一种高质量低分子量肝素钙的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种高质量低分子量肝素钙的制备方法，用冰醋酸溶液溶解肝素钠，使用硼氢化钠还原后用乙醇沉淀，加入氯化钙溶液溶解，再经低温溶媒分级沉淀，最后采用DEAE柱进行梯度洗脱，滤液经溶媒沉淀后，干燥。本发明专利技术在提高生产效率的同时，制备出抗Xa因子效价及抗Xa/抗IIa比值高，分子量及分布稳定，亚硝酸盐含量低，溶液颜色及澄清度好的高质量低分子量肝素钙产品。钙产品。

【技术实现步骤摘要】
一种高质量低分子量肝素钙的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种高质量低分子量肝素钙的制备方法。

技术介绍

[0002]肝素是一种高度硫酸化的糖胺聚糖，广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。其作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视，也是我国主要的出口药物之一。但普通肝素存在生物利用率低、副作用大等缺陷。
[0003]低分子量肝素不仅抗血栓作用优于普通肝素，而且生物利用度高，出血倾向小，体内半衰期长。低分子量肝素钙是肝素通过亚硝酸盐降解，还原，钙置换后的一种抗凝药物，属于低分子肝素的一种。与钠盐相比，钙盐注射体内后不会减少局部细胞间毛细血管的钙胶质，也不改变血管通透性，几乎不会引起局部出血等副作用，适用于预防和治疗血栓栓塞性疾病及血栓形成。
[0004]当前，评价低分子量肝素钙的质量标准主要包括：重均分子量及分子量分布，抗Xa因子效价及抗Xa/抗IIa比值，亚硝酸盐含量及溶液澄清度与颜色。产品分子量及分布越稳定，抗Xa因子效价及抗Xa/抗IIa比值越高，亚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高质量低分子量肝素钙的制备方法，其特征在于，用冰醋酸溶液溶解肝素钠，使用硼氢化钠还原并由乙醇沉淀后，加入氯化钙溶液溶解，再经低温溶媒分级沉淀，最后采用DEAE柱进行梯度洗脱，滤液经溶媒沉淀后，干燥。2.根据权利要求1所述的高质量低分子量肝素钙的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)解聚：将肝素钠原料用15～25倍浓度为3～5％的冰醋酸溶液溶解，调节并保持溶液温度为18～25℃，滴加0.4％～0.8％的亚硝酸钠溶液，滴加完成后进行降解反应，反应时间控制在180～230分钟，再用氢氧化钠溶液调节反应液pH 6.5～7.5，搅拌10～20min终止反应；(2)还原：向步骤(1)反应后的溶液加入8％～10％的硼氢化钠，在45～55℃条件下还原1～3h，加入至少2倍溶液体积的乙醇沉淀，静置沉淀，去除上清，得沉淀物；(3)分级沉淀：步骤(2)得到的沉淀物用相对于肝素钠原料重量5～10倍的1％～3％的氯化钙溶液中溶解，加乙醇进行第一次沉淀，静置沉淀8h以上；取出上清液，加乙醇进行第二次沉淀，静置沉淀，去除上清，获得第二次沉淀物；(4)DEAE层析柱纯化：用5～6倍纯化水溶解步骤(3)的第二次沉淀物，pH调节至7.0～7.5，按流速1.0～3.0L/min进行上样；用至少1.5倍柱床体积的缓冲液按流速1.0～3.0L/min冲洗DEAE柱；用至少1.0倍柱床体积的缓冲液按流速1.0～3.0L/min；(5)洗脱DEAE柱：收集洗脱液，用0.2/0.22μm的微孔滤膜过滤；计算滤液体积，搅拌下加入至少4倍体积95％乙醇，继续搅拌10～20min，停止搅拌，静置沉淀，去除上清，得沉淀物；(6)真空干燥：将步骤(5)获得的沉淀物加入无水乙醇脱水2～3次，放入真空干燥箱中进行两次真空干燥，粉碎后...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜曦，田志鹏，黄栋，兰舫，张灿，郄正刚，
申请(专利权)人：河北常山生化药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：