一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法技术

本发明专利技术公开了以HPTLC分析平台，平行使用图像分析法和光密度法，建立并对比两种快速检测茶饮料中EGCG含量的方法；以三种市售茶饮料为代表性样品，对比两种方法的应用性能，评估图像分析替代仪器依赖的光密度检测作为茶饮料中EGCG含量检测的新型方法的先进性。结果显示，HPTLC

【技术实现步骤摘要】
一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法


[0001]本专利技术涉及食品检测领域，具体涉及一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法。

技术介绍

[0002]茶鲜叶中富含多酚类物质，其含量约占茶鲜叶干重的18%
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36%，其中儿茶素含量最高，约占多酚总量的70%。儿茶素化合物属于黄烷醇类，其基本结构是2
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苯基苯并吡喃。茶叶中分离鉴定的儿茶素多为表型儿茶素，主要有四种，表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG），其中EGCG在儿茶素中含量最高，占儿茶素总量的50%
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80%，具有重要的保健功效。
[0003]近年来，诸多研究证明绿茶的保健功效主要归因于EGCG。EGCG具有抗氧化、杀菌、抑病毒、消炎、减肥等多种功效。Azambuja等研究表明，绿茶EGCG具有抗炎活性，其作用机制为儿茶素可以清除体内活性氧，调节炎症信号通路，抑制炎症发生。茶提取物尤其是绿茶提取物和茶多酚可以抑制动物模型中不同器官肿瘤的形成和发展，实验证据表明，茶多酚特别是EGCG，可抑制酶活性和信号转导途径，从而抑制细胞增殖和增强细胞凋亡，并抑制细胞入侵。Suzuki等研究表明，绿茶具有抗癌、抗肥胖、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病、抗菌、抗病毒等活性，这些活性与EGCG的功效密切关联。Al
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Basher等研究表明，GCG可以通过抑制肝铁蓄积来改善铁超负荷引起的大鼠肝毒性，细胞凋亡和氧化应激，改善肝脏抗氧化能力。也有研究报道绿茶还可用来治疗泌尿结石，龋齿等疾病。此外，通过测定EGCG含量，可以进行茶叶分级，茶叶处理工艺合理性判断，茶饮料质量辨析等，具有重要的应用意义。
[0004]目前，已有多种方法用于测定茶叶及茶饮料中的儿茶素，如高效液相色谱
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二极管阵列检测（HPLC
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DAD）、高效液相色谱
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质谱（HPLC
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MS），衍生后的气相色谱
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质谱（GC
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MS）等。最常用的方法始终基于HPLC分离，然而，基于HPLC的方法存在分析时间长和溶剂浪费的局限性。因此，需要一种通量和性价比高的方法来直观地表征茶产品中的EGCG。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种以HPTLC为分离检测平台，经快捷的FeCl3衍生显影，再联用开源的数字化图片分析软件ImageJ建立一种高效、经济、可视化筛检方法。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用以下方案：一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法，其特征在于包括以下步骤:S1、制备标准溶液和衍生溶液EGCG标准溶液：精确称取10.0mg EGCG标准品，溶于甲醇并定容至10mL，得到1mg/mL标准储备液，4℃冰箱中避光保存，使用时按比例稀释至所需倍数；FeCl3衍生溶液：准确称取5g无水三氯化铁标准品，加入100mL无水乙醇，混合均匀后，4℃冰箱中避光保存备用；
S2、制备茶饮样品溶液取三种茶饮料适量于单独的离心管中，分别过0.45um水系滤膜后得到三种茶饮料样品溶液，在4℃冰箱中冷藏备用；S3、预洗硅胶板取硅胶板放于自动展开缸中，之后将10mL色谱级甲醇从仪器上部两侧槽中注入展开缸，以其作为流动相进行展开预洗，展开至硅胶板顶端后取出，最后用加热器在120
°
C条件下干燥20min，降至室温后，用锡纸包装并保存于密封袋中；S4、HPTLC色谱展开采用0.5MPa氮气为载体，用100μL注射器吸取样品溶液，通过ChromaSprayI型点样仪进行精确点样于20cm
×
10cm的薄层板上，点样的条带长度6mm，条带距离底部10mm，距离左端25mm，对步骤S1和步骤S2制备的标准溶液1～25μL、三种茶饮料样品溶液分别10μL进行点样，在每次取样之间，注射器用甲醇和超纯水分别手动清洗三次，全部样品点样结束后用半自动展开缸进行展开，展开前在仪器的两侧槽内分别注入10mL相对应的流动相，展开完成后将硅胶板置于60
°
加热器上充分干燥5min，以便挥发去除薄层板上残留的有机溶剂；S5、FeCl3变色反应及色谱结果成像将完成色谱分离后的硅胶板通过自动浸渍装置浸入FeCl3衍生液中，移动速度3mm/s，停留时间3s，然后将蘸有FeCl3衍生液的硅胶板置于薄层色谱加热器上50℃加热，当硅胶板黄棕色背景出现明显的黑色斑点后，使用配备佳能EOS700D相机的成像系统对衍生后的硅胶板进行成像记录；S6、分析使用ImageJ软件中像素灰度转化
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积分功能对数字化图像进行模拟扫描定量分析。
[0007]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，步骤S4中展开采用以下具体参数，流动相中氯仿：丙酮：甲酸的体积比为12.5：7.5：2.2，湿度控制3min，预平衡5min，上行展开距离80mm。
[0008]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，步骤S6的具体操作如下，首先将目标条带区域裁剪并保存为PC兼容格式，然后应用ImageJ软件中的“Image
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Color
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SplitChannels”功能，将原始图片拆分为三个颜色通道，选出最佳颜色通道后，将该通道下裁剪好的目标区域，使用“Analyze
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Gels”功能定义一个覆盖目标条带起始线和结束线的矩形，然后提取这些矩形在垂直方向上的像素灰度值，并使用“PlotLanes”功能进行轮廓分析，然后将图形结果转换为可积分色谱图；最后通过“Straightoption”选项绘制基线，使用积分工具“Wandtool”定义色谱图中峰的峰面积，所获取的数据峰面积可直接用于定量分析。
[0009]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，所述PC兼容格式为tif文件。
[0010]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，所述三个颜色通道分别为Blu通道、Red通道、Green通道。
[0011]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，步骤S3中所述硅胶板的尺寸为10cm
×
20cm。
[0012]作为本专利技术HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚(EGCG)的方法的另一种改进，步骤S4中将1～25μL标准溶液和10μL样品溶液，以100nL/s的速度和0.2μL的预排体积进行喷涂于硅胶板上。
[0013]综上所述，本专利技术相对于现有技术其有益效果是：本专利技术以HPTLC为分离检测平台，经快捷的FeCl3衍生显影，再联用开源的数字化图片分析软件ImageJ建立一种高效、经济、可视化筛检方法，此外，平行操本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法，其特征在于包括以下步骤:S1、制备标准溶液和衍生溶液EGCG标准溶液：精确称取10.0mgEGCG标准品，溶于甲醇并定容至10mL，得到1mg/mL标准储备液，4℃冰箱中避光保存，使用时按比例稀释至所需倍数；FeCl3衍生溶液：准确称取5g无水三氯化铁标准品，加入100mL无水乙醇，混合均匀后，4℃冰箱中避光保存备用；S2、制备茶饮样品溶液取三种茶饮料适量于单独的离心管中，分别过0.45um水系滤膜后得到三种茶饮料样品溶液，在4℃冰箱中冷藏备用；S3、预洗硅胶板取硅胶板放于自动展开缸中，之后将10mL色谱级甲醇从仪器上部两侧槽中注入展开缸，以其作为流动相进行展开预洗，展开至硅胶板顶端后取出，最后用加热器在120
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C条件下干燥20min，降至室温后，用锡纸包装并保存于密封袋中；S4、HPTLC色谱展开采用0.5MPa氮气为载体，用100μL注射器吸取样品溶液，通过ChromaSprayI型点样仪进行精确点样于20cm
×
10cm的薄层板上，点样的条带长度6mm，条带距离底部10mm，距离左端25mm，对步骤S1和步骤S2制备的标准溶液1～25μL、三种茶饮料样品溶液分别10 μL进行点样，在每次取样之间，注射器用甲醇和超纯水分别手动清洗三次，全部样品点样结束后用半自动展开缸进行展开，展开前在仪器的两侧槽内分别注入10mL相对应的流动相，展开完成后将硅胶板置于60
°
加热器上充分干燥5min，以便挥发去除薄层板上残留的有机溶剂；S5、FeCl3变色反应及色谱结果成像将完成色谱分离后的硅胶板通过自动浸渍装置浸入FeCl3衍生液中，移动速度3 mm/s，停留时间3 s，然后将蘸有FeCl3衍生液的硅胶板置于薄层色谱加热器上50℃加热，当硅胶板黄棕色背景出现明显的黑色斑点后，使用配备佳能EOS 700D相机的成像系统对衍生后的硅胶板进行成像记录；S6、分析使用ImageJ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈益胜，张延杰，刘霭莎，卫晓，胡志高，何颖雯，张逸，雷敏芝，郑萍，
申请(专利权)人：中山洪力健康食品产业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：