一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法及应用，涉及作用评价技术领域。本发明专利技术所述评价方法结合血浆中炎症因子表达水平和转录组分析结果，综合评价间充质干细胞延缓衰老的效果。经本发明专利技术实施例验证，通过注射间充质干细胞的方式评价间充质干细胞对昆明犬的延缓衰老作用，结果显示间充质干细胞通过调节血浆中炎症因子的蛋白浓度、炎症反应和细胞增殖相关基因的表达，从而达到减轻炎症反应、促进细胞增殖的作用，起到延缓衰老的目的。到延缓衰老的目的。到延缓衰老的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法及应用


[0001]本专利技术属于作用评价
，具体涉及一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法及应用。

技术介绍

[0002]在衰老过程中，会出现正常生理功能的不可逆衰退，包括记忆下降、反应迟钝、运动能力减弱、相关激素分泌减少等多种退行性变化。衰老细胞是衰老的关键驱动因素，典型特征是细胞周期停滞，同时可分泌多种促炎因子、趋化因子，导致出现慢性炎症状态，即衰老可以表现为出现炎症状态和细胞增殖缓慢。
[0003]现代医学证实衰老过程是可调节的，特定途径的干扰可以改善与衰老相关的表型。目前有多种药物可用于干扰这一过程，例如使用雷帕霉素治疗，雷帕霉素行使mTOR抑制剂的功能，可以将小鼠寿命延长9～14％，同时可以改善老年小鼠的多种衰老相关疾病，包括肌腱硬化，心脏功能障碍，认知能力、运动能力下降等；烟酰胺单核苷酸(NMN)是哺乳动物体内NAD
+
合成的中间产物，长期给予烟酰胺单核苷酸可减轻小鼠与年龄相关的生理衰退，服用NMN的小鼠表现出力量增强和更高的活动能力，其骨密度、骨骼肌强度也得到增加。Golpanian S等也发现间充质干细胞是一类具有自我更新能力、增殖能力和多向分化潜能的成体干细胞，使用同种异体骨髓间充质干细胞静脉注射治疗老年衰弱症，注射后患者6分钟内步行距离增加，1分钟内呼气量增加，炎症标志物TNF
‑
α水平下降，同时没有发生不良反应。
[0004]虽然已经验证了部分药物对于人类、小鼠衰老的拮抗作用，但是对于衰老家犬的间充质干细胞注射治疗的效果评价方法并没有一个确切的标准，导致在旧药筛选和新药研发时缺乏依据。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法及应用，通过规范操作可直观评价注射间充质干细胞对于家犬细胞增殖和炎症水平的作用。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法，包括以下步骤：分别于给药前后进行血浆中炎症因子的表达水平测定和全血组织转录组测序分析，当给药后血浆中炎症因子的蛋白浓度显著下降，细胞增殖相关基因和免疫细胞调节相关基因的表达发生显著变化，则判定所述间充质干细胞能够减轻炎症反应、促进细胞增殖。
[0008]优选的，所述间充质干细胞通过注射给药，注射量为4.5～6.5
×
107个细胞/次，共注射2次，两次注射间隔30天。
[0009]优选的，分别于给药前和给药后15天进行所述全血组织转录组测序分析和血浆中炎症因子的表达水平测定。
[0010]优选的，所述血浆中炎症因子包括IL
‑
6和TNF
‑
α。
[0011]优选的，还包括利用已知的减轻炎症反应的药物作为药物对照。
[0012]优选的，所述减轻炎症反应的药物包括烟酰胺单核苷酸和/或雷帕霉素。
[0013]优选的，所述烟酰胺单核苷酸和/或雷帕霉素的给药方式包括口服，烟酰胺单核苷酸的给药剂量为2.5g/次，每隔一天给药一次；
[0014]雷帕霉素的给药剂量为3mg/次，每隔一天给药一次。
[0015]优选的，细胞增殖相关基因包括TTK基因等，免疫细胞调节相关基因包括NFATC1基因等，且TTK基因表达量显著上调，NFATC1基因表达量显著下调。
[0016]本专利技术还提供了上述评价方法在筛选减轻家犬炎症反应的药物中的应用。
[0017]本专利技术还提供了上述评价方法在评价药物对家犬炎症反应的减轻作用中的应用。
[0018]有益效果：本专利技术提供了一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法，结合血浆中炎症因子蛋白浓度和转录组分析结果，综合评价间充质干细胞对家犬炎症反应的减轻效果。本专利技术实施例中，分别以烟酰胺单核苷酸和雷帕霉素为药物对照，并通过注射间充质干细胞的方式来评价间充质干细胞对昆明犬的炎症反应的减轻作用，结果显示间充质干细胞通过调节血浆中炎症因子的浓度、调节细胞增殖和免疫细胞相关基因的表达从而达到减轻炎症反应的作用，起到延缓衰老的目的。
附图说明
[0019]图1为间充质干细胞注射前后和口服两种药物前后，血浆中炎症因子IL
‑
6的表达情况，其中横坐标为注射前后分组，纵坐标为浓度，单位pg/mL；
[0020]图2为间充质干细胞注射前后和口服两种药物前后，血浆中炎症因子TNF
‑
α的表达情况，其中横坐标为注射前后分组，纵坐标为浓度，单位pg/mL；
[0021]图3为间充质干细胞注射前后，受试犬只全血转录组基因表达量整体聚类图，其中横坐标为样本名称，纵坐标为样本名称；
[0022]图4为间充质干细胞注射前后，基因表达火山图，其中横坐标为基因表达值的log2FoldChange，即表达差异倍数的对数，纵坐标
‑
log10(padj)为基因表达差异P值的负对数；
[0023]图5为间充质干细胞注射前后，基因差异表达热图，由红色到绿色表达从高到低，其中横坐标为基因ENSEMBL ID，纵坐标为样本名称和分组，红色代表注射前，黄色代表注射后。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法，包括以下步骤：分别于给药前后进行血浆中炎症因子的表达水平测定和全血组织转录组测序分析，当给药后血浆中炎症因子的蛋白浓度显著下降，炎症反应和细胞增殖相关基因的表达发生显著变化，则判定所述间充质干细胞能够减轻炎症反应、促进细胞增殖。
[0025]本专利技术对所述间充质干细胞的来源并没有特殊限定，优选包括脐带、骨髓或脂肪
来源的间充质干细胞。在本专利技术实施例中，所述间充质干细胞优选通过注射给药，注射量为4.5～6.5
×
107个细胞/次，共注射2次，两次注射间隔30天，更优选的注射量为5
×
107个细胞/次。本专利技术在所述注射时，优选以DMEM培养基为分散剂，制成细胞悬液进行注射即可。
[0026]本专利技术所述血浆中炎症因子优选包括IL
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6和TNF
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α。本专利技术对所述血浆中炎症因子的浓度测定方法并没有特殊限定，优选包括ELISA法。
[0027]在本专利技术中，优选对给药前后的血浆中炎症因子的表达水平进行对比和全血组织转录组测序分析，更优选分别于给药前和给药后15天进行所述全血组织转录组测序分析和血浆中炎症因子的表达水平测定。本专利技术对所述全血组织转录组测序分析的方法并没有特殊限定。
[0028]本专利技术在进行所述效果评价时，优选还包括利用已知的减轻炎症反应的药物作为药物对照，所述已知的减轻炎症反应的药物优选包括烟酰胺单核苷酸和/或雷帕霉素。在本专利技术实施例中，所述烟酰胺单核苷酸和/或雷帕霉素的给药方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞对家犬炎症水平和细胞增殖作用的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：分别于给药前后进行全血组织转录组测序分析和血浆中炎症因子的表达水平测定，当给药后血浆中炎症因子的蛋白浓度显著下降，炎症反应和细胞增殖相关基因的表达发生显著变化，则判定所述间充质干细胞能够减轻炎症反应、促进细胞增殖。2.根据权利要求1所述评价方法，其特征在于，所述间充质干细胞通过注射给药，注射量为4.5～6.5
×
107个细胞/次，共注射2次，两次注射间隔30天。3.根据权利要求1所述评价方法，其特征在于，分别于给药前和给药后15d进行所述血浆中炎症因子的表达水平测定和全血组织转录组测序分析。4.根据权利要求1或3所述评价方法，其特征在于，所述血浆中炎症因子包括IL
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6和TNF
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【专利技术属性】
技术研发人员：王璐，李芷瑜，张亚平，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：