一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用，属于生物化学技术领域，该用于鉴定少精症的标志物，包括PE(O

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物化学
，具体公开了一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，不孕症的增加是当前全球面临的主要健康问题。男性生殖力下降已成为严重困扰全球生殖健康的重大公共卫生问题，也是全球亟待解决的重大课题之一。了解男性特发性不育的发病机制不仅为临床特发性男性不育治疗奠定基础，而且对公共卫生预防全球人口稳步增长具有重要意义。
[0003]代谢组学是继基因组学、蛋白组学之后发展起来的一种全新组学技术，是系统生物学的重要组成部分，利用高分离率、高灵敏度、低检测限的LC
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MS等先进仪器，通过比较不同生理状态下生物体内内源性小分子的代谢图谱信息变化，通过信息提取，数学降维等方法识别疾病状态下关键生物标志物的一类方法。代谢组学分析方法分为靶向代谢组学和非靶向代谢组学，非靶向代谢组学是对整个生命体代谢组进行的系统鉴定分析，从中发现差异代谢物的方法；靶向代谢组学较非靶向代谢组学更有针对性，将关注点放在了特定的一类代谢物上，其重复性、敏感性和精确性更高。脂质组学是对生物体、组织和细胞中的脂质以及与其相互作用的分子进行全面系统的分析、鉴定，进而揭示脂质代谢与机体的生理和病理过程中的一类靶向代谢组学分析方法。定量脂质组学是对脂类进行准确鉴定和绝对定量。该技术是基于稳定同位素标记内标(SILIS)和响应因子(RF)建立的脂质组全定量库，可对多种脂质进行准确定性以及绝对定量。
[0004]部分文献报道了少精子症、弱精子症和精索静脉曲张患者精子的脂肪酸代谢图谱，发现精液中的硬脂酸与精子活力呈负相关，二十二碳六烯酸(DHA)与精子活力呈正相关并且公开了不同患者的完整脂肪酸谱，但并未体现定量靶向脂质组学的代谢产物变化的特征。虽然也有非专利文献分析了20例少精症患者的精浆代谢组，发现磷脂酰胆碱、鞘磷脂、酰基肉碱、L
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肉碱、多不饱和脂肪酸、氨基酸和生物胺等代谢物明显改变，但这由于样本数较小且并未系统用定量靶向脂质组学分析，存在假阳性的标志物的可能，并且对关键代谢物的临床诊断可用性和涉及的影响机制尚未公开。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种用于鉴定少精症的标志物，其能够解决现目前少精症的临床诊断仍存在假阳性标志物且诊断机制不明确的技术问题。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其使用多元变量统计分析对差异代谢物的数据进行层层筛选分析，提高了获得标志物的准确度。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供上述用于鉴定少精症的标志物在制备用于预防或治疗少精症的药物中的应用，为用于预防或治疗少精症的药物的制备提供关键靶向方针。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种用于诊断少精症的试剂盒，其不仅假阳性率低，
而且诊断准确性高，能够用于临床检测。
[0009]与现有技术相比，本专利技术至少具有如下的优点与积极效果：
[0010]本专利技术提供了一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用，该标志物能够降低假阳性概率，提升少精症检测的准确性；而该筛选方法结合了非靶向的高覆盖、全扫描精确分子量定性和靶向的多反应监测(MRM)精确量化的优点，具有简便，灵敏，准确的特点。
附图说明
[0011]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0012]图1为本专利技术中用于鉴定少精症的标志物的筛选流程示意图；
[0013]图2为本专利技术中正常对照组和少精症的精浆脂代谢组的PCA分析图；
[0014]图3为本专利技术中正常对照组和少精症的精浆脂代谢组的OPLS
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DA分析图。
[0015]图4为本专利技术中少精组与对照组的差异代谢物筛选火山图；
[0016]图5为本专利技术中少精组与对照组的差异代谢物的层次聚类分析热力图；
[0017]图6为本专利技术中差异代谢物的富集通路图；
[0018]图7为本专利技术中潜在标志物的ROC分析图。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0020]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本专利技术。
[0021]本专利技术提供了一种用于鉴定少精症的标志物，包括PE(O
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16:0/22:6)、TAG(54:8)_FA22:6、HexCer(18:1/18:1)、TAG(50:2)_FA16:0、TAG(52:7)_FA22:6、FFA(22:6)、TAG(56:8)_FA22:6、TAG(54:7)_FA22:6、TAG(56:8)_FA16:0、SM(18:1)、FFA(24:1)和DAG(16:0/18:0)。
[0022]其中PE表示磷脂酰乙醇胺；TAG表示甘油三酯；FA表示脂肪酸；HexCer表示己糖基神经酰胺；FFA表示游离脂肪酸；SM表示鞘磷脂；DAG表示甘油二酯；HexCer(18:1/18:1)表示该己糖基神经酰胺包含两条碳链，其中一条链由18个碳原子构成含1个双键；另一条链由18个碳原子构成含1个双键，SM(18:1)表示鞘磷脂包含一条碳链，该碳链包含18个碳原子，其上有一个双键，其余同理。PE(O
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16:0/22:6)表示该磷脂酰乙醇胺包含有2条碳链，其中1条碳链由16个碳原子构成且不含双键，还包含一个氧，另一条碳链由22个碳原子构成包含6个双键。
[0023]本专利技术还提供了一种用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，包括取少精症患者的精液作为待测样本，将待测样本于3000
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3500rpm离心8
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12min后获得精浆样本；采用超高效
液相色谱
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串联质谱法检测精浆样本，得到原始数据；根据相对标准偏差和变异系数对原始数据内偏离的单个峰进行过滤，只保留单组空值不多于50％或所有组空值不多于50％的峰面积数据，对原始数据中的缺失值按照最小值二分之一的数值模拟方法进行填补，得到整理数据；使用SIMCA软件对整理数据进行对数转换加UV格式化处理，得到处理数据，将处理数据用主成分分析和正交偏最小二乘法
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判别分析后得到差异代谢物数据；使用多元变量统计分析方法对差异代谢物数据进行分析，得到分析数据，多元变量统计分析方法中的卡值标准为t检验的P值小于0.05且OPLS
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定少精症的标志物，其特征在于，包括PE(O
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16:0/22:6)、TAG(54:8)_FA22:6、HexCer(18:1/18:1)、TAG(50:2)_FA16:0、TAG(52:7)_FA22:6、FFA(22:6)、TAG(56:8)_FA22:6、TAG(54:7)_FA22:6、TAG(56:8)_FA16:0、SM(18:1)、FFA(24:1)和DAG(16:0/18:0)。2.一种如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：取少精症患者的精液作为待测样本，将所述待测样本离心后获得精浆样本；采用超高效液相色谱
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串联质谱法检测所述精浆样本，得到原始数据；根据相对标准偏差和变异系数对所述原始数据内偏离的单个峰进行过滤，只保留单组空值不多于50％或所有组空值不多于50％的峰面积数据，对所述原始数据中的缺失值按照最小值二分之一的数值模拟方法进行填补，得到整理数据；使用SIMCA软件对所述整理数据进行对数转换加UV格式化处理，得到处理数据，将所述处理数据用主成分分析和正交偏最小二乘法
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判别分析后得到差异代谢物数据；使用多元变量统计分析方法对所述差异代谢物数据进行分析，得到分析数据，所述多元变量统计分析方法中的卡值标准为学生t检验的P值小于0.05且OPLS
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DA模型第一主成分的变量投影重要度大于1；将所述分析数据以火山图和差异代谢物层次聚类热图形式进行可视化展示并利用KEGG数据库和/或MetaboAnalyst数据库进行信号通路分析；再利用Graph pad 9.0软件对差异基因进行ROC分析并对有显著性差异的代谢物进行绘图和分析，即完成筛选。3.根据权利要求2所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，所述超高效液相色谱
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串联质谱法中的流动相A包括四氢呋喃、甲醇、水和甲酸铵，所述四氢呋喃、甲醇和水的体积比为(28
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32):(18
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22):(45
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55)；所述超高效液相色谱
...

【专利技术属性】
技术研发人员：付旭锋，裴秀英，陈国栋，杜星，高慧，俞晓丽，司胜斌，孙伟玮，许博，代文杰，杨宏，刘玲，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：