一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针及其制备方法与应用，属于医学诊断技术领域。该超声分子探针的制备过程包括以下步骤：(1)合成二硬脂酰磷脂酰乙醇胺

【技术实现步骤摘要】
一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于医学诊断
，尤其涉及一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]临床上常用的诊断心脏移植物血管病变(Cardiac allograft vasculopathy,CAV)的技术主要包括冠脉造影及血管内超声，皆为有创性技术，其费用昂贵且并发症的风险较高。常规超声心动图、冠状动脉造影及血管内超声等技术提示CAV时，病变已发展为中晚期，对早期病变缺乏敏感性，限制了临床应用。超声靶向分子成像在器官移植领域主要应用于监测器官移植术后排斥反应及血管栓塞等情况，评价移植物的炎症反应并进行靶向治疗，具有无创、无辐射、早期诊断、实时动态监测等优势。目前已有大量研究证实了巨噬细胞在慢性排斥反应中对器官移植物的重要作用，并且有研究发现，M2型巨噬细胞与心脏移植术后CAV发生冠脉微循环病变及心肌纤维化密切相关。因此，通过靶向示踪M2型巨噬细胞来监测心脏移植术后CAV的发生与发展，具有良好的应用前景。甘露糖受体是一种在单核/巨噬细胞细胞质内表达的特异性抗原，可用于定位M2型巨噬细胞，为无创靶向监测这一免疫反应过程提供可能。目前尚未有针对甘露糖受体的超声分子探针应用于心脏移植慢性排斥反应的早期诊断。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0004](1)合成二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖
[0005]将4
‑
异硫氢酸苯基
‑
a
‑
D
‑
甘露糖苷与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基混合，溶解于无水二氯甲烷中，并加入无水三乙胺进行催化，抽真空后通入氮气保护，室温下反应6
‑
8h；
[0006]旋转蒸发仪去除多余的无水二氯甲烷，加入适量的超纯水溶解产物，并透析，将透析后的液体冻干后即获得产物二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖，其结构式如下：
[0007][0008](2)制备超声分子探针
[0009]将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖与二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000分别溶于三氯甲烷，获得浓度分别为18
‑
22mg/ml的磷脂溶液；
[0010]将二硬脂酰基磷脂酰胆碱溶液、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000溶液、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖溶液按摩尔比9:0.5:0.5移入试管中，混匀不同的磷脂成分，在氮气流的作用下使氯仿挥发掉，直至在试管壁上形成一层薄薄的磷脂薄膜，抽真空去除多余的三氯甲烷；
[0011]在试管中加入水化液，将得到的磷脂溶液加热至55
‑
60℃，使溶液分散至透明，即获得超声分子探针；
[0012]所述水化液含有10％(体积比)甘油、10％(体积比)1，2丙二醇和80％(体积比)的0.1M的tris溶液，用盐酸调其PH值到7.4。
[0013]优选地，所述步骤(1)中4
‑
异硫氢酸苯基
‑
a
‑
D
‑
甘露糖苷与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基的摩尔比为1:2
‑
1:10。
[0014]更优选地，所述步骤(1)中无水三乙胺的加入量为10μl。
[0015]更优选地，所述步骤(2)中二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖与二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000分别溶于三氯甲烷，获得浓度分别为20mg/ml的磷脂溶液。
[0016]更优选地，所述步骤(2)中水化液的加入量为4
‑
6ml。
[0017]更优选地，所述步骤(2)中二硬脂酰基磷脂酰胆碱溶液、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000溶液、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖溶液的摩尔比为9:0.5:0.5。
[0018]本专利技术的另一方面提供了一种诊断试剂，所述诊断试剂包括上述靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针。
[0019]本专利技术的另一方面提供了靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针在制备心脏移植慢性排斥反应诊断试剂中的应用。
[0020]本专利技术的另一方面提供了上述超声分子探针制备方法在制备心脏移植慢性排斥反应诊断试剂中的应用。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0022]本专利技术制备了一种靶向甘露糖受体的超声分子探针，其对M2型巨噬细胞具有良好的亲和力，可将其应用于心脏移植慢性排斥反应的早期诊断，且具有高敏感性、无创、无辐射、实时动态监测的优点，能够实现慢性排斥反应的早期诊断。
附图说明
[0023]图1为实施例1中超声分子探针的结构示意图。
[0024]图2为试验例1中微泡体外成像效果图。
[0025]图3为试验例2中M2型巨噬细胞流式鉴定图。
[0026]图4为试验例2中靶向微泡与M2型巨噬细胞粘附效果图。
[0027]图5为试验例3中分别注射普通微泡(MB)和甘露糖靶向微泡(Man
‑
MB)在大鼠移植心脏的成像效果及对比图。
[0028]图6为试验例3中分别注射MB和Man
‑
MB的大鼠移植心脏成像信号强度图。
[0029]图7为试验例3中大鼠心脏CAV模型心脏切片EVG染色图，其中左侧为成功制备的大鼠腹腔异位心脏移植模型，右侧为发生慢性排斥反应的移植心脏EVG染色。
[0030]实施例1
[0031]本实施例提供一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针，其制备方法包括以下步骤：
[0032](1)合成二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖
[0033]将9mg 4
‑
异硫氢酸苯基
‑
a
‑
D
‑
甘露糖苷(CAS号为96345
‑
79
‑
8)与8mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基(CAS号为474922
‑
26
‑
4)混合，溶解于20ml无水二氯甲烷中，并加入10μl无水三乙胺进行催化，抽真空后通入氮气保护，室温下反应6
‑
8h；旋转蒸发仪去除多余的无水二氯甲烷，加入适量的超纯水溶解产物，超纯水作为透析外液透析24h；将透本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向M2型巨噬细胞甘露糖受体的超声分子探针的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)合成二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖将4
‑
异硫氢酸苯基
‑
a
‑
D
‑
甘露糖苷与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基混合，溶解于无水二氯甲烷中，并加入无水三乙胺进行催化，抽真空后通入氮气保护，室温下反应6
‑
8h；旋转蒸发仪去除多余的无水二氯甲烷，加入适量的超纯水溶解产物，并透析，将透析后的液体冻干后即获得产物二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖；(2)制备超声分子探针将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖与二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000分别溶于三氯甲烷，获得浓度分别为18
‑
22mg/ml的磷脂溶液；将二硬脂酰基磷脂酰胆碱溶液、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000溶液、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇
‑
甘露糖溶液按摩尔比(9.5
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n)：0.5：n，移入试管中，混匀不同的磷脂成分，在氮气流的作用下使氯仿挥发掉，直至在试管壁上形成一层薄薄的磷脂薄膜，抽真空去除多余的三氯甲烷，所述n的取值为0.1～1；在试管中加入水化液，将得到的磷脂溶液加热至55
‑
60℃，使溶液分散至透明，即...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文谦，谢明星，吕清，徐佳，邓诚，张丽，高瑭，陈逸寒，靳巧锋，方凌云，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：