一种用于炎症性肠病的诊断标志物及其应用制造技术

本发明专利技术了公开了一种用于炎症性肠病的诊断标志物及其应用。本发明专利技术首次公开了SPINK4作为IBD诊断的血浆及肠道组织标志物，并通过实验首次发现了SPINK4在IBD患者血浆中呈现上调表达，提示SPINK4可能在IBD的疾病活动及预后评估中存在重要的临床价值；经检测发现SPINK4在IBD患者血浆标本中表达升高，进一步通过ROC曲线分析SPINK4相比于其他CRP、ESR、Hb、Ht、PLT等炎症活动指标而言，具有较好的诊断敏感度和特异性。特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于炎症性肠病的诊断标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及炎症性肠病检测
，更具体地，涉及一种用于炎症性肠病的诊断标志物及其应用。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease，IBD)主要是由肠道微生物群和免疫系统紊乱而引起的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括克罗恩病(Crohn
’
s disease，简称CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，简称UC)。IBD在全球范围内影响较大，据统计，IBD患病在美国约100万人，在欧洲约250万人，在全球范围内的人数更多，并且IBD的诊疗费用也相对较高。研究表明，越早确定IBD的活动性越能降低手术率和病死率。影响IBD发生发展的主要因素包括肠道免疫系统的功能失调、肠道微生态紊乱以及宿主的遗传背景等。
[0003]但是，IBD的发病机制及关键分子还远未阐明，仍然缺乏活动性诊断的金标准。临床上主要依靠内镜和病理检查来评估，但是内镜操作的侵袭性、长期随访的可行性以及操作者的主观性等因素影响了其临床诊断价值。当下针对于IBD疾病活动度的评估主要依赖于：1)实验室指标：血浆炎症指标(包括CRP、ESR、ALB等)；2)粪便炎症指标(以粪钙卫蛋白为主)；3)疾病活动度评分：包括内镜及临床评分，其中内镜评分主要包括克罗恩病的SESCD评分、CDEIS评分、术后的Rutgeerts评分，溃疡性结肠炎的UCEIS评分，临床评分主要包括CD的CDAI评分和UC的Mayo评分。
[0004]针对于目前的实验室检查指标，血浆炎症指标不能将炎症靶向于胃肠道，而粪便钙卫蛋白检测结果的不稳定性导致肠道炎症的不准确评估，而针对于内镜或临床的综合评估一方面存在检查者的主观性偏倚，除此之外对于临床症状或内镜下表现较轻的活动性患者评估同样存在偏颇，而IBD疾病活动的评估对于指导患者下一步用药方案有着极其重要的作用，一定程度上决定患者的预后及生存质量。因此，通过易获得的具有高灵敏度和特异性的生物标志物来客观反映肠黏膜的炎症情况、判断IBD的活动性对于调整IBD患者的诊疗及管理显得尤为重要。

技术实现思路

[0005]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种用于炎症性肠病的诊断标志物及其应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面提供了检测生物标志物的试剂在制备用于诊断炎症性肠病的产品中的应用，其特征在于，包括：a)鉴定受试者的样品中的生物标志物，其中所述生物标志物为SPINK4(NM_014471.3)；以及b)将所述生物标志物与参照进行比较，其中与参照相比的所述生物标志物的差异用于检测炎症性肠病。
[0008]进一步，所述样品为血浆或肠黏膜组织。
[0009]进一步，与参照相比，生物标志物表达水平上调。
[0010]进一步，所述试剂包括用RT
‑
PCR、实时定量PCR、新一代测序、原位杂交、芯片或免疫测定技术检测SPINK4的试剂，其不限于：
[0011]特异性识别SPINK4基因的探针；或
[0012]特异性扩增SPINK4基因的引物；或
[0013]特异性结合SPINK4编码的蛋白的抗体或配体。
[0014]优选地，所述SPINK4基因序列如SEQ ID NO.5所示；所述SPINK4编码蛋白序列如SEQ ID NO.6所示；所述特异性扩增SPINK4基因的引物序列如SEQ ID NO.1～2所示。
[0015]进一步地，所述参照为健康人群。
[0016]本专利技术的第二方面提供了一种产品，所述产品包括检测SPINK4水平的试剂。
[0017]进一步，所述试剂包括用RT
‑
PCR、实时定量PCR、新一代测序、原位杂交、芯片或免疫测定技术检测SPINK4的试剂，其不限于：
[0018]特异性识别SPINK4基因的探针；或
[0019]特异性扩增SPINK4基因的引物；或
[0020]特异性结合SPINK4编码的蛋白的抗体或配体。
[0021]进一步，所述特异性扩增SPINK4基因的引物序列如SEQID NO.1～2所示。
[0022]本专利技术的第二方面提供了SPINK4作为炎症性肠病血浆标志物在制备监测IBD疾病活动情况的试剂或试剂盒中的应用。
[0023]进一步，所述试剂包括用RT
‑
PCR、实时定量PCR、新一代测序、原位杂交、芯片或免疫测定技术检测SPINK4的试剂，其不限于：
[0024]特异性识别SPINK4基因的探针；或
[0025]特异性扩增SPINK4基因的引物；或
[0026]特异性结合SPINK4编码的蛋白的抗体或配体。
[0027]本专利技术的优点如下：本专利技术首次公开了SPINK4作为IBD诊断的血浆标志物，并通过实验首次发现了SPINK4在IBD患者血浆中呈现上调表达，提示SPINK4可能在IBD的疾病活动及预后评估中存在重要的临床价值；经检测发现SPINK4在IBD患者血浆标本中表达升高，尤其是在CD升高2.06倍，UC升高1.85倍；进一步通过ROC曲线分析SPINK4相比于其他CRP(C
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reactive protein)、ESR(erythrocyte sedimentation rate)、Hb(haemoglobin)、Ht(Hematocrit)、PLT(platelet/lymphocyte Ratio)等炎症活动指标而言，具有较好的诊断敏感度和特异性。
附图说明
[0028]图1为是利用QPCR检测SPINK4基因在IBD患者肠黏膜组织中的表达情况图；
[0029]图2是利用ELISA检测SPINK4蛋白在IBD患者血浆中的表达情况图；
[0030]图3是SPINK4在CD患者中的ROC曲线分析图。
具体实施方式
[0031]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0032]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，并不用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的
具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0033]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0034]实施例1筛选与IBD相关的标志物
[0035]1、样品收集
[0036]收集10名患有克罗恩病(CD)和10名患有溃疡性结肠炎(UC)的患者以及10名健康人群的血液外周静脉血3mL并同期获取肠镜肠黏膜组织标本，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过伦理委员会的同意。
[0037]克罗恩病和溃疡性结肠炎患本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测生物标志物的试剂在制备用于诊断炎症性肠病的产品中的应用，其特征在于，包括：a)鉴定受试者的样品中的生物标志物，其中所述生物标志物为SPINK4；以及b)将所述生物标志物与参照进行比较，其中与参照相比的所述生物标志物的差异用于检测炎症性肠病。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品为血浆或肠黏膜组织。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，与参照相比，生物标志物表达水平上调。4.根据权利要求1
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3任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂包括用RT
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PCR、实时定量PCR、新一代测序、原位杂交、芯片或免疫测定技术检测SPINK4的试剂。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括特异性扩增SPINK4基因的引物序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：张盛洪，王莹，韩婧，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：