具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖、提取分离方法和在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用技术

本发明专利技术属于功能性食品领域，提供一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖的制备及结构表征方法。本发明专利技术通过水提醇沉法制备杜仲叶多糖，采用凝胶色谱柱进行分离纯化，得到均一性的杜仲叶多糖(EFP)。采用高效液相色谱、离子色谱、红外光谱和NMR对其进行表征。在小鼠体内研究了EFP这一组分的免疫调节和抗肿瘤作用，证明EFP的抗肿瘤活性较高，有望作为一种潜在的抗肿瘤药物进行开发。药物进行开发。药物进行开发。

【技术实现步骤摘要】
具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖、提取分离方法和在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用


[0001]本专利技术属于功能性食品
，尤其是一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖、提取分离方法和在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用。

技术介绍

[0002]杜仲具有巨大的经济价值和综合开发潜力。然而在过去的很长一段时间，只有杜仲的树皮被作为药物进行使用。随着药用需求日益增长，而杜仲皮的生长周期又比较长，使得这种资源更为稀缺。根据近年来的研究结果，因为一些重要的活性化合物如环烯醚萜类、黄酮类、酚类、木脂素类和多糖类在杜仲叶(EucommiaFolium)中与杜仲皮中的活性成分基本相同，所以杜仲叶可以在一定程度上作为药用以替代杜仲皮。同时，杜仲叶的降压、降血脂、降血糖、抗氧化、抗炎、保肝、保肾、免疫调节等作用已被许多研究所证实。在过去的20年里，杜仲叶已经成为一种备受关注的功能性健康食品和植物药品。
[0003]通过糖苷键的连接，相同或不同的单糖和糖醛酸共同组成多糖，这种生物大分子在自然界中广泛存在，是所有生物体的必需成分。多糖广泛存在于植物、微生物、细菌、真菌和海藻中，与生命的许多生理行为密切相关。此外，杂多糖具有支持多种功能的潜力，例如抗氧化、抗病毒、免疫调节、抗糖尿病、抗肿瘤和抗疲劳功能。由于无毒副作用和强大的治疗特性，对来自植物资源的生物多糖和相关生物活性的研究在过去几十年中引起了越来越多的研究，应用范围广泛。这些丰富的多糖和生物活性成分是食品和生物医学行业潜在利用的理想候选者。研究发现杜仲叶中分离出的多糖具有多种重要的生物活性，有助于未来相关药物的开发。
[0004]作为威胁人类健康的一大问题，肝癌的发病率高达70％
‑
90％，其致死率仅次于胃癌和食管癌。大部分肝癌由肝炎或过度饮酒引起，再加上代谢异常和肥胖等问题都会导致患肝癌的风险增加。
[0005]肝细胞癌(Hepatocellular carcino
‑
ma，HCC)是最常见的肝癌病例，因为其早期症状难以确定，很多患者在确诊时已经进入了病程的晚期，不同程度的肝硬化在许多患者的病症中都十分常见。患者不可手术的比例较高，且手术后复发比例高。由于化疗和放疗所具有的毒性，患者的预期寿命和生活质量受到明显影响。虽然一线药物如索拉非尼、顺铂和5
‑
氟尿嘧啶(5
‑
Fu)显示出一定的治疗效果，但它们已被临床研究发现具有耐药性、细胞毒性和免疫抑制性。
[0006]在目前的研究中，针对杜仲叶多糖的研究鲜有报道，关于杜仲叶多糖在抗肿瘤方面的应用更是少之又少。

技术实现思路

[0007]本专利技术目的在于克服现有技术中杜仲叶多糖提纯的不足之处，提供一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖、提取分离方法和在制备抗肿瘤药物的补充剂中的应用。
[0008]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0009]一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖，所述杜仲叶多糖的相对分子量为9.98
×
105Da，由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸按摩尔比为：0.226:1.739:2.183:1:0.155:0.321:0.358:0.047组成。
[0010]进一步地，所述杜仲叶多糖是一种同时含有α
‑
型糖苷键和β
‑
型糖苷键的酸性多糖，其主链由α
‑
L
‑
Araf
‑
(1
→
、
→
3,5)
‑
α
‑
Araf
‑
(1
→
、
→
3)
‑
β
‑
Galp
‑
(1
→
、
→
3,6)
‑
β
‑
Glcp
‑
(1
→
、
→
2)
‑
α
‑
D
‑
Manp
‑
(1
→
、
→
4)
‑
α
‑
GalpA
‑
(1
→
和
→
2,4)
‑
α
‑
Rhap
‑
(1
→
组成；
[0011]或者，所述杜仲叶多糖是一种同时含有α
‑
型糖苷键和β
‑
型糖苷键的酸性多糖，红外光谱中1617.03cm
‑1处出现的吸收峰和
13
C NMR中173.30ppm处的低场信号都证明了糖醛酸的存在。
[0012]进一步地，所述杜仲叶多糖在建立的H22荷瘤小鼠模型中能够诱导肿瘤细胞的凋亡，将其DNA复制周期阻滞在S期，同时降低肿瘤细胞线粒体膜电位，以此来抑制肿瘤的生长。
[0013]如权上所述的杜仲叶多糖的提取分离方法，步骤如下：
[0014](1)干燥的杜仲叶粉末作为原料，蒸馏水作为提取剂，采用水提醇沉法对杜仲叶粗多糖进行提取；
[0015](2)采用葡聚糖凝胶柱Sephadex G
‑
200对杜仲叶多糖进行分离纯化，得到均一杜仲叶多糖EFP。
[0016]进一步地，提取的具体方法为提取温度100℃，料液比为1:20，提取时间为3小时，提取次数3次，醇沉浓度为60％。
[0017]进一步地，分离纯化的具体方法为采用Sephadex G
‑
200凝胶柱进行洗脱，洗脱速度为0.1mL/min，每一管的收集时间设定为25min。
[0018]进一步地，干燥是指在50℃的烘箱中干燥3小时，再过60目筛；
[0019]或者，步骤(1)中采用5g杜仲叶粉末采用250mL石油醚，在水浴70℃的条件下进行脱脂处理，冷凝回流6小时后进行烘干处理，得到脱脂的杜仲叶粉末；
[0020]或者，步骤(1)中杜仲叶粉末和水的比例为1:20，提取时间为3小时，提取次数为3次，醇沉浓度为60％；
[0021]或者，步骤(1)中提取液被浓缩至三分之一体积，得到浓缩液；
[0022]或者，步骤(1)中浓缩液中加入乙醇过夜后，通过在4000rpm下离心10min获得粗多糖。
[0023]进一步地，步骤(2)包括向杜仲叶粗多糖溶液中加入1/5倍体积的Sevage试剂，Sevage试剂由正丁醇和三氯甲烷以4:1的比例配置得到，充分震荡20min后静置，等待溶液分层，弃去蛋白层，多糖溶液和Sevage试剂进行回收，再补充少量的Sevage试剂。重复5
‑
7次直到多糖溶液中不再看到蛋白层出现，剩余的有机试剂通过旋转蒸发仪除去；
[0024]或者，步骤(2)包括除去蛋白后的粗多糖溶液用蒸馏水在4℃透析(10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的杜仲叶多糖，其特征在于：所述杜仲叶多糖的相对分子量为9.98
×
105Da，由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸按摩尔比为：0.226:1.739:2.183:1:0.155:0.321:0.358:0.047组成。2.根据权利要求1所述的杜仲叶多糖，其特征在于：所述杜仲叶多糖是一种同时含有α
‑
型糖苷键和β
‑
型糖苷键的酸性多糖，其主链由α
‑
L
‑
Araf
‑
(1
→
、
→
3,5)
‑
α
‑
Araf
‑
(1
→
、
→
3)
‑
β
‑
Galp
‑
(1
→
、
→
3,6)
‑
β
‑
Glcp
‑
(1
→
、
→
2)
‑
α
‑
D
‑
Manp
‑
(1
→
、
→
4)
‑
α
‑
GalpA
‑
(1
→
和
→
2,4)
‑
α
‑
Rhap
‑
(1
→
组成；或者，所述杜仲叶多糖是一种同时含有α
‑
型糖苷键和β
‑
型糖苷键的酸性多糖，红外光谱中1617.03cm
‑1处出现的吸收峰和
13
C NMR中173.30ppm处的低场信号都证明了糖醛酸的存在。3.根据权利要求1或2所述的杜仲叶多糖，其特征在于：所述杜仲叶多糖在建立的H22荷瘤小鼠模型中能够诱导肿瘤细胞的凋亡，将其DNA复制周期阻滞在S期，同时降低肿瘤细胞线粒体膜电位，以此来抑制肿瘤的生长。4.如权利要求1至3任一项所述的杜仲叶多糖的提取分离方法，其特征在于：步骤如下：(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘会平，闫芝茜，刘易坤，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：