衍生自分拣蛋白的肽制造技术

一种衍生自人分拣蛋白的分离的多肽，其包含或组成为与序列SEQ ID NO 2 Val Leu Ile Val Lys Lys Tyr Val Cys Gly Gly Arg Phe Leu Val Mis Arg Tyr Ser Val Leu Gin Gin Mis Ala Glu Ala Asn Gly Val Asp Gly Val Asp Ala Leu Asp Thr Ala Ser Mis Thr Asn Lys Ser Gly Tyr Mis Asp Asp SerAsp GluAsp Leu Leu Glu具有至少80％同一性的氨基酸序列，条件是所述多肽不包含序列SEQ ID NO 3或与前述序列SEQ ID NO 3具有至少80％同一性的序列，其用作药物。其用作药物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】衍生自分拣蛋白的肽
[0001]本专利技术涉及衍生自分拣蛋白的肽及其在与分拣蛋白失调相关的病理例如癌症特别是非小细胞肺癌、神经系统病症特别是帕金森病、阿尔茨海默病、冠心病和动脉粥样硬化中的用途。
[0002]分拣蛋白(NCBI，NP
‑
002950，2019年6月18日)或NTSR3(神经降压素受体3)最初是在神经系统中发现和表征的。其基因SORT1(NM_002959)位于1号染色体的短臂上基因座1p13.21(109 309 568
‑
109 397 951)处。与所述的前两种神经降压素受体NTSR1和NTSR2(分别位于20号和2号染色体上；NM_002531和NM_012344)——具有七个跨膜结构域的G蛋白偶联受体不同，分拣蛋白为I型受体。它的细胞外部分与四个其他成员：SORCS1(包含受体1的分拣蛋白相关的VPS10结构域)、SORCS2(包含受体2的分拣蛋白相关的VPS10结构域)、SORCS3(含受体3的分拣蛋白相关的VPS10结构域)和SORLA(分拣蛋白相关的受体1)共享VPS10(液泡蛋白分选)结构域。该VPS10家族的成员组既可作为高尔基体区室中的分选受体，又可作为可溶性液泡蛋白的转运体。
[0003]分拣蛋白表达无处不在，但在大脑、脊髓、睾丸和骨骼肌肉系统中保持较高。它在内质网(ER)中以831个氨基酸(aa)的前体蛋白形式合成并对应于序列SEQ ID NO 1。在其N
‑
端部分，使得可以将分拣蛋白运输通过ER和高尔基体网络的信号肽先于44个aa的前肽。该前肽掩盖了结构域VPS10，从而防止ER与分拣蛋白的配体以其未成熟形式结合。在高尔基体中，弗林蛋白酶转化酶切割该前肽，从而释放其以及于VPS10结构域并激活分拣蛋白的分选功能。释放的前肽对应于氨基酸1至44的残基，具有生物活性。生成衍生自该前肽(残基17至28)、通过添加APLRP残基修饰的分子并命名为“spadin”。后者通过抑制TREK
‑
1钾通道而具有抗抑郁作用(US2012322060和EP 3099313)。一旦成熟，分拣蛋白经由其VPS10结构域与不同的配体结合，例如神经生长因子的前体(pro
‑
NGF)或脑源性神经营养因子的前体(pro
‑
BDNF)、颗粒蛋白前体、脂蛋白脂肪酶、4型葡萄糖转运体(GLUT4)、RAP12并包括其自身的前肽。因此，分拣蛋白似乎通过将过量的神经营养因子引导至溶酶体来对分泌的神经营养因子的量起调节作用(PMID：21730062 Evans S.F.et al.J.Biol.Chem.(2011)，286(34)，29556
‑
29567)。
[0004]在细胞膜水平上，分拣蛋白可i)经由其细胞内部分中所含的基序再循环到内体或反式高尔基体，或ii)经由其VPS10结构域确保其作为辅助受体的第二功能并与膜受体例如死亡结构域受体p75NTR或促进细胞信号传导激活的神经营养因子受体(TrkA、
‑
B、
‑
C)形成异二聚体。VPS10结构域以保存在酵母和人类间的富含半胱氨酸的结构的形式构成分拣蛋白的整个管腔/细胞外结构域。其结晶结构(PDB：3F6K，https：//www.rcsb.org/)在其天然配体神经降压素的存在下于中性pH下获得。VPS10结构域分为三个结构域；N
‑
末端部分(分拣蛋白残基45至576)形成由十个亚结构形成的螺旋结构，所述亚结构以β折叠形式组织，神经降压素的C
‑
末端部分在其中心处结合，随后是两个称为10CCa和10CCb的小结构域(分别为分拣蛋白残基577至633和634至716)。这两个结构域构成10CC模块，其包含很少的二级结构并与螺旋结构强烈相互作用。在其细胞内分选功能中，分拣蛋白暴露于不同亚细胞区室之间的pH变化，特别是在晚期内体中，其中后者的酸度允许与其受体相关的配体的释放。
VPS10结构域在酸性pH(5.5)下的晶体结构揭示了螺旋结构的整体扭曲，然后是分拣蛋白的同二聚化，因此阻断了对配体的及于。
[0005]分拣蛋白的细胞内部分包含与甘露糖
‑6‑
磷酸(M6PR)受体的C
‑
末端结构域的序列同源性，特别是不依赖阳离子的或阳离子非依赖性的甘露糖
‑6‑
磷酸受体(CI
‑
M6PR)。事实上，CI
‑
M6PR和分拣蛋白的C
‑
末端序列共享八个共同的氨基酸(DD SDEDLL)。该八肽包含两个功能位点：酪蛋白激酶II磷酸化位点(丝氨酸残基)和双亮氨酸基序(LL)。这两个位点代表了M6PR在高尔基体区室与晚期内体之间的转运的基本功能基序。尽管酪蛋白激酶II磷酸化位点对于形成反式高尔基体囊泡所必需的衔接蛋白1(AP
‑
1)的募集是必不可少的，但双亮氨酸基序参与了随后的分选机制。八肽内生成的突变改变CI
‑
M6PR与高尔基体相关的、含γ衔接蛋白耳的、ADP核糖基化因子结合蛋白(GGA)的VHS结构域的相互作用。由于GGA与特定转运所需的网格蛋白结合的事实，这些突变阻断CI
‑
M6PR从高尔基体中的退出。另外，这些相同的突变将改变CI
‑
M6PR在其逆行转运过程中从胞吞再循环区室(ERC)到其他细胞内细胞器的分选，而不因此改变它们从细胞膜开始内化的速率。因此，该基序代表了一种主动分选/内化信号，该信号引导其处于不同细胞内转运水平下的的受体。除了双亮氨酸基序(蛋白质的残基829和830)外，分拣蛋白还包含至少两种其他分选信号：紧邻跨膜结构域的四肽YSVL和FLVHRY基序(分别位于分拣蛋白的792至795和787至792位)。四肽YSVL遵循共有基序YXXZ，其中Z代表庞大的或芳香族疏水残基。该序列参与膜蛋白例如LRP(脂蛋白受体相关蛋白)、反式高尔基体网络38/41(TGN 38/41)的膜蛋白和46kDa M6PR 20
‑
22的内化和快速分选。根据M6PR受体和LRP家族的受体的转运所必需的基序(F/Y)XXXX(F/Y)，FLVHRY序列构成另一种分选/内化信号。
[0006]分拣蛋白，特别是人分拣蛋白，已知在阿尔茨海默病、帕金森病和糖尿病中具有不同的作用。其还牵涉在神经降压素对前列腺、胰腺或结肠来源的癌细胞的生长的影响中(Dal Farra C.et al.Int J Cancer，2001；92，503
‑
9)并在脂蛋白代谢的控制中具有重要功能(Current Opinion in Lipidology，2011，22(2)，79
‑
85)。
[0007]使得可以鉴定其组成的不同结构域的作用的基于分拣蛋白的人工敲除的大量研究已允许展示与淀粉样前体蛋白(APP)相互作用的结构域。(Miao Yang et al.，PLOS ONE，8，No 5，2013年5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种衍生自人分拣蛋白的分离的多肽，其包含或组成为与序列SEQ ID NO 2 Val Leu Ile Val Lys Lys Tyr Val Cys Gly Gly Arg Phe Leu Val His Arg Tyr Ser Val Leu Gln Gln His Ala Glu Ala Asn Gly Val Asp Gly ValAsp Ala Leu Asp Thr Ala Ser His Thr Asn Lys Ser Gly Tyr His Asp Asp Ser Asp Glu Asp Leu Leu Glu具有至少80％同一性的氨基酸序列，条件是所述多肽不包含序列SEQ ID NO 3或与所述序列SEQ ID NO 3具有至少80％同一性的序列，或其药学上可接受的盐之一，其用作药物。2.根据权利要求1所述的用作药物的多肽，其特征在于，所述肽与细胞穿透肽共价结合。3.根据权利要求2所述的用作药物的多肽，其特征在于，所述细胞穿透肽选自HIV
‑
1 Tat、穿透素、源自触角蛋白的同源结构域的肽、源自天青蛋白的p28、来自单纯疱疹病毒(HSV
‑
1)的VP22、序列SEQ ID NO 11的合成MAP肽或序列SEQ ID NO 12的DPV1047。4.根据权利要求1至3中任一项所述的用作药物的多肽，其用在与分拣蛋白失调相关的病理的治疗中，所述病理选自癌症特别是非小细胞肺癌、神经系统病症特别是帕金森病、阿尔茨海默病、冠心病和动脉粥样硬化。5.根据权利要求1至4中任一项所述的用作药物的多肽，其特征在于，其以适合于局部、区域、全身或连续施用的药物形式提供。6.根据权利要求1至5中任一项所述的用作药物的多肽，其与至少一种第二分子联用，所述第二分子选自抗肿瘤化疗分子、酪氨酸激酶受体抑制剂、用于靶向治疗中的信号传导通路抑制剂、对癌基因受体特异性的抗体、T
‑
淋巴细胞检查点抑制剂、激素、毒素和放疗剂。7.一种衍生自人分拣蛋白的分离的多肽，其包含或组成为与序列SEQ ID NO 2 Val Leu Ile Val Lys Lys Tyr Val Cys Gly Gly Arg Phe Leu Val His Arg Tyr Ser Val Leu Gln Gln His Ala Glu Ala Asn Gly Val Asp Gly Val Asp Ala Leu Asp Thr Ala Ser His Thr Asn Lys Ser Gly Tyr His Asp Asp Ser Asp Glu Asp Leu Leu Glu具有至少80％...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡蜜拉，
申请(专利权)人：利摩日大学，
类型：发明
国别省市：