cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用，涉及基因工程与检测技术领域。本发明专利技术将斑马鱼胚胎置于培养液中培养，并分为空白对照组、氚水组、木黄酮组、氚水和木黄酮联合组；然后观察斑马鱼胚胎到斑马鱼幼鱼的成长过程，记录斑马鱼胚胎及斑马鱼幼鱼的生存指标；最后对空白对照组、氚水和木黄酮联合组96hpf时的斑马鱼进行分析，筛选出所述氚水和木黄酮联合染毒生物标志物。氚水和木黄酮联合染毒生物标志物。氚水和木黄酮联合染毒生物标志物。

【技术实现步骤摘要】
cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程与检测
，尤其涉及一种cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]诸多物种的生存依赖于水生系统，同时大部分构成了人类饮食的重要组成部分。水生系统是一系列污染物的最终受体，水体污染物可通过生物富集作用在生物体内不断富集，当累积到一定程度时，可能引起机体毒性作用。大多数的核设施与河流或海洋相连，氚作为核设施向自然环境排放的主要放射性核素之一，其化学行为类似于氢，能够形成水分子、氚化氢亦或生物分子，使得氚极易被生物体所吸收进而造成内照射损伤。同时氚的半衰期相对较长(12.31年)，因此会在生物体内产生富集效应，使得生物体内的氚含量不断的增加，一旦这些生物被人类所捕食则会在人体内富集，从而危害到人类的健康和安全，因此了解氚对生物体的影响是非常必要的。现有研究多是针对单独的氚对生物的影响，而自然环境中的介质往往是多种化学物质的混合体，进入生物体后，多种化学物质之间可能通过协同或拮抗作用对机体产生影响。首先，一种化学物质可以通过沉淀或者是形态改变影响生物体外另一种化学物质的有效性，例如铜会影响生物对锌的吸收；其次，一种化学物质可以影响另一种化学物质的摄取速率，例如一种化学物质通过促进渗透或者提高水生生物的通气率来加速另一种化学物质进入生物体内；再次，一种化学物质可以影响另一种化学物质向其目标的运输或者通过与生物转化酶的相互作用，抑制或促进其他化学物质的转化；最后，不同化学物质可以竞争同一靶点或者影响彼此的生物代谢。因此，单独考虑一种化学物质对生物的影响可能会错误评估其在环境中的危害。
[0003]在众多环境暴露物中，常见的内分泌干扰物通过干扰生物正常的内分泌系统来影响生态系统的稳定，而目前尚未有关于同时暴露于这两种环境污染物时对敏感生物有何影响的研究。染料木黄酮是大豆中含量较高的一种植物雌激素，研究表明木黄酮在许多肿瘤细胞中显示出抗增殖和抗分化的作用，并对某些癌症有一定的预防作用。但也有研究证明，高剂量的木黄酮会导致睾丸细胞、大鼠原代皮质神经元、人类胸腺细胞以及人类淋巴细胞的坏死和凋亡。除此之外，体外的研究发现染料木黄酮会导致塞内加尔比目鱼(Senegalese sole)早期发育出现异常；引起小鼠大脑中细胞的凋亡；还会对小鼠的生殖能力及其子代造成影响。
[0004]作为常见的水体污染物，二者不仅威胁着周围生态环境的稳定，还威胁着人类的健康，因此研究两者联合暴露的生物标志物是非常必要的。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用，同时有潜力作为氚和其他内分泌干扰物的生物标志物，为研究水体污染物的联合影响奠定了基础。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用。
[0007]进一步地，cyp19a1b在氚水和木黄酮联合染毒个体中上调。
[0008]进一步地，筛选上述生物标志物包括以下步骤，
[0009](1)将斑马鱼胚胎置于培养液中培养，并分为空白对照组、氚水组、木黄酮组、氚水和木黄酮联合组；
[0010](2)观察步骤(1)中斑马鱼胚胎到斑马鱼幼鱼的成长过程，记录斑马鱼胚胎及斑马鱼幼鱼的生存指标；
[0011](3)对步骤(2)中空白对照组、氚水和木黄酮联合组96hpf时的斑马鱼进行分析，筛选出所述氚水和木黄酮联合染毒生物标志物。
[0012]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述氚水组和所述氚水和木黄酮联合组中氚水的浓度均为0.1
‑
3.7*102Bq/mL。
[0013]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述木黄酮组和所述氚水和木黄酮联合组中木黄酮的浓度均为0.1
‑
1.4mg/L。
[0014]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述空白对照组中的培养液为E3培养液。
[0015]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述E3培养液的成分为NaCl、KCl、CaCl2和MgSO4。
[0016]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述空白对照组、氚水组、木黄酮组、氚水和木黄酮联合组各设置至少3个平行组。
[0017]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(1)中，所述培养的温度为28.5
±
1℃。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(2)中，所述记录的时间为2hpf
‑
120hpf。
[0019]在本专利技术的一个实施例中，在步骤(2)中，所述生存指标包括心脏畸形率和心率。
[0020]本专利技术的第二个目的是提供cyp19a1b在制备氚水和木黄酮联合染毒防治药物中的应用，该防治药物抑制体内cyp19a1b基因的表达。
[0021]进一步地，防治药物包括cyp19a1b的拮抗物质。
[0022]进一步地，拮抗物质为抗体、siRNA、shRNA或慢病毒包裹的序列。
[0023]进一步地，防治药物的剂型为注射剂或口服靶向药。
[0024]本专利技术的第三个目的是提供cyp19a1b在制备氚水和木黄酮联合染毒检测试剂盒中的应用，检测试剂盒中包括检测cyp19a1b表达水平的试剂，cyp19a1b在氚水和木黄酮联合染毒个体中上调，因此，根据对比待测个体的cyp19a1b的表达水平与正常个体中cyp19a1b的表达水平可知待测个体是否受到氚水和木黄酮的联合暴露。
[0025]本专利技术的第四个目的是提供一种氚水和木黄酮联合染毒防治药物，该药物抑制cyp19a1b的表达，如cyp19a1b的拮抗物质：抗体、siRNA、shRNA或慢病毒包裹的序列，或者通过敲除cyp19a1b基因抑制氚水和木黄酮联合染毒对被暴露个体的影响。
[0026]本专利技术的技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0027]氚水和木黄酮联合染毒的影响比单独氚水、木黄酮的影响更加严重，主要表现在死亡率、畸形率以及心脏发育方面。本专利技术以斑马鱼为模型，氚水和木黄酮联合染毒后，96hpf斑马鱼幼鱼出现了大量差异表达基因，主要包括：ECM
‑
受体相互作用、细胞衰老、P53
信号通路等。氚水与木黄酮共同暴露后增加了其对斑马鱼胚胎的毒性，诱发斑马鱼体内cyp19a1b上调，从而引起体内雌激素合成的异常导致激素受体激活进而使cyp1a表达升高，最终导致斑马鱼心脏以及神经发育出现异常，从而运动能力受限。因此，本专利技术发现了一种在氚水和木黄酮联合染毒中的生物标志物，并可用于制备防治药物。
附图说明
[0028]为了使本专利技术的内容更容易被清楚地理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中：
[0029]图1为本专利技术120hpf不同组别对斑马鱼畸形率的影响图。
[0030]图2为本专利技术不同组别斑马鱼胚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.cyp19a1b作为氚水和木黄酮联合染毒生物标志物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述cyp19a1b在氚水和木黄酮联合染毒个体中上调。3.cyp19a1b在制备氚水和木黄酮联合染毒防治药物中的应用，其特征在于：所述药物抑制cyp19a1b的表达。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述药物包括cyp19a1b的拮抗物质。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述拮抗物质为抗体、siRNA、shRNA或慢病毒包裹的序列。6.根据权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂彧，崔凤梅，张琪轩，薛惠元，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：