miRNA-142-3p在预测IgA肾病治疗反应性中的应用制造技术

本发明专利技术涉及检测试剂盒技术领域，具体涉及miRNA

【技术实现步骤摘要】
miRNA
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142
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3p在预测IgA肾病治疗反应性中的应用


[0001]本专利技术涉及检测试剂盒
，具体涉及miRNA
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142
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3p在预测IgA肾病治疗反应性中的应用。

技术介绍

[0002]IgA肾病是最常见的原发性肾小球肾炎，也是尿毒症的主要病因之一。大多数IgA肾病是持续进展的，在确诊后5
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25年内15％
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40％的患者将发展为终末期肾脏疾病。而IgA肾病又是一个个体异质性很大的疾病，不同IgA肾病患者，其临床、病理表现和对于治疗的反应性存在高度的异质性。尿蛋白是公认的影响IgA肾病预后的重要因素。能否降低尿蛋白及减低程度是IgA肾病最重要的治疗目标之一。
[0003]尿蛋白缓解状态也与IgA肾病预后有密切相关。RAS阻断剂(包括ACEI
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血管紧张素转换酶抑制剂和ARB
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血管紧张素受体阻滞剂)是IgA肾病的治疗基础。国际权威指南
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改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)推荐除了有禁忌症外，所有IgA肾病患者均应使用最大耐受剂量的RAS阻断剂以降低尿蛋白水平。对于接受以RAS阻断剂为主的最佳支持治疗90天后，24小时尿蛋白定量仍大于1g的高风险进展的IgA肾病患者，建议可接受免疫抑制治疗(激素或免疫抑制剂)。无论是基础的RAS阻断剂还是更积极的免疫抑制治疗，目的均是让IgA肾病患者尽早达到完全缓解，以延缓肾功能进展，改善IgA肾病患者肾脏预后。
[0004]目前缺乏敏感性高、特异性强的预测IgA肾病治疗能否缓解的无创分子标志物。2021年我国研究团队发现(Xie D,et al.J Am Soc Nephrol.2021；32:3187
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3196.)，肾活检病理组织中CD68阳性和CD206阳性的巨噬细胞浸润程度可能可以预测高风险进展的IgA肾病患者免疫抑制治疗的反应性。单纯肾组织CD68阳性和CD206阳性的巨噬细胞浸润程度对于预测免疫抑制治疗的反应性的曲线下面积(AUC)为0.84。而加上年龄、性别、eGFR、尿蛋白、平均动脉压等临床治疗和牛津分型的MEST
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C形成的预测模型其对于免疫抑制治疗的反应性的AUC增加为0.87。该指标及其形成的预测模型是目前预测IgA肾病治疗反应性效能最高的指标。国际知名肾脏病专家Dr.Mac Hilhorst于同期发表社论(Hilhorst et al.J Am Soc Nephrol.2021；32:2982
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2984.)，赞扬该有创指标是预测IgA肾病治疗反应性的开创性研究的同时，也反复指出尿液标志物可能才是寻找无创预测IgA肾病治疗反应性的最好来源。
[0005]前期研究发现，尿液miR
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146a、miR
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21和miR
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205在IgA肾病治疗完全缓解组和非完全缓解组间有显著差异。但多因素分析发现仅基线eGFR与IgA肾病治疗完全缓解有相关(Liang et al.BMC Nephrology.2017；18:63)。此外，尿液肝细胞生长因子受体(cMet)也报道在IgA肾病完全缓解组和非完全缓解组有显著差异(J Cell Mol Med.2020；24:11158
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11169.)。在平均15个月的随访末期，尿液cMet的风险比(HR)为0.5，P值为0.011。但在调整了完全缓解组和非完全缓解组间收缩压、eGFR、尿蛋白、RAS阻断剂或免疫抑制治疗后，尿液cMet失去了预测完全缓解的价值(P＝0.058)。

技术实现思路

[0006]本专利技术发现，目前已报道的可用于预测IgA肾病治疗反应性的尿液标志物，如尿液miR
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146a、miR
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21、miR
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205或cMet在调整了临床和病理指标后，失去了预测价值(P值均大于0.05)，提示既往尿液标志物的预测作用往往来源于与其密切相关的某些临床和(或)病理指标，而非标志物本身。
[0007]目前发现的肾组织CD68和CD206阳性的巨噬细胞浸润程度是预测IgA肾病免疫抑制治疗反应性效能较好的指标。但该指标需要患者行肾穿刺活检术，术后将获得的病理组织切片，对于肾组织中浸润的巨噬细胞进行CD68和CD206的免疫组化的特殊染色。但单张切片中肾小球阳性细胞的分布存在着严重偏倚。为了减少上述偏倚对结果的影响，该研究团队借鉴了评价论文引用指标的H指数(Hirsh
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index)的类似方法，命名为I评分，用于量化肾小球浸润强度，既考虑肾小球数量也考虑阳性细胞数量的影响。但该指标用于预测IgA肾病治疗反应性有着非常明显的局限性。
[0008]首先，该指标评分基础是肾组织中浸润的特殊亚群的巨噬细胞，需要患者进行肾活检穿刺术。而肾活检穿刺术是一项有创检查，存在着许多禁忌症(如明显出血倾向、重度高血压、孤立肾等)和并发症(血尿、肾周围血肿、肾周围脓肿和动静脉内瘘等)。
[0009]其次，IgA肾病属于自身免疫性疾病，绝大多数患者存在着多次反复复发的情况，有创的肾穿刺活检术无法根据患者治疗需要反复进行，使得许多IgA肾病患者失去了复发时评估治疗反应性的机会。
[0010]再次，该指标除了需要操作复杂的肾活检穿刺术外，还需要对于肾组织中的巨噬细胞进行特殊免疫组化染色，对于肾穿刺操作者和后期病理制片、特殊染色的病理专业要求非常高，影响了其实用性和推广性。
[0011]并且，该指标存在着阳性细胞往往集中聚集于一个或几个肾小球的严重偏倚的情况，为了控制偏倚，往往需要对每张切片中平均20个肾小球进行浸润程度计算进而平均。而肾组织切片中肾小球数量大于20个的情况并不多见，目前认为每张切片中肾小球数目大于8个就为合格。
[0012]即使采用复杂的矫正方法，也难以完全避免该指标的偏倚，特别是肾组织切片中肾小球数量较少的情况下(如小于10个，一般认为每张切片中肾小球数目大于8个就为合格)，偏倚更加明显。
[0013]最后，该指标评分方法I
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评分较为复杂，且操作过程费时费力。
[0014]本专利技术的目的在于，利用尿沉渣miRNAs提供一种无创、快速准确评估IgA肾病治疗反应性的方法。旨在解决目前预测IgA肾病治疗反应性的指标存在：需要有创的肾穿刺活检术、需要操作复杂的特殊免疫组化染色和偏倚较大且计算复杂的评分方法等一列问题。
[0015]本专利技术的另一个目的是：提供一种无机体创伤、操作简单、检测时间短、无偏倚、计算简单的预测IgA肾病治疗反应性的试剂盒。
[0016]第一方面，本专利技术请求保护miRNA
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3p在预测IgA肾病治疗反应性中的应用。
[0017]在本专利技术多提供的应用中，所述治疗包括采用RAS阻断剂或免疫抑制剂治疗IgA肾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miRNA
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3p在预测IgA肾病治疗反应性中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗包括采用RAS阻断剂或免疫抑制剂治疗IgA肾病。3.含有扩增miRNA
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3p的引物序列的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒用于检测经RAS阻断剂或免疫抑制剂进行治疗的IgA肾病患者尿液样本中的miRNA
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3p相对表达量。4.根据权利要求3所述的试剂或试剂盒，其特征在于，扩增miRNA
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3p的引物序列如SEQ ID NO.1所示。5.根据权利要求4所述的试剂或试剂盒，其特征在于，通过荧光定量PCR检测所述miRNA
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3p相对表达量。6.根据权利要求5所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述miRNA
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【专利技术属性】
技术研发人员：段智宇，蔡广研，卜茹，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：