一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种补中益气口服液HPLC特征图谱建立的方法，属于中药制剂分析领域。此方法优化了特征图谱检测条件，基于化学模式识别技术筛选标志性特征峰，经过方法学考察，最终确定HPLC特征图谱分析方法。采用Kromasil 100

【技术实现步骤摘要】
一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法
[0001]（一）
本专利技术属于中药制剂分析领域，具体涉及补中益气口服液特征图谱的建立方法。
[0002]（二）
技术介绍
补中益气口服液是由炙黄芪、党参、炒白术、炙甘草、当归、陈皮、升麻、柴胡、生姜、大枣十味药材所制得的中药复方制剂，其原方由金元时期著名医家李东垣创立，首载于《内外伤辨惑论》，具有补中益气，升阳举陷的功效。方中黄芪可用于脾胃虚弱、肺气受邪的患者，能够避免自汗而损伤元气；甘草味甘，能泻心火除脾脏热气，中和脾胃元气，炮制品的作用更强；白术可泄胃中热；升麻、柴胡可引补气药的甘温之气上升；陈皮理气，助阳气上升以散滞气。研究表明补中益气口服液具有调节胃肠、增强免疫、抗炎、抗疲劳等药理作用；对于消化系统、呼吸系统、泌尿系统、妇科等方面疾病均有一定疗效。
[0003]中药及复方特征图谱是控制药材及复方制剂质量的重要手段,同时也是保证临床疗效的关键。特征图谱具有整体性和模糊性的特点,很好地契合了中药组分的复杂性和多样性的特点,能够评价和控制中药材及复方的质量。补中益气组方拥有多种剂型，如补中益气合剂、丸、颗粒、口服液等，其中合剂、丸、颗粒均收录于2020版中国药典中，而补中益气口服液尚未有明确质量标准。针对上述情况，本专利技术对补中益气口服液采用HPLC法进行特征图谱研究，严格把控补中益气口服液的质量，全面且直观地反映其内部活性成分的种类和数量，为后续补中益气口服液质量评价体系的建立提供参考。
[0004]（三）
技术实现思路
本专利技术目的在于解决现有技术的不足，提供一种补中益气口服液的特征图谱检测方法，为控制该制剂质量提供了新的技术方法，旨在解决目前对枇补中益气口服液的质量控制技术不足的问题。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种基于特征图谱的补中益气口服液的评价方法，具体包括如下步骤：（1）供试品与混合对照品溶液的制备精密量取补中益气口服液1mL于容量瓶中，用甲醇定容至5mL，超声3min，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液。取毛蕊异黄酮
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O
‑
葡萄糖苷、甘草苷、阿魏酸、橙皮苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL分别含20μg、50μg、5μg、170μg、10μg、200μg的混合对照品溶液。
[0006]（2）特征图谱的优化对特征图谱构建中的色谱条件（流动相水相酸、波长、柱温、流速、色谱柱）进行优化，建立补中益气口服液最佳高效液相色谱条件。
[0007]（3）特征峰的选择区别于普通特征峰根据色谱峰高低进行选择，本专利技术中利用化学模式识别技术（CA、PCA、PLS
‑
DA），对不同批次补中益气口服液的色谱峰进行分析，筛选出对于样品质量影响较大色谱峰。以此筛选结果为参考，确定色谱图特征峰。
[0008]（4）特征图谱的方法学考察
对特征图谱的建立方法进行精密度、重复性、稳定性考察，佐证该分析方法可适用于补中益气口服液特征图谱分析。
[0009]（5）建立补中益气口服液的特征图谱高效液相色谱条件为：色谱柱：Kromasil 100
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（4.6
×
250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）
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0.2%甲酸水溶液（B）；检测波长260nm；柱温35℃；流速0.80mL/min；进样量10μL；梯度洗脱程序如下：与现有技术相比，本专利技术的有益效果：（1）本专利技术在选取补中益气口服液HPLC特征图谱中的特征峰时，利用化学模式识别技术筛选出质量差异性较大成分，依次为参考选定特征峰。
[0010]（2）本专利技术建立的补中益气口服液HPLC特征图谱，标定14个特征峰，且构建的HPLC特征图谱中色谱峰分离度较好，特征图谱信息丰富，建立的方法简便可靠、稳定性和精密度高、重复性良好。
[0011]（3）本专利技术构建的补中益气口服液HPLC特征图谱填补了此方口服液剂型质量控制技术的不足，为提升产品质量的稳定性、可靠性与安全性提供保障。
[0012]（四）附图说明图1为实施例1中流动相水相酸考察结果色谱图。
[0013]图2为实施例1中波长考察结果色谱图图3为实施例1中柱温考察结果色谱图。
[0014]图4为实施例1中流速考察结果色谱图。
[0015]图5为实施例1中色谱柱耐用性考察结果色谱图。
[0016]图6为实施例2中补中益气口服液标注共有峰指纹图谱。
[0017]图7为实施例2中不同批次补中益气口服液叠加色谱图。
[0018]图8为实施例2中聚类分析(A)与主成分分析得分图(B)。
[0019]图9为实施例2中偏最小二乘判别分析得分图(A)与VIP图(B)。
[0020]图10为实施例2中补中益气口服液的HPLC特征图谱。
[0021]（五）具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。
[0022]在以下实施例中，所涉及的补中益气口服液具体批次见下表1：表1补中益气口服液样品信息
编号批次编号批次S1150302S12200701S2150905S13200905S3180302S14201108S4180502S15201215S5180604S16210101S6181010S17210102S7181215S18210103S8190406S19210112S9190902S20210115S10200101S21210301S11200605S22210401实施例1本实施例对HPLC特征图谱构建中的色谱条件（流动相水相酸、波长、柱温、流速、色谱柱）进行考察，以本技术方案作进一步的说明。
[0023]（1）流动相水相酸考察分别考察水相为水、0.1％磷酸水、0.1％甲酸、0.2％甲酸水时，对色谱峰的影响，结果如图1所示。
[0024]结果表明：流动相水相酸为0.2％甲酸水时，整体基线较平稳，色谱峰之间分离度较好，故选择流动相水相为0.2％甲酸水。
[0025]（2）波长考察进样供试品溶液，提取在237nm、260nm、283nm、316nm波长下的色谱图，所得结果如图2所示。
[0026]结果表明：在检测波长为260nm时，色谱峰信息量较大，色谱峰基线较平稳，色谱峰之间分离度较好，故将检测波长确定为260nm。
[0027]（3）柱温考察分别设置柱温为25℃、30℃、35℃，所得结果如图3所示。
[0028]结果表明：柱温为35℃时，色谱峰峰型较为对称，分离度适中，故将柱温设定为35℃。
[0029]（4）流速考察分别设置流速为0.60ml/min、0.80ml/min、1.00ml/min，所得结果如图4所示。
[0030]结果表明：流速为0.80ml/min时，各特征峰峰型较好，分离度适中，故将流速确定为0.80ml/min。
[0031]（5）色谱柱耐用性考察基于前述的补中益气口本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）供试品与混合对照品溶液的制备精密量取补中益气口服液1mL于容量瓶中，用甲醇定容至5mL，超声3min，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；取毛蕊异黄酮
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葡萄糖苷、甘草苷、阿魏酸、橙皮苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL分别含20μg、50μg、5μg、170μg、10μg、200μg的混合对照品溶液；（2）特征图谱的优化对特征图谱构建中的色谱条件（流动相水相酸、波长、柱温、流速、色谱柱）进行优化，建立补中益气口服液最佳高效液相色谱条件；（3）特征峰的选择区别于普通特征峰根据色谱峰高低（单一标准）进行选择，本发明中利用化学模式识别技术（CA、PCA、PLS
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DA），对不同批次补中益气口服液的色谱峰进行分析，筛选出对于样品质量影响较大色谱峰；以此筛选结果为参考，确定色谱图特征峰；（4）特征图谱的方法学考察对特征图谱的建立方法进行精密度、重复性、稳定性考察，证明该分析方法可适用于补中益气口服液特征图谱分析；（5）建立补中益气口服液的特征图谱高效液相色谱条件为：色谱柱：Kromasil 100
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（4.6
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250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）
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0.2%甲酸水溶液（B）；检测波长260nm；柱温35℃；流速0.80mL/min；进样量10μL；梯度洗脱程序如下：。2.如权利要求1所述的一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，超声处理的功率为250W，频率40kHz。3.如权利要求1所述的一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于，步骤（2）中，流动相水相酸考察内容为：水、0.1%磷酸水、0.1%甲酸水、0.2%甲酸水。4.如权利要求1所述的一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法，其特征在于，步骤（2）中，波长考察内容为：237nm、260nm、283nm、316nm。5.如权利要求1所述的一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：费状丽，施杰，徐威威，谢荣伟，王红英，
申请(专利权)人：浙江爱诺生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：