一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用技术

本申请提供一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用，所述方法是通过检测蛋白的表达以达到诊断疾病的目的，或通过抑制或消除蛋白的活性、减少或去除蛋白以达到治疗疾病的目的。本发明专利技术的有益效果为，以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用，其中的蛋白(RASON)已被证实会在恶性肿瘤、尤其是KRAS基因突变诱导的恶性肿瘤中过表达，因此，将该蛋白应用于诊断、治疗恶性肿瘤的产品中，能够有效的利用其自身特性对恶性肿瘤进行诊断和治疗，市场应用前景广阔。市场应用前景广阔。市场应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用


[0001]本专利涉及生物医药
，特别地涉及一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用。

技术介绍

[0002]长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是一种长度大于200nt的非编码RNA，其在转录沉默、转录激活、染色体修饰、核内运输等方面具有重要功能。但是已经有一些研究表明，lncRNA能编码一些短肽。
[0003]Linc00673又称Linc00511，是一条长度为2275nt的lncRNA，其位于人类染色体17q25.1。已有一些报道表明，该lncRNA与一些恶性肿瘤疾病的诊断与治疗相关，例如：中国专利CN201810983179和CN201810983180公开了一种用于诊断肺癌转移的lncRNA检测试剂盒及其应用，公开了lncRNA LINC00511和ENSG00000270607联合使用作为肺癌转移诊断分子标记物的应用；中国专利CN201710216076公开了LINC00511可以作为一种用于肝癌诊疗的生物标志物；中国专利CN201610927513公开了长链非编码RNALINC00673用于制备口腔肿瘤患者的预后制剂的技术方案；中国专利CN201610926559公开了长链非编码R NALINC00673的siRNA的应用及抑制制剂，通过靶向干扰LINC00673的表达可明显抑制口腔癌细胞的侵袭与迁移能力。
[0004]Epidermal growth factor receptor，简称为EGFR，是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。该家族包括HER1(erbB1，EGFR)、HER2(erbB2，NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。
[0005]EGFR的表达和激活与许多癌前病变和恶性肿瘤有关。EGFR至少与33％～50％的人类上皮肿瘤相关，在乳腺癌、膀胱癌、肺癌及前列腺癌等许多恶性肿瘤中都发现有EGFR的过度表达。许多证据显示EGFR在肿瘤细胞的恶性增殖中起重要作用。目前已有很多针对EGFR的抑制剂成为恶性肿瘤的治疗药物，例如，第一代EGFR抑制剂Gefitinib(易瑞沙，Iressa)和Erlotinib(特罗凯，Tarceva)；第二代EGFR抑制剂则以阿伐替尼(Afatinib，BIBW
‑
2992，勃林格殷格翰，首个获得FDA批准的不可逆EGFR)，Dacomitinib(PF
‑
00299804，辉瑞，两项三期临床结果欠佳)和来那替尼(Neratinib，HKI
‑
272，辉瑞，三期临床大获成功)为代表；第三代EGFR抑制剂奥西替尼等等。
[0006]KRAS蛋白处于EGFR信号通路的下游。在正常生理情况下，EGFR信号通路被活化后，KRAS蛋白短暂激活，其后迅速失活，KRAS激活/失活效应是受控的。而KRAS基因突变时，可以导致EGFR信号通路持续激活，加速肿瘤细胞增殖。KRAS基因突变96％发生在第2号外显子的12、13号密码子，这些KRAS突变型编码异常的蛋白，刺激促进恶性肿瘤细胞的生长和扩散；并且不受上游EGFR的信号影响，所以针对KRAS基因突变的患者，通常对其使用EGFR抑制剂
的治疗效果差，甚至无治疗效果。
[0007]因此，如何高效诊断、治疗恶性肿瘤，特别是KRAS基因突变诱导的恶性肿瘤是目前亟待解决的问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用，所述方法是通过检测蛋白的表达以达到诊断疾病的目的，或通过抑制或消除蛋白的活性、减少或去除蛋白以达到治疗疾病的目的。
[0009]可选地，上述的应用中，所述蛋白由SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成；
[0010]或是在SEQ ID No：1所示的氨基酸序列中添加、替换或缺失1
‑
n个氨基酸形成具有相同功能的蛋白，n为正整数；
[0011]或在SEQ ID No：1所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；
[0012]或是与SEQ ID No：1所示的氨基酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的蛋白。
[0013]SEQ ID No：1(人LINC00673
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CDS
‑
108aa)的序列如下所示：
[0014]MRGEERRGAASRLGDVPARVGGMRSLGPPGARSLPASRAHPWGREGGRLRTPARDL RESGAQRTGSGCSLALDGKWGIGWGAADPLTWITWCVSAGLRRPTTSSPSVD。
[0015]可选地，上述的应用中，编码所述蛋白的基因由SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成；
[0016]或是在SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成中添加、替换或缺失1
‑
n个碱基生成的核苷酸序列，n为正整数；
[0017]或是与SEQ ID No：2所示的核苷酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的基因。
[0018]SEQ ID No：2，即LINC00673
‑
108aa(DNA模板链)的序列如下所示：
[0019]atgcgcggggaagaaaggcgaggagcggcgtccaggctgggtgatgtcccagcacgagtaggcgggatgcgctcgcttggtcctccgggcgcccggtccctgcccgcgtcgcgcgcccacccctggggacgagaaggcggccgcctgaggacccccgcccgcgacctccgcgagtctggagcgcagaggacagggtctggctgctctttggccttggatggaaagtggggaattgggtggggggctgcggaccccttaacgtggattacttggtgtgtatcagctgggctcagaagacccacgacctcttctccatccgtggattga。
[0020]编码RASON蛋白的基因(DNA序列)，其核苷酸序列所转录的RNA片段，是长链非编码RNA LINC00673中的一部分。
[0021]SEQ ID No：3，即人LINC00673
‑
full(DNA模板链)的具体序列为：
[0022]agggcgcgcaggcggcgcgggtgcgcggtgcggcgctggtatccagaggacgcggtcaccgcctctggcatttgtcgttctgcgcttctccgcaaggaccctctgttaggcaggcgccc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以蛋白为作用对象的方法在诊断和治疗KRAS基因突变相关疾病中的应用，其特征在于，所述方法是通过检测蛋白的表达以达到诊断疾病的目的，或通过抑制或消除蛋白的活性、减少或去除蛋白以达到治疗疾病的目的。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蛋白由SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成；或是在SEQ ID No：1所示的氨基酸序列中添加、替换或缺失1
‑
n个氨基酸形成具有相同功能的蛋白，n为正整数；或在SEQ ID No：1所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；或是与SEQ ID No：1所示的氨基酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的蛋白。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，编码所述蛋白的基因由SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成；或是在SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成中添加、替换或缺失1
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n个碱基生成的核苷酸序列，n为正整数；或是与SEQ ID No：2所示的核苷酸序列具有75％以上同源性且具有相同功能的基因。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的应用，其特征在于，所述方法包括：1)检测或抑制权利要求2所述蛋白的表达的方法；2)使权利要求2所述蛋白失活的方法；3)检测或干扰权利要求3所述基因的转录和翻译的方法；4)使权利要求3所述基因失活的方法。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述方法包括：能够检测权利要求2所述蛋白表达的抗体检测方法、能够检测权利要求3所述基因转录的PCR方法、能够去除权利要求3所述基因的基因编辑方法、能够去除权利要求3所述基因中编码权利要求2所述蛋白的ORF的全部序列或部分序列或使其产生移码突变序列的基因编辑方法、能够减少或去除权利要求3所述基因转录的RNA的RNAi方法、能够减少或去除权利要求3所述基因转录的RNA中编码权利要求2所述蛋白的ORF序列的RNAi方法、能够抑制权利要求3所述基因转录的RNA的抑制方法、能够降解权利要求3所述基因转录的RNA的降解方法、能够抑制权利要求2所述蛋白或抑制权利要求2所述蛋白与RAS结合的抑制方法、能够降解权利要求2所述蛋白的降解方法。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述siRNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：4
‑
SEQ ID No：15的任意一种所示；所述shRNA表达质粒基于序列表中SEQ ID No：4
‑
SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张弩，闫超，姚宏伟，
申请(专利权)人：张弩，
类型：发明
国别省市：