一种阿法骨化醇片有关物质的检查方法技术

本发明专利技术公开了一种阿法骨化醇片有关物质的检测方法，该方法采用超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；以乙腈和水组成为流动相进行梯度洗脱检测。本方法采用固相萃取（SPE）技术提取并浓缩片剂中的主成分及其有关物质，在大幅降低辅料干扰的同时，提高了供试品溶液的浓度，从而使方法达到较好的检测灵敏度。本方法的专属性强，精密度好，准确度且灵敏度高，操作性强，样品与对照品用量少，溶剂消耗量低，安全环保。安全环保。

【技术实现步骤摘要】
一种阿法骨化醇片有关物质的检查方法


[0001]本专利技术涉及医药分析方法领域，具体涉及一种阿法骨化醇片有关物质的检查方法。

技术介绍

[0002]阿法骨化醇化学名为(5Z,7E)
‑
9,10
‑
开环胆甾
‑
5,7,10(19)
‑
三烯
‑
1α,3β
‑
二醇，结构式如下：阿法骨化醇可增加小肠和肾小管对钙的重吸收，抑制甲状旁腺增生，减少甲状旁腺激素合成与释放，抑制骨吸收，增加转化生长因子
‑
B（TGF
‑
B）和胰岛素样生长因子
‑
I（1GF
‑
I）合成，促进胶原和骨基质蛋白合成，调节肌肉钙代谢，促进肌细胞分化，增强肌力，增加神经肌肉协调性，减少跌倒倾向。
[0003]阿法骨化醇片用于治疗改善慢性肾功能不全、甲状旁腺功能低下和抗维生素D佝偻病、骨软化症患者因维生素D代谢异常的症状，如：低钙血症、抽搐、骨痛及骨损害和骨质疏松症。
[0004]目前，国际上仅有《中国药典》收载了阿法骨化醇片的质量标准，但没有对有关物质的检查进行规定。而在《中国药典》中同品种软胶囊（即阿法骨化醇软胶囊）的质量标准中同样没有对有关物质的检查进行规定。对于他骨化醇类药物，《中国药典》和USP中维生素D2（麦角骨化醇）及维生素D3（胆骨化醇）的口服固体制剂标准也均未制定有关物质检查项。而针对阿法骨化醇片的有关物质检测方法及相关研究也鲜有报道。
[0005]化学药品研究中，有关物质的研究具有重要意义，有助于了解产品的质量及稳定性，由于阿法骨化醇片的规格仅为0.25μg和0.5μg，阿法骨化醇在片剂中占比极低，有关物质分析方法开发存在很大挑战。
[0006]CN 108663442 A公开了一种阿法骨化醇片有关物质的检测方法，其中的供试品的制备采用的方法为：取阿法骨化醇片50片，置于50ml纳氏比色管中，加水，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加入一定体积的甲醇
‑
水混合液，混匀，用玻璃注射器经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用甲醇
‑
水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。但该方法需要大量的检测样品如50
‑
100片，需要多次重复萃取操作，且检测时流动相流速为1.0~2.0ml/min，单次检测运行时间为60min，因
此溶剂量消耗比较大。现有技术CN 108663442 A中要求1%浓度水平主成分自身对照中主峰的信噪比应大于10，可见其方法定量限为1%，不能准确测定更低水平的杂质。
[0007]为确保药品的安全性和有效性，需要针对阿法骨化醇片开发一种专属性好、灵敏度高，准确、精密的有关物质检查的方法。本专利技术人经过大量的测试条件的筛选研究，惊奇的发现有通过改变供试品的制备方法，不但可以减少样品用量和溶剂消耗量，还能够大大提高检测灵敏度，克服现有技术存在的缺陷。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于建立一种阿法骨化醇片有关物质的检查方法，该方法能够专属、灵敏、准确、精密地检测出阿法骨化醇片中的有关物质，在减少样品用量和溶剂消耗量的同事，大大提高了检测灵敏度。
[0009]为实现本专利技术的目的，提供如下实施方案。
[0010]在一实施方案中，本专利技术的一种分离测定阿法骨化醇片有关物质的方法，包括采用超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以乙腈、水组成流动相，采用梯度洗脱法，其特征在于：对所述片采用固相萃取技术处理制备检测样品。
[0011]在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述采用固相萃取技术处理制备检测样品，包括以下过程，取阿法骨化醇片，研磨成粉末，称取相当于阿法骨化醇约2μg的粉末适量，加入没食子酸丙酯，再加入溶剂 1ml~2ml，使粉末呈混悬状，离心后移取上清液，再向沉淀中加入溶剂1ml~2ml，使粉末呈混悬状，离心后取上清液，与第一次离心的上清液合并，上清液用C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，去除辅料，收集洗脱液，氮气吹干，浓缩物用溶剂0.5ml复溶，离心后取上清液作为供试品，其中，所述溶剂为65
‑
75%甲醇溶液，优选为70%甲醇溶液。
[0012]在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述没食子酸丙酯，其加入量为4mg~10mg，所述C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，进一步可采用2根C18固相萃取小柱平行处理上清液，合并洗脱液，所述C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，淋洗液为3%~7%甲醇溶液，淋洗体积为8ml~12ml，洗脱液为乙醚，洗脱体积为7ml~9m，所述C18固相萃取小柱为Waters Sep
‑
Pak Vac 3cc(500mg) C18 Cartridges。
[0013]在上述实施方案中，本专利技术的方法，进一步包括系统适用性溶液的制备，包含：取阿法骨化醇对照品、杂质A及杂质B适量，用70%甲醇溶液溶解并稀释制成每1ml分别含阿法骨化醇、杂质A及杂质B为100μg、1μg及1μg的溶液，在80℃下水浴加热回流2小时，放冷至室温，精密量取1ml，置25ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性溶液，
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
杂质A
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
杂质B在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述梯度洗脱法，选自以下两种方式之一方式一：以水为流动相A，乙腈为流动相B，梯度程序如下方式二：以76%乙腈为流动相A，95%乙腈为流动相B，梯度程序如下优选的，在上述实施方案中，本专利技术的方法，具体检测过程包含：精密量取系统适用性溶液和供试品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，检测波长为265nm，流速为0.35ml/min~0.45ml/min，柱温为28℃~32℃。
[0014]在一具体实施方案中，本专利技术的一种阿法骨化醇片有关物质的检查方法，包含：采用反相高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，优选Waters UPLC HSS T3 2.1mm
×
75mm，1.8μm；以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱选自以下两种方式之一：方式一：以水为流动相A，乙腈为流动相B，梯度程序如下表1，表1色谱梯度洗脱方法一方式二：以76%乙腈为流动相A，95%乙腈为流动相B，梯度程序见表2，表2色谱梯度洗脱方法二其中，方式一，流动相A与流动相B起始比例为23:77~25:75，优选24:76；方式二流动相A与流动相B起始比例为100:0~94:6，优选100:0。
[0015]检测波长：265nm；流速：0.35ml/min~0.45ml/min，优选0.4 ml/min；进样量：20μl；
柱温：28℃~32℃，优选30℃。
[0016]在上述具体实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离测定阿法骨化醇片有关物质的方法，采用超高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以乙腈、水组成流动相，采用梯度洗脱法，其特征在于：对所述片采用固相萃取技术处理制备供试样品。2.如权利要求1所述的方法，所述采用固相萃取技术处理制备供试样品，包括以下过程，取阿法骨化醇片，研磨成粉末，称取相当于阿法骨化醇约2μg的粉末适量，加入没食子酸丙酯，再加入溶剂 1ml~2ml，使粉末呈混悬状，离心后移取上清液，再向沉淀中加入溶剂1ml~2ml，使粉末呈混悬状，离心后取上清液，与第一次离心的上清液合并，上清液用C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，去除辅料，收集洗脱液，氮气吹干，浓缩物用溶剂0.5ml复溶，离心后取上清液作为供试品，其中，所述溶剂为65
‑
75%甲醇溶液。3.如权利要求2所述的方法，所述C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，进一步可采用2根C18固相萃取小柱平行处理上清液，合并洗脱液。4.如权利要求2所述的方法，所述没食子酸丙酯，其加入量为4mg~10mg。5.如权利要求2所述的方法，所述C18固相萃取小柱经淋洗和洗脱处理，淋洗液为3%~7%甲醇溶液，淋洗体积为8ml~12ml，洗脱液为乙醚，洗脱体积为7ml~9ml。6.如权利要求2所述的方法，所述C18固相萃取小柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琳，
申请(专利权)人：重庆药友制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：