一种复合发酵菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种复合发酵菌剂及其制备方法，属于发酵技术领域，具体是先将枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌分别进行发酵培养，发酵完成后每种菌株的发酵液中有效活菌数均应大于2.0

【技术实现步骤摘要】
一种复合发酵菌剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及发酵
领域，具体涉及一种复合发酵菌剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]在农业生产和人们日常生活中，每年都要产生大量的植物秸秆和餐厨垃圾等各种有机物垃圾，目前的处理方法是将植物秸秆点火烧掉或将餐厨垃圾直接倒掉，不仅破坏生态环境，造成环境污染，同时也浪费了宝贵的资源。有机物腐熟剂能使农林废弃物和餐厨垃圾等有机废弃物快速腐熟，使有机废弃物中所含的有机质及磷、钾等元素成为植物生长所需的营养，提高土壤有机质，减少化肥使用量，改善作物品质。
[0003]利用微生物的广泛适应性和多功能性来转化腐熟农林废弃物、餐厨垃圾已经日益重要，具有广阔的应用前景。目前，有机废弃物的快速腐熟返田已成为国内外废弃物肥料化利用的热点，而研制开发高效的有机废弃物快速腐熟菌剂是其高效利用的关键。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供一种复合发酵菌剂及其制备方法。
[0005]本专利技术的目的采用以下技术方案来实现：
[0006]一种复合发酵菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)单菌种培养
[0008]将枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌分别进行发酵培养，发酵完成后每种菌株的发酵液中有效活菌数均应大于2.0
×
109cfu/mL；
[0009](2)复合培养
[0010]将分别发酵培养得到的枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌按比混合并进行复合培养；
[0011](3)负载
[0012]在复合培养得到的复合菌液中加入负载载体进行菌体负载，冻干后制得所述复合发酵菌剂。
[0013]优选的，复合培养步骤中，按有效活菌数计，所述枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌的混合比例为(3
‑
4)：(5
‑
7)：(5
‑
10)：(2
‑
3)：(4
‑
6)：10。
[0014]优选的，所述负载载体的制备方法包括以下步骤：
[0015]S1、前处理
[0016]将废弃灭活的酵母菌以饱和盐水漂洗，漂洗完成后加入热的碱性溶液并保温搅拌1
‑
30min，分离所述酵母菌，以清水漂洗至中性，将漂洗后的酵母菌按1
‑
3g/100mL的料液比再次分散在去离子水中，加入酸溶液调节pH至1
‑
2，得到悬液，在搅拌条件下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后在30
‑
40℃下保温搅拌反应0.5
‑
1h，分离所述酵母菌并依次以无水乙醇和去离子水洗涤，得到前处理的酵母菌；
[0017]其中，所述悬液与所述正硅酸乙酯的混合体积比为(30
‑
40)：1；
[0018]S2、中层制备
[0019]将所述前处理的酵母菌依次分散在碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液中，分别搅拌反应1
‑
2h，分离所述酵母菌并干燥，得到二次改性的酵母菌；
[0020]其中，所述酵母菌的分散料液比为1
‑
2g/100mL，所述碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液的浓度分别为0.5
‑
1mol/L、2
‑
3mol/L、2
‑
3mol/L；
[0021]S3、外层制备
[0022]称取PEO
‑
PPO
‑
PEO三嵌段共聚物并溶解在无水乙醇中，分别加入氨水和正硅酸乙酯，充分混合后加入所述二次改性的酵母菌并分散，得到分散液，将所述分散液在50
‑
60℃下保温搅拌反应1
‑
2h，分离不溶物并分别以无水乙醇和水洗涤，干燥制得前体材料；
[0023]其中，所述PEO
‑
PPO
‑
PEO三嵌段共聚物的溶解浓度在30
‑
40mg/mL，所述无水乙醇与所述氨水、所述正硅酸乙酯的混和体积比为100：(6
‑
7)：(18
‑
20)；所述氨水的质量浓度在1
‑
3％；
[0024]S4、热处理
[0025]在惰性气体保护下，将所述前体材料进行低温碳化，低温碳化完成后依次以酸溶液和去离子水洗涤，干燥，所述低温碳化的温度为300
‑
400℃，碳化升温速率为5
‑
10℃/min，低温碳化时间为2
‑
5h；
[0026]S5、二次热处理
[0027]在惰性气体保护下，将低温碳化的干燥产物进行高温碳化，所述高温碳化的温度为600
‑
1200℃，碳化升温速率为5
‑
10℃/min，高温碳化时间为2
‑
4h。
[0028]优选的，按重量份数计，所述枯草芽孢杆菌的培养基组成为：黄豆粉8
‑
16份、玉米粉4
‑
8份、葡萄糖5
‑
12份、鱼粉2
‑
8份、蛋白胨2
‑
6份、碳酸钙4
‑
8份、氯化钙0.1
‑
1份、磷酸二氢钾0.2
‑
0.8份、磷酸氢二钾0.2
‑
0.8份、氢氧化钠0.1
‑
0.3份、硫酸锰0.1
‑
0.5份，氯化钠2
‑
5份、吐温1
‑
2份，去离子水溶解稀释。
[0029]优选的，按重量份数计，所述乳酸菌的培养基组成为：葡萄糖25
‑
50份、酵母浸粉10
‑
45份、碳酸钙3
‑
10份、可溶性淀粉10
‑
50份、硫酸镁0.1
‑
0.5份、醋酸钠0.1
‑
0.3份、柠檬酸铵0.1
‑
0.3份、磷酸氢二钾0.2
‑
0.8份、硫酸锰0.1
‑
0.5份、吐温1
‑
2份，去离子水溶解稀释。
[0030]优选的，按重量份数计，所述放线菌的培养基组成为：酵母膏30
‑
100份、蛋白胨10
‑
70份、蔗糖40
‑
120份、氯化钙0.5
‑
2份、硫酸锌0.05
‑
0.4份、硫酸铜0.001
‑
0.03份、硫酸亚铁0.001
‑
0.03份，去离子水溶解稀释。
[0031]优选的，按重量份数计，所述苏云金杆菌的培养基组成为：葡萄糖4
‑
8份、酵母粉2
‑
4份、可溶性淀粉2
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)单菌种培养将枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌分别进行发酵培养，发酵完成后每种菌株的发酵液中有效活菌数均应大于2.0
×
109cfu/mL；(2)复合培养将分别发酵培养得到的枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌按比混合并进行复合培养；(3)负载在复合培养得到的复合菌液中加入负载载体进行菌体负载，冻干后制得所述复合发酵菌剂。2.根据权利要求1所述的一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，复合培养步骤中，按有效活菌数计，所述枯草芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌、苏云金杆菌、荧光假单胞菌和酵母菌的混合比例为(3
‑
4)：(5
‑
7)：(5
‑
10)：(2
‑
3)：(4
‑
6)：10。3.根据权利要求1所述的一种复合发酵菌剂的制备方法，其特征在于，所述负载载体的制备方法包括以下步骤：S1、前处理将废弃灭活的酵母菌以饱和盐水漂洗，漂洗完成后加入热的碱性溶液并保温搅拌1
‑
30min，分离所述酵母菌，以清水漂洗至中性，将漂洗后的酵母菌按1
‑
3g/100mL的料液比再次分散在去离子水中，加入酸溶液调节pH至1
‑
2，得到悬液，在搅拌条件下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后在30
‑
40℃下保温搅拌反应0.5
‑
1h，分离所述酵母菌并依次以无水乙醇和去离子水洗涤，得到前处理的酵母菌；其中，所述悬液与所述正硅酸乙酯的混合体积比为(30
‑
40)：1；S2、中层制备将所述前处理的酵母菌依次分散在碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液中，分别搅拌反应1
‑
2h，分离所述酵母菌并干燥，得到二次改性的酵母菌；其中，所述酵母菌的分散料液比为1
‑
2g/100mL，所述碳酸钠溶液、氯化钙溶液和磷酸钾溶液的浓度分别为0.5
‑
1mol/L、2
‑
3mol/L、2
‑
3mol/L；S3、外层制备称取PEO
‑
PPO
‑
PEO三嵌段共聚物并溶解在无水乙醇中，分别加入氨水和正硅酸乙酯，充分混合后加入所述二次改性的酵母菌并分散，得到分散液，将所述分散液在50
‑
60℃下保温搅拌反应1
‑
2h，分离不溶物并分别以无水乙醇和水洗涤，干燥制得前体材料；其中，所述PEO
‑
PPO
‑
PEO三嵌段共聚物的溶解浓度在30
‑
40mg/mL，所述无水乙醇与所述氨水、所述正硅酸乙酯的混和体积比为100：(6
‑
7)：(18
‑
20)；所述氨水的质量浓度在1
‑
3％；S4、热处理在惰性气体保护下，将所述前体材料进行低温碳化，低温碳化完成后依次以酸溶液和去离子水洗涤，所述低温碳化的温度为300
‑
400℃，碳化升温速率为5
‑
10℃/min，低温碳化时间为2
‑
5h；S5、二次热处理在惰性气体保护下，将低温碳化的干燥产物进行高温碳化，所述高温碳化的温度为
600
...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴生帅，谭柏深，
申请(专利权)人：广州大丘有机农产有限公司，
类型：发明
国别省市：