一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液技术

公开了一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液，由水相、有机相和酶组成，有机相包含异辛烷和长链烷基季铵盐。此外，还公开了提高珍珠水解液蛋白比例的方法，包括：获得纳米珍珠粉；与处理液混合，酶解处理；与KCl水溶液混合静置分层，取下清液。该处理液和方法有利于更多角质蛋白转化为可溶性蛋白，进而提高了珍珠水解液水溶性蛋白比例。珍珠水解液水溶性蛋白比例。

【技术实现步骤摘要】
一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液


[0001]本专利技术属于药物制剂领域；涉及一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液。

技术介绍

[0002]珍珠粉是珍珠贝科动物（例如马氏珍珠贝和珍珠贝）或者蚌科动物（例如褶纹冠蚌、三角帆蚌）等贝类动物分泌物质包裹体内刺激异物层而形成的含碳酸钙的矿物珠粒。我国药典记载珍珠粉具有安神定惊、明目去翳、解毒生肌等功效，自古就是一味重要的中药。此外，珍珠粉也是医疗、美容、保健领域不可多得的养颜珍品，应用较为广泛。
[0003]作为药用成分，珍珠粉不仅含有碳酸钙和锰、铝、铁、锶、铜、钛等微量元素，还含有角质蛋白和多肽类物质。研究表明，角质蛋白是珍珠粉中的主要有机成分，虽然角质蛋白含量不足5%，但却控制着含量高达95%以上碳酸钙晶体的形成、沉积和晶型转变，同时也是珍珠粉产生生物活性和诱导骨骼生长等特性的主要原因。因此，角质蛋白的研究近年来逐渐成为珍珠粉和珍珠水解液的研究热点之一。为了提取珍珠粉中的角质蛋白，需要将角质蛋白从无机碳酸钙中释放出来。主要方法有两种：一种是酸解法；一种是酶解法。
[0004]中国专利申请CN88105369A公开了一种将珍珠加工成可溶性珍珠全成分制剂的制备工艺，由珍珠细粉与有机酸进行置换反应，以制得珍珠有机酸盐(I)及珍珠硬蛋白(II)；继而将(II)在酸性条件下，经过酸洗、水解及中和等步骤，转换成多种氨基酸混合液(III)，最后使(I)和(III)混合，经浓缩制得可溶性珍珠全成分制剂。然而，这种工艺导致仅仅能够使大约一半的角质蛋白进入珍珠水解液中。
[0005]中国专利CN103393723B公开了一种珍珠粉水解提取液的制备方法，先在98℃保温进行水解，同时采用间歇式超声处理；再经微孔滤膜过滤，得到珍珠粉水解提取液。然而，该方法中水解温度过高，导致角质蛋白变性。
[0006]中国专利CN106265412B公开了一种利用益生菌发酵制备珍珠水解液的方法。将珍珠粉碎后加入食用有机酸，搅拌溶解得有机酸珍珠溶解液，加糖分、水后接种益生菌，发酵培养，压滤得到滤液，灭菌，过滤，得珍珠水解液。该方法将有机酸水解、益生菌发酵相结合，能有效地将珍珠成分中的不溶性物质转化成处于游离状态的可溶性物质，水解程度高，珍珠营养成分损失小。然而，该方法中仅能将小部分约8%左右的角质蛋白转化为可溶性蛋白（包括短链多肽和氨基酸等），水解液中水溶性蛋白含量较低。
[0007]针对现有技术的上述种种不足，迫切需要寻找一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液。

技术实现思路

[0008]为实现上述目的，一方面，本专利技术提供了一种提高珍珠水解液蛋白比例的处理液，所述处理液由水相、有机相和酶组成，其特征在于，所述有机相包含异辛烷和长链烷基季铵盐。
[0009]根据本专利技术所述的处理液，其中，长链烷基季铵盐包含一个或两个具有10
‑
22个碳
原子的烷基。
[0010]有利地，长链烷基季铵盐包含一个或两个具有12
‑
20个碳原子的烷基。
[0011]在一个具体的实施方式中，长链烷基季铵盐包含一个具有16个碳原子的烷基。
[0012]根据本专利技术所述的处理液，其中，长链烷基季铵盐选自十六烷基三甲基溴化铵或十六烷基三甲基氯化铵。
[0013]根据本专利技术所述的处理液，其中，水相和有机相的体积比为1：(20
‑
30)。
[0014]有利地，水相和有机相的体积比为1：(22
‑
28)。
[0015]在一个具体的实施方式中，水相和有机相的体积比为1：25。
[0016]根据本专利技术所述的处理液，其中，所述有机相进一步包含低级醇类溶剂。
[0017]有利地，低级醇类溶剂选自具有1
‑
4个碳原子的烷基醇，包括，但不限于，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、仲丁醇和叔丁醇。
[0018]在一个具体的实施方式中，低级醇类溶剂选自乙醇。
[0019]根据本专利技术所述的处理液，其中，低级醇类溶剂与异辛烷的体积比为1：(4
‑
8)。
[0020]有利地，低级醇类溶剂与异辛烷的体积比为1：(5
‑
7)。
[0021]在一个具体的实施方式中，低级醇类溶剂与异辛烷的体积比为1：6。
[0022]更有利地，所述有机相由异辛烷、低级醇类溶剂和长链烷基季铵盐组成。
[0023]根据本专利技术所述的处理液，其中，所述水相为含有(0.05
‑
0.20)M KCl的PBS缓冲液。
[0024]有利地，所述水相为含有(0.05
‑
0.20)M KCl的PBS缓冲液。
[0025]在一个具体的实施方式中，所述水相为含有0.1M KCl的PBS缓冲液。
[0026]根据本专利技术所述的处理液，其中，PBS缓冲液的pH值为7.0
‑
9.0。
[0027]有利地，PBS缓冲液的pH值为7.5
‑
8.5。
[0028]在一个具体的实施方式中，PBS缓冲液的pH值为8.0。
[0029]根据本专利技术所述的处理液，其中，所述酶选自胰蛋白酶。
[0030]根据本专利技术所述的处理液，其中，胰蛋白酶的酶活为140000
‑
220000U/g。
[0031]有利地，胰蛋白酶的酶活为160000
‑
200000U/g。
[0032]在一个具体的实施方式中，胰蛋白酶的酶活为180000U/g。
[0033]根据本专利技术所述的处理液，其中，所述酶与（水相+有机相）的重量体积比为(0.50
‑
0.80)mg/mL。
[0034]有利地，所述酶与（水相+有机相）的重量体积比为(0.60
‑
0.70)mg/mL。
[0035]在一个具体的实施方式中，所述酶与（水相+有机相）的重量体积比为0.64mg/mL。
[0036]另一方面，本专利技术还提供了一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法，所述方法包括：获得纳米珍珠粉；纳米珍珠粉与处理液混合并振荡均匀，酶解处理，离心，静置分层，取上清液；将上清液与等体积的KCl水溶液混合并振荡均匀，离心，静置分层，取下清液。
[0037]根据本专利技术的方法，其中，纳米珍珠粉的平均粒径为20
‑
60nm。
[0038]有利地，纳米珍珠粉的平均粒径为30
‑
50nm。
[0039]在一个具体的实施方式中，纳米珍珠粉的平均粒径为40nm。
[0040]在本专利技术中，纳米珍珠粉的制备方法是现有技术中已知的。
[0041]在一个具体实施方式中，纳米珍珠粉的制备方法按照毛秋华（《中国组织工程研究》，22，3510）所记载的方法进行。
[0042]根据本专利技术的方法，其中，酶解温度为40
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液，所述处理液由水相、有机相和酶组成，其特征在于，所述有机相包含异辛烷和长链烷基季铵盐。2.根据权利要求1所述的处理液，其中，长链烷基季铵盐包含一个或两个具有10
‑
22个碳原子的烷基；有利地，长链烷基季铵盐选自十六烷基三甲基溴化铵或十六烷基三甲基氯化铵。3.根据权利要求1或2所述的处理液，其中，水相和有机相的体积比为1：(20
‑
30)；和/或，所述有机相进一步包含低级醇类溶剂；有利地，低级醇类溶剂与异辛烷的体积比为1：(4
‑
8)。4.根据权利要求1或2所述的处理液，其中，所述水相为含有(0.05
‑
0.20)M KCl的PBS缓冲液；和/或，PBS缓冲液的pH值为7.0
‑
9.0。5.根据权利要求1或2所述的处理液，其中，所述酶选自胰蛋白酶；和/或，胰蛋白酶的酶活为140000

【专利技术属性】
技术研发人员：金华燕，赵子越，施杰，费状丽，周君超，
申请(专利权)人：浙江爱诺生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：