人CXCR5＋CD8＋T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了人CXCR5+CD8+T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用、促进CXCR5+CD8+T细胞增殖的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用、促进CD8+T细胞表面功能分子CXCR5表达的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。本发明专利技术通过小鼠的慢性HBV感染模型的建立，通过流式细胞术实验阐明CXCR5+CD8+T细胞在小鼠的肝脏与脾脏中发挥抗病毒作用的免疫机制。虽然CXCR5+CD8+T细胞呈现部分耗竭状态，但是动物实验表明，其抗病毒功能要强于CXCR5

【技术实现步骤摘要】
人CXCR5+CD8+T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药和免疫学
，具体涉及人CXCR5+CD8+T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。

技术介绍

[0002]已有研究发现，在慢性的淋巴细胞介导的脉络膜从脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus，LCMV)它在感染小鼠后会导致小鼠本身的淋巴组织中表达一群特殊的表达了CXCR5阳性CD8阳性的T淋巴细胞，称之为Tfc，这些细胞会成功的迁移进入B细胞并且进入它的淋巴滤泡之中，一些文献和实验表明了CXCR5+CD8+T的抗病毒效能的耗竭与衰减都是明显要低于其相对的阴性亚群的。最近在一些感染了HIV的患者之中，研究者同样发现了其特异性的CXCR5阳性CD8阳性Tfc细胞，并且它的抗病毒效能还有其它的免疫相关应答的水平在其B细胞的淋巴滤泡之中也很高，与同样的它的阴性亚群相比，表现出更高的抗病毒效能。而Leong等在慢性HIV感染者及慢性LCMV感染小鼠模型中同样发现了病毒特异性的CXCR5阳性CD8阳性的Tfc细胞，通过实验研究表明这样的一群细胞与其它的Tfc细胞有着许多的相同或相似的特征并且仍然拥有类似于记忆性的T淋巴细包的一些功能，并且发现CXCR5阳性CD8阳性Tfc细胞它的细胞毒性分子的表达相较于阴性亚群更低，因此，它的抗病毒效能本应该要低于CXCR5阴性CD8阳性的这一群细胞，但是因为CXCR5阳性的这一群细胞特定表达了CXCR5这样的趋化因子，这样使得其更容易定位在B细胞的淋巴滤泡中，所以当病毒感染后，其特异性的CXCR5阳性CD8阳性的Tfc细胞产生，对于在B淋巴滤泡以及Tfc细胞中感染的病毒就具有更强的抗病毒效能，能更好的清除感染的病毒。Xiao等在感染慢性炎性的鼻息肉的一些组织中发现了一群CD8+T细胞，这群细胞分泌IL
‑
21的水平明显高于其他细胞，另外这一群细胞还同时表达TIM
‑
3,PD
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1,ICOS,CXCR5等分子并且也分泌一些效应因子例如IFN
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r和TNF
‑
a，通过实验研究发现如果将CD8+T细胞与B细胞一起培养来进行功能实验研究，会发现一起培养的B细胞的确能更多的分泌IgG抗体。
[0003]慢性乙型肝炎病毒是一种主要攻击肝脏，通过免疫介导造成肝脏的肝细胞损伤。由于每个个体的差异，个体的免疫功能的不同对于乙型肝炎感染后的控制以及临床治疗的效果都有很大的差异与不同。CD8
+
T细胞的免疫功能在整个HBV感染的过程中对于HBV慢性感染的控制起到了非常重要的作用，然而CD8+T较容易耗竭，这也是乙肝慢性化的一个重要原因。近年来有不同的研究都表面了CD8+T细胞存在着许多的不同亚型，这些亚群的表型与功能都存在很大的差异。不同CD8
+
T细胞亚群在慢性的HBV感染中应该会起到不同的抗病毒作用。因此，深入探究CD8
+
T细胞的不同亚群的具体表型与功能可能有助于找到慢乙肝治愈的新方法。
[0004]目前关于CXCR5+CD8+T细胞在HBV感染后的作用研究还比较缺乏，在HBV感染时，CXCR5+CD8+T细胞是否会发挥功能，是否具有比阴性亚群更强的抗病毒能力，是否具有辅助体液免疫的功能，这些科学问题还有待进一步解决以研发慢性乙肝治愈的新药物和新方
法。

技术实现思路

[0005]本专利技术利用高压尾静脉注射法(HDI)注射pAAV
‑
HBV1.2质粒建立HBV感染小鼠模型，检测CXCR5
+
CD8
+
T细胞在外周血、肝和脾脏中的表型与功能差异；最后通过CXCR5+CD8+T细胞的流式细胞术检测实验，明确CXCR5+CD8+T细胞的抗病毒作用：
[0006]1.通过注射pAAV
‑
HBV1.2质粒建立HBV慢性感染小鼠模型，我们发现HBV慢性感染小鼠脾脏和肝内CXCR5+CD8+T细胞频数均高于CXCR5
‑
CD8+T细胞。与CXCR5－CD8+T细胞相比，CXCR5+CD8+T细胞上高表达TIM
‑
3,PD
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1、和ICOS,CD40L等受体。
[0007]2.分离肝、脾淋巴细胞后，通过HBV抗原肽刺激，我们发现脾脏和肝脏的CXCR5
+
CD8
+
T细胞分泌IFN
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γ和TNF
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a和IL
‑
21能力显著强于与CXCR5—CD8
+
T细胞。而脾脏内CXCR5
+
CD8
+
T细胞分泌IFN
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r以及TNF
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a能力强于肝脏。
[0008]基于上述研究结果，本专利技术保护如下技术方案：
[0009]人CXCR5+CD8+T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。
[0010]促进CXCR5+CD8+T细胞增殖的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。
[0011]促进CD8+T细胞表面功能分子CXCR5表达的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。
[0012]促进CD8+T细胞TNF
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α和IFN
‑
γ表达的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。
[0013]一种治疗慢性乙型肝炎的药物，其活性成分包含人CXCR5+CD8+T细胞。
[0014]一种治疗慢性乙型肝炎的药物，包含促进CXCR5+CD8+T细胞增殖的试剂。
[0015]一种治疗慢性乙型肝炎的药物，包含促进CD8+T细胞表面功能分子CXCR5表达的试剂。
[0016]一种治疗慢性乙型肝炎的药物，包含促进CD8+T细胞TNF
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α和IFN
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γ表达的试剂。
[0017]本专利技术的有益效果是：通过小鼠的慢性HBV感染模型的建立，通过流式细胞术实验阐明CXCR5+CD8+T细胞在小鼠的肝脏与脾脏中发挥抗病毒作用的免疫机制。虽然CXCR5+CD8+T细胞呈现部分耗竭状态，但是动物实验表明，其抗病毒功能要强于CXCR5
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CD8+T细胞。本专利技术为研发慢性乙肝治愈的新药物和新方法打下基础。
附图说明
[0018]图1是pAAV
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HBV1.2质粒转染后第7,14,28,56天小鼠外周血中的HBV DNA、HBsAg定量检测结果。
[0019]图2是pAAV
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HBV1.2质粒转染后第7,14,28,56天小鼠脾脏中HBV特异性CD8+T细胞和HBV特异性CXCR5+CD8+Tfc细胞的频数表达结果。
[0020]图3是转染小鼠脾脏中HBV特异性CXCR5+CD8+Tfc细胞和HBV特异性CXCR5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人CXCR5+CD8+T细胞在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。2.促进CXCR5+CD8+T细胞增殖的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。3.促进CD8+T细胞表面功能分子CXCR5表达的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。4.促进CD8+T细胞分泌TNF
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α和IFN
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γ的试剂在制备治疗慢性乙型肝炎的药物中的应用。5.一种治疗慢性乙型肝炎的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪国瑞，胡鹏，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：