用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法技术

本发明专利技术公开了用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5

【技术实现步骤摘要】
用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体是指用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法。

技术介绍

[0002]随着人们对于健康的重视，以植物基肉制品为代表的新一代的食品因具有健康、可持续的内涵，将成为未来全球食品行业发展的主要方向之一。植物基食品不含胆固醇，又能满足人体对蛋白质的需求，尤其适用于乳糖不耐受人群和消化障碍人群。因为植物基食品强调的是蛋白质的替代，所以蛋白质含量高的豆类是植物基食品良好的蛋白质来源。在传统的植物蛋白消费中，大豆蛋白独占鳌头，随着对植物基新原料的不断开拓，豌豆蛋白的优势逐渐凸显，成为植物基原料新宠；
[0003]首先，豌豆蛋白氨基酸配比均衡，不仅含有成人所必需的全部8种氨基酸，还含有儿童所额外需要一种组氨酸，尤其是人体第一限制性氨基酸——赖氨酸含量也很高，营养价值高，吸收率能达到98％以上。此外，大豆蛋白容易导致人体的过敏反应，而豌豆蛋白不含致敏源，不含乳糖、谷蛋白和麸质，无抗生素残留，不含转基因成分，安全性更高，因此，豌豆蛋白是替代动物蛋白的首选植物蛋白；
[0004]但是目前尚无豌豆源性成分检测标准和检测方法，市场上销售的豌豆蛋白及其制品鱼龙混杂、真假难辨，因此急需开发快速、灵敏、精准的豌豆源性成分检测方法，以保护消费者的权益，并为豌豆蛋白的进出口监管提供技术支撑。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服上述技术的缺陷，提供用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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，所述引物对的下游引物为：5
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，所述探针为：5
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，其中在探针的3
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端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA，在探针的5
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端连接有一个荧光报告基团FAM。
[0007]进一步地，所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有豌豆源性成分。
[0008]本专利技术还提供一种用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的检测方法，所述检测方法以待测样品的基因组DNA为模板，采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如结果显示阳性扩增曲线，则待测样品含有或疑似含有豌豆源性成分；如结果不显示阳性扩增曲线，则待测样品不含有或疑似不含有豌豆源性成分。
[0009]本专利技术与现有技术相比的优点在于：
[0010]1)特异性强：以豌豆lectin基因为检测靶标，建立了豌豆成分实时荧光PCR检测方
法，提高了特异性，有效避免假阳性或假阴性；
[0011]2)灵敏度高，豌豆源性检测方法的灵敏度可稳定达到0.1％(W/W)；
[0012]3)有较好的重复性与稳定性。
附图说明
[0013]图1是本专利技术的特异性检测豌豆成分的结果；
[0014]图2是本专利技术的模拟添加鳕鱼粉，检测豌豆成分的灵敏度检测结果；
[0015]图3是本专利技术的模拟添加易混豆粉，检测豌豆成分的灵敏度检测结果。
具体实施方式
[0016]下面结合实施例对本专利技术用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方法做进一步的详细说明。
[0017]实施例1
[0018]用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA，在探针的5
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端连接有一个荧光报告基团FAM；
[0019]所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有豌豆源性成分，具体检测方法包括：以待测样品的基因组DNA为模板，采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如结果显示阳性扩增曲线，则待测样品含有或疑似含有豌豆源性成分；如结果不显示阳性扩增曲线，则待测样品不含有或疑似不含有豌豆源性成分。
[0020]实施例2特异性检测
[0021]分别提取待测样品的基因组DNA，进行实时荧光PCR扩增，检测引物和探针的特异性。
[0022]所述待测样品包括：
[0023]1)甜豌豆，青豌豆，白豌豆；
[0024]2)阴性对照：阴性对照：黄大豆、黑豆、芸豆、绿豆、扁豆、鹰嘴豆、红豆、大米、薏米、高粱米、红米、黑米、黑麦、荞麦、苦荞、燕麦、大麦、小麦、藜麦、黄米、奇亚籽、黑芝麻、玉米、木耳、香菇、鳕鱼、猪肉、牛肉、鸭肉；
[0025]3)空白对照：ddH2O。
[0026]结果显示，豌豆样品均出现明显的扩增曲线，黄大豆等其他谷物以及异源性动植物基因组DNA(图1)均无扩增检测结果，不同物种之间没有交叉反应，说明所述的豌豆源性成分实时荧光PCR检测方法具有很好的特异性。
[0027]实施例3灵敏度检测
[0028]1)模拟添加鳕鱼粉检测豌豆源性的灵敏度检测结果
[0029]将豌豆样品和鳕鱼粉样品按质量比例(100％、10％、1％、0.1％)进行混合，提取不同浓度混合样品的DNA，作为灵敏度检测模板，进行实时荧光PCR检测，其中以ddH2O作为空白对照；
[0030]结果显示如图2所示，所述豌豆源性成分实时荧光PCR检测方法的灵敏度可稳定达到0.1％(W/W)。
[0031]2)模拟添加易混豆粉检测豌豆源性的灵敏度检测结果
[0032]将豌豆样品和易混豆粉(黄豆、绿豆和鹰嘴豆混合物)基质按质量比例(100％、10％、1％、0.1％)进行混合，提取不同浓度混合样品的DNA，作为灵敏度检测模板，进行实时荧光PCR检测，其中以ddH2O作为空白对照；
[0033]结果显示如图3所示，所述豌豆源性成分实时荧光PCR检测方法的灵敏度可稳定达到0.1％(W/W)。
[0034]实施例4重复性和稳定性实验
[0035]以1μL浓度分别为100ng/μL、10ng/μL、1ng/μL的豌豆基因组DNA为模板进行实时荧光PCR检测，以不同浓度基因组DNA获得的Ct值计算其平均数和变异系数，进行重复性和稳定性分析。结果显示，批内变异系数在0.22％～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂，其特征在于，所述成套试剂包括引物对及探针，所述引物对的上游引物为：5
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CTGGACGAGTCGCGTACTAGATC
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，所述引物对的下游引物为：5
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TATAGGCACTTGGGTGTACTTTTAC
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，所述探针为：5
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ATGCAATGCAGTCGGGT TTCGACGACATCTT
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，其中在探针的3
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨爱馥，万超，张高华，姜丽，梁冰，
申请(专利权)人：中华人民共和国大连海关，
类型：发明
国别省市：