用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法技术

本发明专利技术公开了用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5

【技术实现步骤摘要】
用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体是指用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法。

技术介绍

[0002]随着现代食品营养学的发展，公众对营养问题关注的焦点已经由解决一般人群传统的营养缺乏转向如何合理膳食、平衡营养、促进健康。随着国民生活水平的不断提高，以及民众保健养生意识的增强，高营养、高价值农产品迎合了现阶段国民食物需求营养化、健康化的特点，消费量快速增长；
[0003]菰米(Wild rice)，也被称作野米，是禾本科菰属(Zinania Linnaeus)植物的颖果，属于全谷物，具有极高的营养价值，富含蛋白质、必需氨基酸、脂肪酸、维生素、膳食纤维以及各种微量元素，且脂肪含量低。此外，菰米还含有大量的活性物质，如酚酸、植物甾醇、γ
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谷维素、γ
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氨基丁酸、类黄酮等，保证了其作为功能性食品的发展。菰米种的活性物质能够有效地抑制高脂血症和氧化应激，预防肥胖和肝脏脂肪毒性，改善异常糖代谢和抑制胰岛素抵抗、预防动脉粥样硬化、还具有抗氧化、抗炎、抗过敏和免疫调节作用，因此，菰米已得到了国内外的广泛认可，成为一种高价值的保健食品，被称为“谷物中的鱼子酱”；
[0004]世界上菰属植物有4种，包括分布在东亚的中国菰(Z.latifolia)，以及分布在北美的水生菰(Z.aquatica)、沼生菰(Z.palustris)、德克萨斯菰(Z.texana)。随着菰米的商业化程度日益提高，北美菰米已作为一种营养价值高、风味独特、价格昂贵的健康食品进入饮食业并大量出口到法国、德国和意大利等国家，我国也批准了加拿大菰米的准入，这种进口的“营养之王”，正在占据国人的餐桌；
[0005]但是目前尚无菰米成分检测标准和检测方法，市场上销售的菰米制品鱼龙混杂、真假难辨，因此急需开发快速、灵敏、精准的菰米成分真伪鉴别方法，以保护消费者的权益，并为菰米及其制品的进口监管提供技术支撑。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是克服上述技术的缺陷，提供用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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CGAGAGTCGTGTGGATGTTGT
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，所述引物对的下游引物为：5
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，所述探针为：5
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，其中在探针的3
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端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA，在探针的5
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端连接有一个荧光报告基团FAM。
[0008]进一步地，所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有菰米成分。
[0009]本专利技术还提供一种用于菰米成分实时荧光PCR检测的检测方法，所述检测方法以待测样品的基因组DNA为模板，采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如结
果显示阳性扩增曲线，则待测样品含有或疑似含有菰米成分；如结果不显示阳性扩增曲线，则待测样品不含有或疑似不含有菰米成分。
[0010]本专利技术与现有技术相比的优点在于：
[0011]1)特异性强：因菰米ITS基因为检测靶标，建立了菰米成分实时荧光PCR检测方法，提高了特异性，有效避免假阳性或假阴性；
[0012]2)灵敏度高，菰米检测方法的灵敏度可稳定达到0.01％(W/W)；
[0013]3)有较好的重复性与稳定性。
附图说明
[0014]图1是本专利技术的特异性检测菰米的结果；
[0015]图2是本专利技术的模拟添加鳕鱼粉，检测菰米的灵敏度检测结果；
[0016]图3是本专利技术的模拟添加易混谷物，检测菰米的灵敏度检测结果；
[0017]图4是本专利技术的绝对灵敏度检测结果，将样品浓度按照10倍梯度稀释，依次为10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL、0.001ng/μL以及空白对照(ddH2O)。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本专利技术用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法做进一步的详细说明。
[0019]实施例1
[0020]用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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，所述引物对的下游引物为：5
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，所述探针为：5
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，其中在探针的3
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端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA，在探针的5
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端连接有一个荧光报告基团FAM；
[0021]所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有菰米成分，具体检测方法包括：以待测样品的基因组DNA为模板，采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如结果显示阳性扩增曲线，则待测样品含有或疑似含有菰米成分；如结果不显示阳性扩增曲线，则待测样品不含有或疑似不含有菰米成分。
[0022]实施例2特异性检测
[0023]分别提取待测样品的基因组DNA，进行实时荧光PCR扩增，检测引物和探针的特异性。
[0024]所述待测样品包括：
[0025]1)中国菰(Z.latifolia)、水生菰(Z.aquatica)、沼生菰(Z.palustris)、德克萨斯菰(Z.texana)；
[0026]2)阴性对照：阴性对照：大米、薏米、高粱米、红米、黑米、黑麦、荞麦、苦荞、燕麦、大麦、小麦、藜麦、黄米、奇亚籽、黑芝麻、玉米、黑豆、芸豆、黄豆、绿豆、扁豆、鹰嘴豆、红豆、木耳、香菇、鳕鱼、猪肉、牛肉、鸭肉；
[0027]3)空白对照：ddH2O。
[0028]结果显示，4个菰米物种样品均出现明显的扩增曲线，大米等其他谷物以及异源性动植物基因组DNA(图1)均无扩增检测结果，不同物种之间没有交叉反应，说明所述的菰米
成分实时荧光PCR检测方法具有很好的特异性。
[0029]实施例3灵敏度检测
[0030]1)模拟添加鳕鱼粉检测菰米的灵敏度检测结果
[0031]将菰米样品和鳕鱼粉样品按质量比例(100％、10％、1％、0.1％、0.01％)进行混合，提取不同浓度混合样品的DNA，作为灵敏度检测模板，进行实时荧光PCR检测，其中以ddH2O作为空白对照；
[0032]结果显示如图2所示，所述菰米成分实时荧光PCR检测方法的灵敏度可稳定达到0.01％(W/W)。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于菰米成分实时荧光PCR检测的成套试剂，其特征在于，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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CGAGAGTCGTGTGGATGTTGT
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，所述引物对的下游引物为：5
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TGCGGAAGGATCATTGTCGT
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，所述探针为：5
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，其中在探针的3
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨爱馥，万超，郑秋月，梁冰，姜丽，刘雪华，
申请(专利权)人：中华人民共和国大连海关，
类型：发明
国别省市：