催化抗体38C2的新型缀合化学制造技术

本发明专利技术提供反应性赖氨酸残基(Lys99)被芳基化修饰的催化抗体38C2。Lys99残基被杂芳基甲基磺酰基化合物如甲基砜苯基噁二唑(MS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】催化抗体38C2的新型缀合化学
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本主题专利申请要求2019年10月23日提交的美国临时专利申请号62/925,051的优先权益。此优先权申请的全部公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
[0003]政府资助声明
[0004]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的授权号CA174844的政府支持下完成的。美国政府拥有本专利技术的某些权利。

技术介绍

[0005]抗体
‑
小分子缀合物广泛用于基础研究以及疾病的诊断和治疗。例如，美国食品药品管理局(FDA)已批准和目前销售的治疗性抗体
‑
小分子缀合物包括五种抗体
‑
药物缀合物和一种放射免疫缀合物。尽管这些都没有通过位点特异性生物缀合策略组装抗体和小分子，但最近利用天然或工程化的独特反应性氨基酸或碳水化合物提供了高度均一的抗体
‑
小分子缀合物。通过促进抗体
‑
小分子缀合物分子定义组件的制造和应用，它们已成为由丰富的临床前和临床渠道支持的最先进的试剂。
[0006]基于其活性位点中独特的反应性赖氨酸残基(Lys99)，催化抗体38C2及其人源化版本h38C2已被用作生物缀合模块，用于组装高度同质性的抗体
‑
小分子缀合物。Lys99位于深疏水袋的底部。与表面Lys残基不同，它在生理pH下去质子化并具有高度亲核性。这已被利用于小分子的位点特异性共价缀合，所述小分子被亲电子的β
‑
二酮或β/>‑
内酰胺基团衍生化，与掩埋的Lys99残基的ε
‑
氨基基团分别形成烯胺酮加合物或酰胺加合物。已在I期和II期临床试验中研究了利用h38C2作为生物缀合模块以赋予小分子单克隆免疫球蛋白(mAb)的药代动力学和药效学特性的化学程序化抗体。此外，接合T细胞的双特异性抗体已配备了h38C2生物缀合模块，以将靶向细胞表面受体的小分子与免疫疗法的力量联系起来。最后，基于双可变结构域(DVD)的抗体
‑
药物缀合物(ADC)已使用h38C2作为生物缀合模块，用于在温和条件下快速、精确、高效和稳定地缀合高细胞毒性有效载荷。
[0007]然而，对于抗体与较小的剂或分子缀合的替代的和更好的方法，仍然存在未满足的需求。本专利技术涉及本领域中的这些和其他需求。

技术实现思路

[0008]一方面，本专利技术提供修饰的或官能化的催化抗体38C2分子。在这些变体抗体中，反应性赖氨酸残基Lys99被芳基化。优选地，变体38C2抗体来源于人源化38C2(h38C2)。通常，用杂芳基甲基磺酰基化合物芳基化Lys99残基。在一些实施方案中，用于芳基化的杂芳基甲基磺酰基化合物是甲基砜苯基噁二唑(MS
‑
PODA)。
[0009]在另一个方面，本专利技术提供一种抗体
‑
剂缀合化合物。这些化合物含有剂部分，所述剂部分通过杂芳基甲基磺酰基化合物接头与38C2抗体的反应性残基Lys99缀合。优选地，用于制备抗体
‑
剂缀合物的催化抗体38C2是人源化38C2。在一些实施方案中，所使用的38C2抗体是IgG1或Fab。在一些实施方案中，剂部分在与抗体38C2缀合之前用杂芳基甲基磺酰基
化合物衍生化。在这些实施方案中的一些中，用于衍生化剂部分的杂芳基甲基磺酰基化合物是甲基砜苯基噁二唑(MS
‑
PODA)。
[0010]在一些实施方案中，缀合化合物中的剂部分是药物部分或细胞毒性剂。在这些实施方案中的一些中，缀合物中的药物部分是MMAF。在本专利技术的一些其他抗体
‑
剂缀合物中，剂部分是靶向部分。在这些实施方案中的一些中，靶向部分是叶酸或LLP2A。
[0011]本专利技术的一些抗体
‑
剂缀合物是双可变结构域抗体药物缀合物(DVD
‑
ADC)。在这些实施方案中的一些中，第二变体结构域特异性靶向肿瘤抗原或肿瘤标志物(例如，HER2)。
[0012]在一些相关的实施方案中，本专利技术提供了药物组合物，其包含有效量的本文所述的抗体
‑
剂缀合物并任选地包含药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，本专利技术提供一种用于治疗受试者的癌症的方法。方法需要向需要治疗的受试者施用本专利技术的药物组合物。用于这些方法的药物组合物中的抗体
‑
剂缀合物可以是靶向肿瘤的DVD抗体药物化合物、其中剂是药物部分或细胞毒性分子的抗体
‑
剂缀合物、或本文所述的化学程序化抗体。
[0013]在另一个方面，本专利技术提供了将剂与催化抗体38C2缀合的方法。方法包括(a)将剂与杂芳基甲基磺酰基化合物反应以生成衍生化的剂，和(b)将衍生化的剂与催化抗体38C2反应；从而将剂与催化抗体38C2缀合。在一些方法中，使用的剂是药物部分或靶向部分。在这些方法的一些方法中，剂是小分子剂或核酸剂。
[0014]通过参考说明书的其余部分和权利要求，可进一步理解本专利技术的本质和优势。
附图说明
[0015]图1.催化抗体h38C2的反应性Lys残基的杂芳基化。(A)所建议的MS
‑
PODA与Lys99的ε
‑
氨基在温和条件下的反应。Cys侧翼的侧链和苏氨酸(Thr)残基分别示为R1和R2。(B)在h38C2的疏水袋(盒)中与PODA缀合的Lys99的计算机对接模型。Fab
’
的重链(VH
‑
CH1)以蓝色示出，且轻链(VL
‑
CL)以绿色示出。通过PyMOL软件计算原子间距(以为单位给出)。
[0016]图2.MS
‑
PODA与h38C2的Lys99位点特异性缀合。(A)此研究中使用的荧光素的MS
‑
PODA衍生物(化合物1)和TAMRA的β
‑
内酰胺半抗原衍生物(化合物2)的结构。(B)在非还原或还原条件下通过SDS
‑
PAGE分离未纯化的与荧光素缀合的和与TAMRA缀合的(5当量)h38C2(“Lys”)和h38C2_Lys99Ala(“Ala”)IgG1，并通过考马斯蓝染色和凝胶内荧光进行分析。(C)还原和去糖基化的(PNGase F)未缀合的(左)和与化合物1缀合的(右)h38C2 IgG1的MALDI
‑
TOF分析。未缀合的重链和轻链的预期质量分别为49460Da和23955Da。与一个化合物1缀合的重链的预期质量为50 055Da。34 781Da处的峰对应于PNGase F。(D)h38C2 IgG1在与化合物1缀合前后的催化活性。未缀合(
●
)和缀合(
■
)抗体(1μM)使用方法学的逆醛醇转化为可检测的荧光醛(相对荧光单位(RFU))和丙酮进行测量。缀合的h38C2 IgG1完全失去催化活性，显示出两个反应性Lys残基的定量缀合。将一式三份的平本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种修饰的催化抗体38C2，其包含芳基化的残基Lys99。2.如权利要求1所述的修饰的催化抗体38C2，其中所述催化抗体是人源化38C2(h38C2)。3.如权利要求1所述的修饰的催化抗体38C2，其中残基Lys99被杂芳基甲基磺酰基化合物芳基化。4.如权利要求3所述的修饰的催化抗体38C2，其中所述杂芳基甲基磺酰基化合物是甲基砜苯基噁二唑(MS
‑
PODA)。5.一种抗体
‑
剂缀合物，其包含催化抗体38C2和剂部分，其中所述剂部分通过杂芳基甲基磺酰基化合物与抗体的反应性残基Lys99缀合。6.如权利要求5所述的抗体
‑
剂缀合物，其中所述催化抗体38C2是人源化38C2。7.如权利要求5所述的抗体
‑
剂缀合物，其中所述催化抗体38C2是IgG1或Fab。8.如权利要求5所述的抗体
‑
剂缀合物，其中所述剂部分在与抗体38C2缀合之前用所述杂芳基甲基磺酰基化合物衍生化。9.如权利要求5所述的抗体
‑
剂缀合物，其中所述杂芳基甲基磺酰基化合物是甲基砜苯基噁二唑(MS
‑
PODA)。10.如权利要求5所述的抗体
‑
剂缀合物，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金会公司，
类型：发明
国别省市：