一种斯氏普罗威登斯菌及其菌剂和应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一种斯氏普罗威登斯菌，为斯氏普罗威登斯菌Y13(Providencia stuartii Y13)。保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20211590。本发明专利技术还提供了一种含上述斯氏普罗威登斯菌的微生物菌剂及其制备方法和应用。本发明专利技术的斯氏普罗威登斯菌Y13对泰乐菌素具有极强的降解能力，在9小时内对LB培养基中浓度为100mg/L的泰乐菌素的降解率能够达到90％，15小时内降解完全，且对于LB培养基中浓度为400mg/L的降解效率可以达到96％，可以用于泰乐菌素的降解，具有良好的开发应用前景。具有良好的开发应用前景。具有良好的开发应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种斯氏普罗威登斯菌及其菌剂和应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种斯氏普罗威登斯菌及其菌剂和应用。

技术介绍

[0002]抗生素是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生命活动过程中产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物。抗生素被广泛用于动物和人类疾病的治疗以及促进禽畜的生长，包括四环素类、氨基糖苷类、磺胺类、氯霉素类、β内酰胺类、氟喹诺酮类和大环内酯类等。泰乐菌素是一种由链霉菌产生的大环内酯类兽用抗生素，因其优异的抗菌作用和促生长作用而被广泛应用于畜禽养殖业。大环内酯类抗生素现已成为需求量增长最快的兽药之一，而泰乐菌素作为其中的代表，占了很大一部分。进入牲畜体内的泰乐菌素并不能完全被机体吸收或分解，仍然有60％
‑
90％以代谢物甚至母体的形式随尿液或粪便排出体外，进入土壤和水体环境。有研究报道在不同环境中均检测到不同残留程度的泰乐菌素，Ho等在马来西亚选定农场的肉鸡粪便样本中均检测到高浓度的泰乐菌素，最高达13.74mg/kg， Feng等在重庆9个典型饮用水源地均检测出泰乐菌素残留，浓度最高达 19.4ng/L。这些残留的泰乐菌素会改变环境中的微生物群落结构、导致耐药细菌和抗生素抗性基因的产生、甚至通过食物链富集危害人类健康，对公共健康和生态系统造成巨大威胁。
[0003]环境中残留抗生素的处理方法大致分为生物降解法、物理法和化学法，其中生物降解法相较于其他方法有高效、成本低、易控制和环境友好等优势，是控制环境中抗生素残留的有效手段。生物降解法降解抗生素，微生物是其主体，起关键作用，主要是由于耐药菌的存在，耐药菌在抗生素的胁迫下能够产生对应的降解酶，这些酶通过破坏抗生素的分子结构从而使抗生素发生降解。目前，关于泰乐菌素降解菌的研究相对较少，微生物种质资源缺乏，降解途径鲜有报道，远不能满足当前环境治理的需要，这极大的阻碍了泰乐菌素污染物微生物修复技术的应用，限制了对泰乐菌素降解机制和降解途径的揭示。因此，非常有必要进行泰乐菌素降解菌的筛选。

技术实现思路

[0004]本专利技术为解决上述技术问题提供了一种能够高效降解泰乐菌素的斯氏普罗威登斯菌。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]一方面，本专利技术提供了一种斯氏普罗威登斯菌，命名为斯氏普罗威登斯菌Y13(Providencia stuartii Y13)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211590。
[0007]第二方面，本专利技术提供了上述斯氏普罗威登斯菌在降解泰乐菌素中的应用。
[0008]第三方面，本专利技术提供了一种微生物菌剂，包含上述斯氏普罗威登斯菌。
[0009]第四方面，本专利技术提供了上述微生物菌剂的制备方法，将所述斯氏普罗威登斯菌
接种于培养基中得到所述微生物菌剂。
[0010]进一步，所述培养基为LB培养基。
[0011]第五方面，本专利技术提供了上述微生物菌剂在降解泰乐菌素中的应用。
[0012]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的斯氏普罗威登斯菌Y13对泰乐菌素具有极强的降解能力，在9小时内对LB培养基中浓度为 100mg/L的泰乐菌素的降解率能够达到90％，15小时内降解完全，且对于 LB培养基中浓度为400mg/L的降解效率可以达到96％，可以用于泰乐菌素的降解，具有良好的开发应用前景。
附图说明
[0013]图1为本专利技术斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartii Y13的形态照片，其中图1A为菌落形态，图1B为透射电镜下单个细菌形态；
[0014]图2为本专利技术斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartiiY13的系统发育树；
[0015]图3为本专利技术斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartiiY13的生长曲线；
[0016]图4为斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartii Y13对泰乐菌素的降解曲线；
[0017]图5为泰乐菌素初始浓度对斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartii Y13 降解能力的影响；
[0018]图6为温度对斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartii Y13降解能力的影响；
[0019]图7为初始pH对斯氏普罗威登斯菌Providencia stuartiiY13降解能力的影响。
具体实施方式
[0020]以下结合附图及具体实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0021]实验材料
[0022]斯氏普罗威登斯菌降解菌分离自宁夏某制药厂的菌渣。
[0023]实验试剂
[0024]磷酸泰乐菌素(分析纯，95％)，上海源叶生物科技有限公司；
[0025]乙腈(色谱纯)，美国sigma
‑
aldrich公司；
[0026]甲酸(色谱纯)，阿拉丁试剂(上海)有限公司；
[0027]娃哈哈纯净水(596ml瓶装)，用于HPLC流动相配置。
[0028]培养基
[0029]LB培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g，蒸馏水定容至1000mL，调节pH至7.0，高温高压灭菌；
[0030]固体培养基：含100mg/L泰乐菌素的LB培养基加1.5％(质量分数) 琼脂粉制成。
[0031]泰乐菌素浓度测定方法：
[0032]泰乐菌素的浓度通过高效液相色谱仪(HPLC,Agilent
‑
1260，USA)进行测定。取1mL菌液，冷冻离心，过0.22μm微孔滤膜，后移入含内插管的2mL棕色样品瓶，于4℃冰箱内保存待测。色谱柱采用XTERRA RP C18 色谱柱(250mm
×
4.6mm，5μm；Waters，USA)，流动相为0.1％(体积比)甲酸水溶液(A相)和纯乙腈(B相)，流速1.0mL/min，柱温35℃，进样体积10μL，检测波长278nm。
[0033]泰乐菌素的降解率计算公式如下：
[0034]降解率(％)＝(空白对照残留量
‑
试验样品残留量)/空白对照残留量
×ꢀ
100％
[0035]实施例1泰乐菌素降解菌的筛选和鉴定
[0036]1、泰乐菌素降解菌的驯化、分离、纯化
[0037]称取1g药渣加入装有100mL LB培养基的锥形瓶中，加入50mg/L泰乐菌素，30℃、160r/min振荡培养3d；将所得菌液以1％的接种量接种至装有100mL LB培养基、100mg/L泰乐菌素的锥形瓶中，同样条件培养3d，重复上述操作，直至泰乐菌素浓度达到400mg/L为止。将最后一次培养所得菌液梯度稀释涂布于平板上，根据平板上菌落的生长情况挑选出单菌落，经多次平板划线分离纯化出单菌。将所得单菌接种至含100mg/L泰乐菌素 100m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种斯氏普罗威登斯菌，其特征在于，为斯氏普罗威登斯菌Y13(Providencia stuartiiY13)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20211590。2.一种如权利要求1所述的斯氏普罗威登斯菌在降解泰乐菌素中的应用。3.一种微生物菌剂，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑华宝，杨健，赵卓群，张涛，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：