一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其用途制造技术

本发明专利技术提出了一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其用途，获得的BCMA抗体与人IgG抗体Fc片段融合，通过引物设计构建原核表达载体BCMA

【技术实现步骤摘要】
一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其用途


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗
，特别涉及一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其用途。

技术介绍

[0002]B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen，BCMA)是一种表达在浆细胞，浆母细胞和骨髓浆细胞的抗原，其不在B细胞或者造血干细胞上表达。BCMA的表达与许多癌症，自身免疫性疾病和感染性疾病相关。具有增加的BCMA表达的癌症包括一些血液癌症，例如多发性骨髓瘤，霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤等。其中，非霍奇金淋巴瘤是最常见的恶性淋巴瘤，有85％左右来源于B细胞系。
[0003]传统抗体含有两条轻链(L)和两条重链(H)，而在骆驼科和软骨鱼的血清中，仅含有重链可变区的特殊抗，为单域抗体，分子量约为12
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15KD。单域抗体更易于携带靶向药物进入传统抗体难以进图的结合部位，同时具有更好的溶解度和表达性。近年来，更多热点集中于对对骆驼或者羊驼来源的抗体的研究。但单域抗体半衰期较短，开发一种含有靶向BCMA抗体与IgG抗体Fc片段融合的嵌合抗原受体，对治疗肿瘤，尤其是B细胞非霍奇金淋巴瘤，具有一定的临床意义。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其用途，为BCMA融合抗体在临床的靶向治疗药物、疾病诊断等研发方面提供一定的指导方法和理论依据。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，包括靶向BCMA抗体与人抗体融合获得的靶向BCMA融合抗体。
[0007]根据权利要求1的一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述人抗体为人IgG抗体。
[0008]进一步的，所述靶向BCMA融合抗体为人BCMA蛋白免疫单峰驼获得的靶向BCMA抗体与人IgG抗体的Fc片段融合。
[0009]进一步的，所述靶向BCMA融合抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]本专利技术还构建了靶向BCMA融合抗体的表达载体，其特征在于，所述表达载体靶向BCMA融合抗体的编码基因。
[0011]本专利技术的嵌合抗原受体和/或构建的靶向BCMA融合抗体表达载体在制备抗肿瘤制剂中的应用。
[0012]优选的，本专利技术的嵌合抗原受体和/或构建的靶向BCMA融合抗体表达载体在抗非霍奇金淋巴瘤制剂中的应用。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0014]本专利技术使用人BCMA蛋白免疫单峰驼，采用ELISA鉴定阳性克隆，将获得的BCMA抗体
与人IgG抗体Fc片段融合，通过引物设计构建原核表达载体BCMA
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IgG Fc
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pCZN1，可有效抑制Daudi细胞的增殖活性，对Daudi细胞毒性具有一定的浓度依赖性，效果随着浓度的增加而提高，通过抗体IgG的Fc段，能够与效应细胞相结合，可快速诱导ADCC效应，有助于效应细胞攻击靶细胞，发挥杀伤肿瘤细胞的作用，细胞死亡率达到19.7％。
[0015]本专利技术获得的靶向BCMA融合抗体，可为该融合抗体在临床的靶向治疗药物、疾病诊断等研发方面提供一定的指导方法和理论依据。
附图说明
[0016]图1为本专利技术对Daudi细胞增殖的抑制效果图；
[0017]图2为本专利技术对Daudi细胞毒性结果图。
具体实施方式
[0018]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0019]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0020]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0021]实施例1
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靶向BCMA抗体的筛选
[0022](1)BCMA体外免疫骆驼
[0023]选取三岁健康无疾病的单峰驼，免疫前进行颈静脉采血5mL，常温放置凝固后，以1000r/min离心10min，取血清，置于
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20℃储存备用。等比例将人BCMA蛋白与弗氏完全佐剂混合，振荡，充分乳化，进行免疫接种；加强免疫时选用弗氏不完全佐剂，免疫间隔周期为2周，免疫6次。
[0024](2)采用ELISA检测血清抗体效价
[0025]将人BCMA蛋白包被至浓度为5μg/mL，每孔加入100uL至96孔酶标板，，4℃包被过夜。弃去酶标板内的液体，每孔加入300uL的PBST(PBS+1mL/LTween
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20)进行清洗，清洗3
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5次，每次5min。每孔加入300uL的PBSM封闭液(PBS+3％milk)，于25℃、5％CO条件下封闭2h。弃去酶标板内的液体，每孔加入300uL PBST进行清洗，清洗3
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5次，每次5min。每孔加入100uL稀释1万倍的抗血清，37℃培育1h。每孔加入300uL PBST进行清洗，清洗3
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5次，每次5min。每孔加入100uL稀释5000倍的HRP标记的山羊抗骆驼的二抗，37℃孵育1h，每孔加入300uL PBST进行清洗，清洗3
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5次，每次5min。每孔加入100uL TMB显色液，37℃避光10min，每孔加入50uL ELISA终止液，于波长450nm处记录OD值，当样品OD值大于阴性对照OD值两倍以上时，视为阳性抗体。
[0026]选取阳性抗体进行测序，其中，选取亲水性较好的阳性克隆作为获得的免疫骆驼的靶向BCMA抗体，氨基酸序列如SEQ ID NO.1：
[0027]GVGVLGAGGSVGMAAGSGPGLVTPSGITHSSLAASAAAGVLLISGLASGAGAATTCMAAVPGGALIGMAVGVGVLGAGGSVGMAAGSGPG LVTPSGITHSSLAASAAAGVLLISGLASGAGAATTCMAAVPGGALIGMAVGPAGLGGSAGTGCAGLGLAPIGAPTRVTVSFTISRDYQPKYADSVANHILSLRLSCRGSATFNNYVCASS。
[0028]实施例2
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BCMA融合抗体的构建
[0029](1)构建BCMA
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IgG Fc
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pCZN1载体
[0030]使用NdeⅠ，XbaⅠ限制性内切酶对pCZN1质粒进行双酶切，将筛选获得的阳性抗体与
人IgG Fc片段偶联在聚合酶链反应下接入pCZN1双酶切位点，采用Nimble Cloning试剂盒进行NC克隆反应，并转化DH5a感受态细胞，而后进行PCR菌落筛选阳性克隆，获得载体BCMA
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IgG Fc
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pCZN1；以接入阳性抗体为对照，获得载体BCMA
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pCZN1。
[0031](2)BCMA融合抗体的表达、纯化
[0032]挑取单克本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，包括靶向BCMA抗体与人抗体融合获得的靶向BCMA融合抗体。2.根据权利要求1的一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述人抗体为人IgG抗体。3.根据权利要求1或2的种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向BCMA融合抗体为人BCMA蛋白免疫单峰驼获得的靶向BCMA抗体与人IgG抗体的Fc片段融合。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐国光，湛振键，郑世鑫，刘世豪，
申请(专利权)人：广东康盾创新产业集团股份公司，
类型：发明
国别省市：