基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法技术

一种基于氟代吡啶型化合物(5

【技术实现步骤摘要】
基于氟代吡啶型化合物的蛋白质
‑
蛋白质偶联方法


[0001]本专利技术属于蛋白质修饰及蛋白质
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蛋白质偶联领域，具体涉及了一种基于氟代吡啶型化合物的蛋白质
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蛋白质偶联新方法。

技术介绍

[0002]保留蛋白质天然功能的共价修饰，尤其是可以应用于生物大分子偶联的共价修饰，如蛋白质
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蛋白质偶联，一直以来都是化学生物学研究者追求的目标，这对于探索蛋白质结构与功能的关系、开发新的药物疗法以及提供蛋白质合成新路径至关重要。共价修饰的高效性、特异性，产物的均一性往往是衡量蛋白质修饰及偶联的重要标准。
[0003]点击化学(click chemstry)通过叠氮
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炔的环加成反应成功地应用于蛋白质
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蛋白质偶联，该反应特异性高、产物均一(Nat.Protoc.,2015,10:1594～1611)。但是其往往需要将非天然氨基酸插入到蛋白质片段以引入特定官能团，这大大增加了蛋白质偶联的难度，限制了其应用范围。
[0004]α
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于氟代吡啶型化合物的蛋白质
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蛋白质偶联方法，其特征在于包括如下步骤：(1)称取氟代吡啶型化合物5
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氟
‑4‑
苯砜基
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吡啶甲醛(FPPA)加入到DMF中配制FPPA溶液；其中FPPA结构式如下：(2)向含半胱氨酸蛋白质1溶液中加入2倍量还原剂三(2
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羧乙基)膦(TCEP)，调节pH为7.5，静置；(3)向步骤(2)的溶液中缓慢加入相对于蛋白质1的2
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4倍量步骤(1)中配制的FPPA溶液，并保证滴加过程及溶液最终pH为7.5，FPPA能够通过氟的离去对蛋白质1进行修饰；(4)反应完全后，透析反应液，除去多余FPPA和新生成小分子，并将透析后反应液浓缩，得到纯净的蛋白质1
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FPPA复合物溶液；(5)向蛋白质1
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FPPA复合物溶液中加入2倍量TECP，1.2倍量含半胱氨酸蛋白质2，调pH为7.5，通过苯砜基的离去即能够完成蛋白质
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蛋白质偶联，将反应液过分子排阻色谱得到纯净的蛋白质1
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蛋白质2偶联产物a；或者，向蛋白质1
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FPPA复合物溶液中加入2倍量TCEP，1倍量含N端半胱氨酸蛋白质3，调pH为6.5，通过醛基和半胱氨酸的环化反应即能够完成蛋白质
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蛋白质偶联，将反应液过分子排阻色谱得到纯净的蛋白质1
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蛋白质3偶联产物b。2.根据权利要求1所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质
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蛋白质偶联方法，其特征在于，还包括：(6)向蛋白质1
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【专利技术属性】
技术研发人员：苏循成，张凌阳，赵丽娜，潘彬彬，陈本广，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：