抗H1N1流感病毒双特异性中和抗体Bis-Hu11-1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于抗H1N1流感病毒的双特异性中和抗体Bis

【技术实现步骤摘要】
抗H1N1流感病毒双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程抗体
，具体涉及一种新型的、可以同时靶向H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb和Ca2的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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抗H1N1流感病毒双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1及其应用。其可用于制备治疗或预防甲型H1N1流感病毒感染的药物。

技术介绍

[0002]季节性流感病毒流行仍然是全球共同关注的公共卫生问题。大多数人对甲型H1N1流感病毒没有免疫力，因此当季节性疫苗与当年的流行毒株不匹配时则可能导致疫苗无效和大流行的发生。至今，H1N1 仍在世界范围内引起死亡病例的增加。其早期症状与普通流感相似，易被轻视，但病情可迅速进展，突然高热、肺炎，重者可以出现呼吸衰竭、多器官损伤，甚至死亡，病死率可达6％。
[0003]目前临床治疗流感的抗病毒药物主要为奥司他韦和金刚烷胺，但是已有研究显示甲型H1N1流感病毒对金刚烷胺的耐药率已超过90％。另外在临床研究中发现流感病毒在药物暴露期间会出现耐药突变，导致对奥司他韦出现耐药。由于耐药率增加、治疗时间窗(必须在症状出现后48小时内用药)受限，寻求一种新的针对流感的预防和治疗干预措施迫在眉睫。单克隆抗体因其具有高度的特异性、有限的脱靶效应和良好的安全性而得到广泛的应用。与单克隆抗体相比，双特异性抗体增加了一个特异性抗原结合位点，具有更强的特异性、更准确的靶向性和更低的脱靶毒性。
[0004]基于以上背景，本专利技术依据CrossMab平台设计了一种同时靶向H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2和 Sb的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1，利用双特异性中和抗体其中一端ZJU11
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01能够识别H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2，同时另一端ZCMU
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H1N1能够识别H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb，通过病毒中和作用抑制病毒进入细胞，同时避免H1N1流感病毒在治疗中的发生免疫逃逸，增强抗病毒作用。双特异性中和抗体 Bis
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Hu11
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1可以与两种不同的表面抗原结合，增加结合特异性，并降低脱靶等引起的副作用，为H1N1流感的预防与治疗提供了新的启发和思路。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种具有预防和治疗H1N1流感病毒感染的能够同时特异性地靶向H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb和Ca2的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1。该双特异性中和抗体包括抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2与抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb两个亲本全长抗体的可变区序列；所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的轻链的氨基酸序列
如SEQ ID NO.7所示。
[0006]编码所述的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1的核酸分子，所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0007]序列如下：
[0008]SEQ ID NO.1
[0009]Heavy chain:Amino acid sequence(124AA)
[0010]Signal peptide
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FR1
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CDR1
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FR2
‑
CDR2
‑
FR3
‑
CDR3
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FR4 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTPSGFNIKDTYMHWVKQRPEQGLEWIGRIAPANGNTKYDPKFQGKAT ITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCADGFYYYNTNYRDYFDHWGQGTTLTVSS
[0011]SEQ ID NO.2
[0012]Heavy chain:DNA sequence(372bp)
[0013]Signal sequence
‑
FR1
‑
CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4 GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGC ACACCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACACCTATATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAGGGCC TGGAGTGGATTGGAAGGATTGCTCCTGCGAATGGTAATACTAAATATGACCCGAAGTTCCAGGGCAAG GCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGG ACACTGCCGTCTATTACTGTGCTGACGGATTCTATTACTACAATACTAACTACAGAGACTACTTTGACC ACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
[0014]SEQ ID NO.3
[0015]Light chain:Amino acid sequence(111AA)
[0016]Signal peptide
‑
FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
‑
FR4 ENVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗H1N1流感病毒的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1，其特征在于，该双特异性中和抗体包括抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2与抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb两个亲本全长抗体的可变区序列；所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2亲本抗体ZJU11
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01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述抗H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb亲本抗体ZCMU
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H1N1的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。2.权利要求1所述的双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1的制备方法，通过以下步骤和技术方案实现：(1)通过杂交瘤技术筛选得到靶向H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Ca2的鼠源单克隆抗体ZJU11
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01和靶向H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原位点Sb的鼠源单克隆抗体ZCMU
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H1N1；(2)对鼠源单克隆抗体ZJU11
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01和ZCMU
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H1N1的重、轻链可变区基因进行测序；(3)采用分子生物学方法构建双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1：将ZJU11
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01、ZCMU
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H1N1的轻重链可变区氨基酸序列与人IgG1抗体轻重链恒定区氨基酸序列拼接构建获得双特异性抗体的四条重、轻链序列，同时进行克隆重组，构建双特异性中和抗体Bis
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Hu11
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1重组载体；将目的质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，涂板，挑取...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海波，杨帆，吴南屏，姚航平，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：