本发明专利技术公开了基于口腔黏膜PINK1基因的颞下颌关节骨关节病辅助诊断、预后评价试剂盒及其应用，其中，所述PINK1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术首次发现了口腔粘膜PINK1基因表达情况可以作为颞下颌关节骨关节病的诊断、辅助诊断，以及患病分期的标志物，其AUC可达0.9083，敏感性为0.7962，特异性为0.8889，能够准确用于颞下颌关节骨关节病的诊断、辅助诊断，以及患病分期，为颞下颌关节骨关节病的预防与治疗提供有利的数据支持。节病的预防与治疗提供有利的数据支持。
【技术实现步骤摘要】
基于口腔黏膜PINK1基因的颞下颌关节骨关节病辅助诊断、预后评价试剂盒及其应用
[0001]本专利技术属于基因诊断领域，具体涉及基于口腔黏膜PINK1基因的颞下颌关节骨关节病辅助诊断、预后评价试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]颞下颌关节紊乱病(Temporomandibular disorder,TMD)，是指累及下领关节和咀嚼肌系统的、具有相关临床症状(如疼痛、弹响、开口受限等)的一组疾病的总称。临床主要表现为弹响、疼痛、功能障碍，对患者的咀嚼、语言等功能造成重要影响，特别是患者长期慢性疼痛严重影响了患者的生活质量。参考美国口腔颌面疼痛学会对国际头痛学会分类的补充分类，将颞下颌关节紊乱病分为四类：(1)咀嚼肌紊乱疾病，主要指关节周围肌肉疾病，此类疾病为关节外疾病。(2)结构紊乱疾病，它主要指正常关节结构关系发生异常改变，包括各种关节盘移位，关节囊扩张及关节盘各附着松弛或撕脱等。(3)关节炎症性疾病，主要包括滑膜炎及关节囊炎。(4)骨关节病(Osteoarthrosis，OA)，又称颞下颌关节骨关节病(TMJOA)，主要指关节软骨或软骨下骨质发生破坏或改建等器质性病变。
[0003]颞下颌关节骨关节病常伴发软骨下骨组织改建和滑膜相应病变，其大多是由于软骨细胞控制的合成代谢与分解代谢不平衡所导致的，并以关节软骨细胞外基质进行性退变及继发感染为特征，临床上常表现为关节疼痛、弹响,杂音及功能障碍。据估计，OA在整个TMD患者中发病率为11.4
‑
58％，由于文献中报道对OA的发病率差异很大，因而需要确定一个诊断OA的特异性标准。相关技术中，这个标准主要包括患者的临床症状、体征及X线表现。由于对OA的病因及分子病理机制还不甚清楚，因此，临床上对其治疗适应症主要是根据物理检查及影像学检查。虽然关节的影像学检查可能揭示一些与这一疾病相关的结构上的变化，但其检查结果与其临床症状并不总是相符的，而且对于OA的治疗至今没有找到一种理想的方法，因此，了解OA的病因及其分子病理机制，对于提高OA的诊断水平，寻找良好的治疗方法是很有必要的。
技术实现思路
[0004]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种基于口腔黏膜PINK1基因的颞下颌关节骨关节病辅助诊断、预后评价试剂盒及其应用，专利技术人首次发现了口腔黏膜PINK1基因能够有效用于指示颞下颌关节骨关节病的发生风险及分期情况，并通过检测口腔黏膜PINK1基因的表达量能够准确诊断出受试者的患病情况，其检测灵敏度高，特异性强，对于颞下颌关节骨关节病的早期诊断和风险预测提供了有效的技术支持，有效提高了临床治疗的针对性和有效性。
[0005]本专利技术的第一个方面，提供PINK1基因或PINK1蛋白作为颞下颌关节骨关节病诊断靶点或治疗靶点的用途。
[0006]PINK1(PTEN induced putative kinase 1)是一种蛋白激酶。PINK1能在整个身体
的细胞里表达，在心脏、肌肉和大脑等耗能高的器官里的表达尤为突出。在细胞内，主要位于在线粒体的内膜中。现有技术中对于PINK1的功能还没有完全理解，也未有公开其在颞下颌关节骨关节病诊断方面的相关内容。
[0007]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述PINK1基因的核苷酸序列为：
[0008](1)SEQ ID NO:1所示序列；或
[0009](2)SEQ ID NO:1所示序列经基因突变得到的同一性为98％以上的序列，所述基因突变包括碱基置换、移码、片段缺失和插入。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，(2)中所述序列为SEQ ID NO:1所示序列经基因突变得到的同一性为99％以上的序列，所述基因突变包括碱基置换、移码、片段缺失和插入。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，(2)中所述序列未发生功能性改变。
[0012]本专利技术的第二个方面，提供检测PINK1基因表达情况的试剂在制备颞下颌关节骨关节病诊断产品中的应用。
[0013]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品具有如下(1)～(2)任一种功能：
[0014](1)颞下颌关节骨关节病诊断、辅助诊断及筛选；
[0015](2)颞下颌关节骨关节病分期。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品包括检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、基因芯片。
[0017]当然，本领域技术人员可以根据实际使用需求，选择其他的产品形式用于实现颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品的使用方法为：
[0019]使用所述颞下颌关节骨关节病诊断产品检测样品中的PINK1基因表达量，根据样品2
‑△△
Ct
值判断受试者患病风险及患病情况
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，检测方法包括PCR扩增。当然，本领域技术人员可以根据实际使用需求，选择其他的检测方法用于检测样品中的PINK1基因表达量，包括但不限于PCR扩增、恒温扩增等方法。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述检测方法为PCR扩增。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，PCR扩增体系为：
[0023]组分25μL体系2
×
TaqMan PCR Mix12.5μLPINK1
‑
F(10μM)1μLPINK1
‑
R(10μM)1μLPINK1
‑
P(0.2μM)1μLGAPDH
‑
F(10μM)1μLGAPDH
‑
R(10μM)1μLGAPDH
‑
P(0.2μM)1μLROX Reference Dye II0.25μL
cDNA模板(1:10稀释)5μLddH2O1.25μL
[0024]其中，GAPDH作为内参基因，其中，内参基因GAPDH的特异性引物组和探针为：
[0025]上游引物(GAPDH
‑
F)：5
’‑
CAAGGCTGTGGGCAAGGT
‑3’
(SEQ ID NO：5)；
[0026]下游引物(GAPDH
‑
R)：5
’‑
GGAAGGCCATGCCAGTGA
‑3’
(SEQ ID NO：6)；
[0027]探针(GAPDH
‑
P)：5
’‑
ATCCCTGAGCTGAACG
‑3’
(SEQ ID NO：7)；
[0028]反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性15s，60℃退火20s，72℃延伸40s，40个循环。在72℃时收集荧光信号，绘制溶解曲线(温度范围60℃
‑
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.PINK1基因或PINK1蛋白作为颞下颌关节骨关节病诊断靶点或治疗靶点的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述PINK1基因的核苷酸序列为：(1)SEQ ID NO:1所示序列；或(2)SEQ ID NO:1所示序列经基因突变得到的同一性为98％以上的序列，所述基因突变包括碱基置换、移码、片段缺失和插入。3.检测PINK1基因表达情况的试剂在制备颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品具有如下(1)～(2)任一种功能：(1)颞下颌关节骨关节病诊断、辅助诊断及筛选；(2)颞下颌关节骨关节病分期。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品包括检测试剂、检测试剂盒、检测试纸条、基因芯片。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品的使用方法为：使用所述颞下颌关节骨关节病诊断或辅助诊断产品检测样品中的PINK1基因表达量，根据样品2
‑△△
Ct
值判断受试者患病风险及患病情况。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，受试者患病风险及患病情况判断标准为：以正常健康人标准样品作为对照，若检测样品2
‑△△
Ct
值大于阈值，则受试者有颞下颌关节骨关节病患病风险或患有颞下颌关节骨关节病患病；若否，则不具有颞下颌关节骨关节病患病风险；以不同分期的颞下颌关节骨关节病患者标准样品分...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖力，田鯤，
申请(专利权)人：四川省医学科学院，
类型：发明
国别省市：
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