具有改变的ICDSTAT信号转导的CD122制造技术

本发明专利技术涉及修饰的人CD122，其中修饰的人CD122包括一个或多个STAT3结合基序。在一些实施方式中，修饰的人CD122是修饰的正交人CD122，其可以选择性地被同源正交IL2激活。结合至同源IL2配体后，修饰的人CD122能够刺激稳健且持续的STAT3和STAT5信号转导。健且持续的STAT3和STAT5信号转导。健且持续的STAT3和STAT5信号转导。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改变的ICD STAT信号转导的CD122
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2020年1月14日提交的美国临时申请号62/961，157的优先权和权益。所述临时申请的全文通过引用纳入本文用于所有目的。
[0003]附图简要说明
[0004]图1提供了与细胞膜相关联的正交CD122(IL2Rb)多肽的示意图(左)和本专利技术的工程改造受体的代表性实施方式的一个构造，其中包含STAT3基序YRHQ的正交CD122肽的胞内结构域通过甘氨酸
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甘氨酸接头被添加至其羧基末端(右)。
[0005]图2提供了FACS研究的结果，确证了指示的正交CD122的高效转导和表达(hoRb，中间图)和包括其他STAT3基序的正交CD122(右图)在3F8细胞中被高效地诱导和表达。
[0006]图3提供了FACS研究的结果，评估了用指示的正交CD122(hoRb)转导的3F8 T细胞克隆的相对百分比，和包含其他STAT3基序的正交CD122在对正交配体的反应中具有升高的CD26和CD122表达。
[0007]图4提供了在CD4+T细胞(左上)、CD8+T细胞(右上)中评估磷酸STAT3(pSTAT3)水平的结果，所述细胞被工程改造以表达正交hoRb受体构建体，其包含对wtIL2反应的IL2 wtIL2Rb ICD(黑色方块)，对给予正交配体STK
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009反应的wt IL2R ICD(灰色圆圈)和对给予正交配体STK
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009反应的添加了STAT3基序的IL2 wtIL2Rb ICD；和CD4+T细胞(左下)、CD8+T细胞(右下)中的磷酸STAT5(phospho)(pSTAT5)水平，所述细胞被工程改造以表达正交hoRb受体构建体，其包含对wtIL2反应的IL2 wtIL2Rb ICD(黑色方块)，对给予正交配体STK
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009反应的wt IL2R ICD(灰色圆圈)和对给予正交配体STK
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009反应的添加了STAT3基序的IL2 wtIL2Rb ICD。
[0008]图5提供了在CD4+T细胞(左上)、CD8+T细胞(右上)中评估pERK信号转导水平的结果，所述细胞被工程改造以表达正交hoRb受体构建体，其包含对wtIL2反应的IL2 wtIL2Rb ICD(黑色方块)，对给予正交配体STK
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009反应的wt IL2R ICD(灰色圆圈)和对给予正交配体STK
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009反应的添加了STAT3基序的IL2 wtIL2Rb ICD；和CD4+T细胞(左下)、CD8+T细胞(右下)中的pS6K(pSTAT5)水平，所述细胞被工程改造以表达正交hoRb受体构建体，其包含对wtIL2反应的IL2 wtIL2Rb ICD(黑色方块)，对给予正交配体STK
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009反应的wt IL2R ICD(灰色圆圈)和对给予正交配体STK
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009反应的添加了STAT3基序的IL2 wtIL2Rb ICD。
[0009]图6提供了CD19CAR T细胞构建体的细胞毒性评估的评估结果的图示，其包含具有其他STAT3信号转导基序的正交CD122(hoRb)受体，相比包含具有野生型CD122胞内结构域的正交CD122(hoRb)的CD19 CAR T细胞构建体，在10∶1至0.1∶1的多种效应物：靶标(E：T；CART：Raji肿瘤细胞)比率下，证明了相对于包含具有野生型CD122胞内结构域的正交CD122(hoRb)的CD19 CAR T细胞，表达具有表达STAT3基序的胞内结构域(ICD)的hoRb的CD19 CAR T细胞构建体针对Raji肿瘤细胞具有改进的细胞毒性。
[0010]专利技术背景
[0011]受控操纵细胞的分化、发育和增殖，特别是工程改造的免疫细胞，具有重大的临床意义。T细胞已被工程改造用于治疗应用，例如识别和杀死癌细胞、细胞内病原体和参与自
身免疫的细胞。通过选择性地激活和扩增提供特定的功能的工程改造T细胞，并引导为选择性攻击癌细胞，促进工程改造细胞疗法在癌症治疗方面的应用。在一些过继免疫疗法的例子中，从对象的血液中分离出T细胞，离体处理，并重新输注进对象体内。因此，需要能够选择性地激活靶向工程改造细胞群的组合物和方法。
[0012]制造细胞治疗产品的挑战是，这种“活的药物”需要密切控制其环境以保持活力和功能。在实践中，分离的细胞，无论是来自患者(自体)还是来自单一供体来源(同种异体)，在离开对象或受控的培养条件后，开始迅速失去功能。在离开对象或受控培养条件时，成功地维持分离细胞的健康和功能，使分离细胞恢复功能，以重新插入细胞产品制造工作流程或患者体内。
[0013]此外，工程改造T细胞疗法的临床应用的挑战是选择性地刺激这些工程改造细胞，以最大化其治疗效果。提供工程改造T细胞产品的持续维持激活的典型手段是全身给予细胞因子，例如IL2。然而，IL2的全身给予与工程改造细胞群体之外非特异性刺激作用有关，特别是在高剂量下，与人对象的显著毒性有关。此外，IL2在体内的寿命很短，需要经常给予IL2以维持工程改造T细胞处于激活状态。虽然来自初始群体的初始给予的工程改造的细胞在工程改造细胞产品给予后的几个月或甚至几年都可以检测到，单这些工程改造细胞中有相当一部分会陷入静息状态，需要重新激活它们以表现出显著的治疗效果。因此，基于细胞的疗法的挑战是将所需的可调节的行为赋予转移的细胞，其不受内源性信号转导通路的影响，不影响非靶向内源细胞，并且在工程改造细胞群给予对象之后可以选择性地受控。
[0014]CD122是中等亲和力和高亲和力IL2受体复合物的组分。CD122包含天然STAT5识别基序。结合IL2之后，受体激活JAK(激酶)，其磷酸化(phorphorylate)CD122的胞内结构域中的某些酪氨酸。磷酸化的CD122招募并磷酸化STAT5(STAT5A和/或STAT5B)。然后磷酸化的STAT5被二聚体化并转位入核中以激活靶基因的转录，其在多个通路中发挥重要作用，从先天到获得免疫到细胞增殖、分化和存活。Basham等，Nucleic Acids Res.2008年6月；36(11)：3802
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3818。
[0015]最近，已经开发了涉及用重组CD122转化的T细胞的细胞疗法。Sockolosky，等(Science(2018)359∶1037
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1042)和Garcia，等(美国专利申请公开US2018/0228841A1公开于2018年8月16日)描述了正交IL2/CD122配体/受体系统以促进选择性刺激工程改造以表达正交CD122的细胞。表达正交(orthogonal)CD122的工程改造T细胞与对应的正交配体接触，使得这种正交CD122(“区交(orthologonal)IL2”)能够特异性激活这种工程改造T细胞。特别是这种正交IL2受体配体复合物提供了细胞的混合群体，特别是T细胞的混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码修饰的人CD122的多核苷酸，其中所述修饰的人CD122包括一个或多个STAT3结合基序。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述修饰的人CD122包括融合至一个或多个STAT3结合基序的正交人CD122或天然人CD122。3.如权利要求2所述的多核苷酸，其中所述正交人CD122是相对于天然人CD122在选自R41、R42、Q70、K71、T73、T74、V75、S132、H133、Y134、F135、E136和Q214的一个或多个残基处修饰的。4.如权利要求2所述的多核苷酸，其中所述正交人CD122是相对于天然人CD122在H133和Y134处修饰的。5.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述人CD122连接至两个或三个STAT3结合基序。6.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述修饰的人CD122包括与SEQ ID NO：1至少90％同一性的序列，其中所述修饰的人CD122结合至天然IL2多肽或正交IL2多肽。7.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述一个或多个STAT3结合基序包括YX1X2Q的序列，其中X1和X2是任何氨基酸。8.如权利要求7所述的多核苷酸，其中所述X1选自下组：L、R、F、M，X2选自下组：R、K、H和P。9.如权利要求7所述的多核苷酸，其中所述STAT3识别基序选自下组：(a)YLRQ(SEQ ID NO：11)，(b)YLKQ(SEQ ID NO：12)，(c)YRHQ(SEQ ID NO：13)(d)YLRQ(SEQ ID NO：14)，(e)YFKQ(SEQ ID NO：15)，(f)YLPQ(SEQ ID NO：16)，(g)YMPQ(SEQ ID NO：17)，和(h)YDKPH(SEQ ID NO：18)。10.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述一个或多个STAT3结合基序被融合至所述天然人CD122或正交人CD122的胞内结构域的C
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末端，任选地通过接头。11.如权利要求1所述的多核苷酸，其中至少一个所述STAT3结合基序位于对应于天然人CD122的355位和364位之间，其中至少一个所述STAT3识别基序替换天然人CD122的YFTY、YDPY或YSEE的氨基酸序列。12.如权利要求11所述的多核苷酸，其中所述修饰的人CD122是相对于天然人CD122在选自R41、R42、Q70、K71、T73、T74、V75、S132、H133、Y134、F135、E136和Q214的一个或多个残基处进一步修饰的。13.如权利要求10所述的多核苷酸，其中所述接头包括二核苷酸GG。14.如权利要求13所述的多核苷酸，其中所述修饰的CD122包括含有所述接头和至少一个STAT3结合基序的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列选白下组：(i)GGYLRQ(SEQ ID NO：3)，(a)GGYLKQ(SEQ ID NO：4)，(b)GGYRHQ(SEQ ID NO：5)，
(c)GGYLRQ(SEQ ID NO：6)，(d)GGYFKQ(SEQ ID NO：7)，(e)GGYLPQ(SEQ ID NO：8)，(f)GGYMPQ(SEQ ID NO：9)，和(g)GGYDKPH(SEQ ID NO：10)。15.一种包含如权利要求1
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14中任一项所述的多核苷酸的表达载体。16.一种包含权利要求1
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14中任一项所述的多核苷酸的细胞。17.如权利要求16所述的细胞，其中所述细胞进一步表达嵌合抗原受体(CAR)，其中所述细胞是人免疫细胞。18.如权利要求17所述的细胞，其中所述CAR选自下组：CD19 CAR和BCMACAR。19.一种用于选择性激活细胞内受体的试剂盒，所述试剂盒包括(a)表达权利要求1中所述多核苷酸编码的修饰的人CD122的细胞，和(b)人IL2多肽。20.如权利要求19所述的试剂盒，其中所述修饰的人CD122包括SEQ ID NO：1编码的天然人CD122，其中所述人IL2多肽是SEQ ID NO：2编码的天然人IL2多肽。21.如权利要求19所...

【专利技术属性】
技术研发人员：PJ，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：