学功能富集图。分别将未照射受精卵与照射受精卵、未照射鱼与照射鱼之间的差异基因进行生物学功能富集分析，结果以柱状图的形式体现；图中的纵坐标表示生物学功能类目，横坐标表示基因数量。
[0023]图6是本专利技术实施例4提供的参与色素生成的关键功能基因的验证图。其中，对2种黑公子小丑鱼皮肤中参与色素生成的关键功能基因进行了qPCR定量检测，并且与RNA
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Seq结果进行了比较，结果显示qPCR检测的结果与RNA
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Seq结果趋势一致；横坐标为基因名称、纵坐标为基因表达差异倍数的log2值。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施方式中的附本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，采集黑公子小丑鱼受精卵；S2，对受精卵进行ARTP照射，所述ARTP照射的参数为：射频输入功率为240
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320W，氦气流量为8
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12L/min，照射距离为1.8
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2.2mm，照射时间为3
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10min；S3，将ARTP照射后的受精卵进行孵化后培育成幼鱼，即得体色变红的小丑鱼。2.根据权利要求1所述的ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，其特征在于，步骤S1中，采集黑公子小丑鱼受精卵为在黑公子小丑鱼产卵受精1h后采集，采集后置于海水中充氧待用。3.根据权利要求1所述的ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，其特征在于，步骤S3中，所述孵化为：将ARTP照射后的受精卵放置于海水中充氧，水温28
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30℃，盐度26
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28，pH8.0
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8.2，氨氮<0.1mg/L，溶解氧≥5.8mg/L，光照周期为12L:12D，光照时间为6:00
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18:00，每天换水30％。4.根据权利要求1所述的ARTP诱变黑公子小丑鱼体色变红的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：何丽斌，罗辉玉，郑乐云，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：