嵌合抗原受体树突状细胞(CAR-DC)及其制备和使用方法技术

在本公开内容的各个方面中提供了制备修饰的嵌合抗原受体树突状细胞(CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原受体树突状细胞(CAR
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DC)及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用本申请要求于2019年12月16日提交的美国临时申请序列号62/948,612的权益，所述美国临时申请通过引用以其整体并入本文。
[0002]政府权利本专利技术在美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的OD026427下由政府支持完成。政府在本专利技术中拥有一定的权利。


[0003]本文公开的是在受试者中产生适应性免疫应答的组合物和方法。具体地，本公开内容涉及经遗传修饰以表达一种或多种嵌合抗原受体(CAR)的树突状细胞，以及使用所述细胞治疗癌症的方法。
[0004]序列表的引用本申请含有序列表，所述序列表已经由EFS
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Web以ASCII格式提交，并且在此通过引用以其整体并入。于2020年12月14日创建的ASCII副本命名为675958_ST25，且大小为7.64KB字节。

技术介绍

[0005]利用生物体的免疫系统来对抗疾病例如癌症是一种有力的方法。最近的工作已鉴定了在T细胞的表面上展示的两种关键免疫检查点蛋白。这些细胞表面受体结合在其它细胞如抗原呈递细胞(APC)上展示的某些配体，并且将它们识别为自身，这导致T细胞活性的减弱并对免疫应答施加制动。研究人员在数十年的工作过程中已显示了，阻止T细胞上的这些受体结合其在APC或肿瘤细胞上的配体解除阻断，并且触发对肿瘤细胞的攻击。
[0006]对于T细胞的完全激活，对负免疫调节的这种制动是必要的，但并不足够。另一种表面受体T细胞受体(TCR)也需要识别且结合特异性地衍生自肿瘤细胞并在APC上展示的配体。目前存在如果患者具有抗肿瘤T细胞，则转移性癌症有时可治愈的证据。对于抗肿瘤T细胞“释放制动”的检查点抑制剂，在高达10
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15%的转移性黑色素瘤和其它几种类型的癌症中诱导完全应答(CR)，其中一些是持久的。
[0007]嵌合抗原受体(CAR)疗法已实现了针对血液系统恶性肿瘤的巨大的临床成功。它基于具有抗原识别和信号转导功能两者的合成受体。CAR中的单链可变片段(scFv)保留了其来自原始单克隆抗体的重链和轻链可变区的抗原识别特异性。同时，CAR构建体的信号转导在很大程度上依赖原始免疫受体的信号传导结构域。CAR T细胞在终末期复发性急性成淋巴细胞性白血病(ALL)患者中显示出显著的80
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100% CR，但在实体瘤中显示出1% CR。
[0008]理解且克服每种疗法的失败可能有助于对剩余的癌症患者带来持久的缓解。失败的原因是多方面的，但如果患者并未首先具有适应性抗肿瘤T细胞应答(这在具有较高突变负荷的肿瘤中更可能)，则检查点抑制剂在基线时无效。如果不是所有细胞都表达靶抗原，则实体瘤逃避CAR T识别。在患者中成功地产生适应性免疫应答将克服两类免疫疗法的失
败。然而，这仍然难以实现。
[0009]因此，本领域需要用于特异性地靶向各种癌症或肿瘤细胞，同时通过利用抗肿瘤T细胞产生适应性免疫应答的组合物和方法。

技术实现思路

[0010]在本公开内容的各个方面中提供了嵌合抗原受体树突状细胞(CAR
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DC)以及制备和使用CAR
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DC的方法。
[0011]本公开内容的一个方面提供了包含嵌合抗原受体(CAR)的修饰的细胞，其中所述CAR包含：抗原结合结构域；跨膜结构域；包含FMS样酪氨酸激酶3 (Flt3)信号传导结构域的细胞内结构域；和/或所述修饰的细胞是树突状细胞或其前体或祖细胞。
[0012]本公开内容的另一个方面提供了嵌合抗原受体(CAR)构建体，其包含：(i)抗原结合结构域；(ii)跨膜结构域；和/或(iii)包含FMS样酪氨酸激酶3 (Flt3)信号传导结构域的细胞内信号传导结构域，其中所述CAR构建体能够在树突状细胞(DC)或其前体或祖细胞中表达或发挥功能。
[0013]在一些实施方案中，树突状细胞选自cDC1细胞或其前体或祖先。
[0014]本公开内容的另一个方面提供了修饰的细胞，其包含编码CAR的第一核酸序列，或编码抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的第二核酸序列。
[0015]在一些实施方案中，第一细胞内核酸序列编码包含Flt3的蛋白质产物或基于Flt3的蛋白质产物，或后续的细胞内核酸序列编码包含Flt3的蛋白质产物或基于Flt3的蛋白质产物。
[0016]在一些实施方案中，CAR进一步包含信号肽或另外的细胞外结构域。
[0017]在一些实施方案中，修饰的细胞是常规1型树突状细胞(cDC1)。
[0018]在一些实施方案中，修饰的细胞能够进行抗原交叉呈递、适应性抗肿瘤免疫应答或激活抗肿瘤T细胞。
[0019]在一些实施方案中，抗原结合结构域包含抗体或其片段。
[0020]在一些实施方案中，抗体对肿瘤细胞抗原具有结合亲和力。
[0021]在一些实施方案中，肿瘤细胞抗原是EphA2。
[0022]在一些实施方案中，抗原结合结构域针对选自以下的疾病相关抗原：EphA2、EGFRviii、AFP、CEA、CA
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125、MUC
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1、CD123、CD30、SlamF7、CD33、EGFRvIII、BCMA、GD2、CD38、PSMA、B7H3、EPCAM、IL
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13Ra2、PSCA、间皮素、Her2、CD19、CD20、CD22、sial
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LewisA、LewisY、CIAX或另一种肿瘤富集蛋白质。
[0023]在一些实施方案中，修饰的细胞能够选择性地吞食肿瘤细胞、交叉呈递肿瘤抗原和/或激活T细胞，以响应肿瘤抗原。
[0024]在一些实施方案中，修饰的细胞能够交叉呈递肿瘤抗原(或具有肿瘤抗原交叉呈递)，其中抗原交叉呈递是细胞在I型主要组织相容性复合物分子(MHC I)上呈递内化抗原的能力，其对于针对肿瘤细胞的有效适应性免疫应答是必需的。
[0025]在一些实施方案中，修饰的细胞能够消除CAR靶向的抗原阳性(Ag+)肿瘤，并且通过表位扩散间接消除Ag
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实体瘤细胞(不被CAR识别)。
[0026]本公开内容的另一个方面是包含本文所述的修饰的细胞的药物组合物。
(第三个)的信号传导结构域。底部构建体是对照CAR，其缺乏细胞内信号传导结构域。
[0043]图3显示了CAR表达。用空载体、基于Fc受体的CAR、基于Flt3L的CAR、基于TLR4的CAR或缺乏细胞内结构域的对照CAR转导骨髓细胞。FACS分析(顶行)证实了在y轴上的CAR表达，以及在x轴上的RFP表达。荧光显微镜检查进一步确认了RFP转导标记物(底行)的表达。
[0044]图4A和图4B显示了表达Ova抗原的同源肿瘤与所示CAR一起共温育12小时，随后加入CFSE标记的OT1 T细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的修饰的细胞，其中所述CAR包含：抗原结合结构域；跨膜结构域；包含FMS样酪氨酸激酶3 (Flt3)信号传导结构域的细胞内结构域；和所述修饰的细胞是树突状细胞或其前体或祖细胞。2.一种嵌合抗原受体(CAR)构建体，其包含：(i)抗原结合结构域；(ii)跨膜结构域；和(iii)包含FMS样酪氨酸激酶3 (Flt3)信号传导结构域的细胞内信号传导结构域，其中所述CAR构建体能够在树突状细胞(DC)或其前体或祖细胞中表达或发挥功能。3.一种包含权利要求2的CAR构建体的修饰的树突状细胞，其中所述树突状细胞选自cDC1细胞或其前体或祖先。4.一种修饰的细胞，其包含编码权利要求2的CAR的第一核酸序列，或编码抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的第二核酸序列。5.权利要求4的修饰的细胞，其中第一细胞内核酸序列编码包含Flt3的蛋白质产物或基于Flt3的蛋白质产物，或后续的细胞内核酸序列编码包含Flt3的蛋白质产物或基于Flt3的蛋白质产物。6.权利要求1的修饰的细胞，其中所述CAR进一步包含信号肽或另外的细胞外结构域。7.权利要求1的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞是常规1型树突状细胞(cDC1)。8.权利要求1或3中任一项的修饰的细胞，其中所述祖细胞选自外周血单核细胞(PBMC)、单核细胞和树突状细胞祖先(MDP)、共同髓系祖先(CMP)、淋巴引发的多潜能祖先(LMPP)或共同树突状细胞祖先(CDP)、或干细胞。9.权利要求1的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞能够进行抗原交叉呈递、适应性抗肿瘤免疫应答或激活抗肿瘤T细胞。10.权利要求1的修饰的细胞，其中所述抗原结合结构域包含抗体或其片段。11.权利要求10的修饰的细胞，其中所述抗体对肿瘤细胞抗原具有结合亲和力。12.权利要求11的修饰的细胞，其中所述肿瘤细胞抗原是EphA2。13.权利要求1或3的修饰的细胞，其中所述抗原结合结构域针对选自以下的疾病相关抗原：EphA2、EGFRviii、AFP、CEA、CA
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125、MUC
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1、CD123、CD30、SlamF7、CD33、EGFRvIII、BCMA、GD2、CD38、PSMA、B7H3、EPCAM、IL
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13Ra2、PSCA、间皮素、Her2、CD19、CD20、CD22、sial
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LewisA、LewisY、CIAX或另一种肿瘤富集蛋白质。14.权利要求1或3中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞能够选择性地吞食肿瘤细胞、交叉呈递肿瘤抗原且激活T细胞，以响应所述肿瘤抗原。15. 权利要求1或3中任一项的修饰的细胞，其中所述修饰的细胞能够交叉呈递肿瘤抗原(或具有肿瘤抗原交叉呈递)，其中抗原交叉呈递是细胞在I型主要组织相容性复合物分子...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：