用于活化和扩增肿瘤浸润淋巴细胞的方法技术

提供了用于以一步法活化和扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法。还提供了用于在不使用饲养细胞的情况下活化和扩增TIL的方法。除了富集中枢记忆T细胞表型的经扩增TIL的经分离群体之外，还提供了扩增的TIL群体的组合物。还提供了扩增的TIL群体的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于活化和扩增肿瘤浸润淋巴细胞的方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2019年11月25日提交的美国临时专利申请号62/940,035；和2020年9月22日提交的美国临时专利申请号63/081,539的优先权，这些申请中的每个以引用的方式整体并入本文。


[0003]本公开涉及用于活化和扩增淋巴细胞群体、尤其是肿瘤浸润淋巴细胞的方法。

技术介绍

[0004]肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的过继性转移是治疗体积大、难治性癌症的强有力的方法，尤其是在预后差的患者中。成功的免疫治疗需要大量的TIL，其必需一个稳健且可靠的扩增过程。多步方法，通常包括基于IL
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2的TIL扩增“前
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REP”，随后是“快速扩增方案”(REP)，由于它能够产生治疗有效数量的TIL，因此已成为TIL扩增的优选方法，但由于此过程的耗时性质而仍然受到限制。在最多可持续6周的前
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REP步骤之后，然后REP可以导致TIL在14天期间内1,000倍的扩增。REP是一个困难的过程，除了需要大剂量的抗CD3抗体(OKT3)和IL
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2之外，还需要大量过量(例如200倍)的饲养细胞来活化TIL。
[0005]目前现有的基于REP的TIL扩增方法最具挑战性的方面之一是获取和使用饲养细胞的必要性。在这些基于REP的方法中，TIL的活化依赖饲养细胞的存在。饲养细胞群通常从3
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5个同种异体供体收集，这使得控制收集、辐照和维持饲养细胞群的过程既昂贵又困难。因此，即使使用饲养细胞成本高昂且具有挑战性，但它们被认为在TIL活化和扩增过程中是必不可少的。
[0006]因此，需要更简化的TIL扩增方法。

技术实现思路

[0007]提供了用于使用更简化的方法来活化和扩增TIL的方法，包括一步法、需要较短扩增期的方法、使用可溶性试剂进行刺激的方法、更适合临床制造的方法以及不使用饲养细胞的方法。除了富集中枢记忆T细胞表型的扩增的TIL的分离的群体之外，还提供了扩增的TIL群体的组合物。
[0008]如本文所公开的，出乎意料地发现，可以在不存在饲养细胞的情况下使用T细胞受体(TCR)激动剂(例如，CD3激动剂)和CD28激动剂的组合来活化和扩增TIL。TCR激动剂和CD28激动剂可以是彼此连接或复合的抗体，或连接到纳米基质。令人惊讶的是，本文所述的无饲养细胞的TIL活化和扩增方法可导致150,000倍的TIL扩增，并且还导致中枢记忆T细胞表型的富集。令人惊讶的是，本文所述的无饲养细胞的TIL活化和扩增方法还可以在一步法的第14天导致4,000至100,000倍的扩增。甚至在来自多个供体的样品中也观察到了这种稳健扩增，所述样品在前
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REP的条件下未能扩增。因此，本文所述的方法能够在当前实践标准的两步TIL扩增方法失败的情况下产生扩增的TIL。
[0009]如本文所公开的，还出乎意料地发现，可以用一步法活化和扩增TIL，从而消除了对于单独的前
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REP和REP步骤的需要。
[0010]在一个方面，本专利技术涉及一种在分解的肿瘤样品中扩增TIL群体的方法，所述方法包括在培养基中培养分解的肿瘤样品，其中使TIL与TCR激动剂、CD28激动剂、和T细胞刺激性细胞因子接触。
[0011]在一些实施方案中，培养基以选自由以下组成的组的时间间隔补充T细胞刺激性细胞因子：1天、2天、3天、4天、5天和6天。
[0012]在一些实施方案中，T细胞刺激性细胞因子的最终浓度为10U/ml至7,000U/ml。在一些实施方案中，T细胞刺激性细胞因子是IL
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2。在一些实施方案中，培养基以选自由以下组成的组的时间间隔进行更换：1天、2天、3天、4天、5天和6天。
[0013]在一些实施方案中，培养基的组分保持不变。在一些实施方案中，培养基的30％至99％以选自由以下组成的组的时间间隔进行更换：1天、2天、3天、4天、5天和6天。
[0014]在一些实施方案中，本文的方法可以从先前失败的前
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REP扩增中挽救TIL样品。在一些实施方案中，肿瘤样品来自先前已提交肿瘤样品用于TIL扩增的受试者，其中先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自前
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REP步骤的TIL的数量小于1000个TIL。在一些实施方案中，肿瘤样品来自先前已提交肿瘤样品用于TIL扩增的受试者，其中先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自前
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REP步骤的TIL的扩增倍数小于5倍。
[0015]在一些实施方案中，分解的肿瘤样品包含大小为0.5至4mm3的肿瘤片段。在一些实施方案中，分解的肿瘤样品包含消化的肿瘤片段。
[0016]在一些实施方案中，培养基包含饲养细胞。在一些实施方案中，饲养细胞是外周血单核细胞或抗原呈递细胞。在一些实施方案中，饲养细胞表达TCR激动剂、CD28激动剂和/或4
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1BB激动剂。在一些实施方案中，TCR激动剂、CD28激动剂和/或4
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1BB激动剂在饲养细胞的表面上表达。在一些实施方案中，饲养细胞被遗传修饰以表达TCR激动剂、CD28激动剂和/或4
‑
1BB配体。在一些实施方案中，TCR激动剂是CD3激动剂。在一些实施方案中，CD3激动剂是OKT3。在一些实施方案中，CD28激动剂是CD86。在一些实施方案中，饲养细胞是抗原呈递细胞。在一些实施方案中，抗原呈递细胞包括K562细胞。在一些实施方案中，饲养细胞表达TCR激动剂和/或4
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1BB激动剂。在一些实施方案中，4
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1BB激动剂是4
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1BB配体。在一些实施方案中，饲养细胞被遗传修饰以表达T细胞刺激性细胞因子。在一些实施方案中，T细胞刺激性细胞因子是IL
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2。
[0017]在一些实施方案中，培养基不包含饲养细胞。在一些实施方案中，CD28激动剂可溶于培养基。
[0018]在一些实施方案中，TCR激动剂是CD3激动剂。
[0019]在一些实施方案中，TCR激动剂和/或CD28激动剂连接到聚合物链基质的胶体悬浮液的纳米基质，其中每个基质在其最大维度上的长度为1至500nm。在一些实施方案中，TCR激动剂和CD28激动剂附接到相同的聚合物链。在一些实施方案中，TCR激动剂和CD28激动剂附接到不同的聚合物链。在一些实施方案中，TCR激动剂以每mg纳米基质25μg附接到纳米基质。
[0020]在一些实施方案中，TCR激动剂包含可溶性单特异性复合物，所述复合物包含连接在一起的两个抗CD3抗体。在一些实施方案中，CD28激动剂包含可溶性单特异性复合物，所
述复合物包含连接在一起的两个抗CD28抗体。在一些实施方案中，培养基包含CD2激动剂。在一些实施方案中，CD2激动剂包含可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在分解的肿瘤样品中扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群体的方法，所述方法包括在培养基中培养所述分解的肿瘤样品，其中使所述TIL与T细胞受体(TCR)激动剂、CD28激动剂和T细胞刺激性细胞因子接触。2.如权利要求1所述的方法，其中所述培养基以选自由以下组成的组的时间间隔补充T细胞刺激性细胞因子：1天、2天、3天、4天、5天和6天。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述T细胞刺激性细胞因子的最终浓度为10U/ml至7,000U/ml。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述T细胞刺激性细胞因子是IL
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2。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基以选自由以下组成的组的时间间隔进行更换：1天、2天、3天、4天、5天和6天。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中维持所述培养基的组分。7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基的30％至99％以选自由以下组成的组的时间间隔进行更换：1天、2天、3天、4天、5天和6天。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肿瘤样品来自先前已提交肿瘤样品用于TIL扩增的受试者，其中所述先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自所述前
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REP步骤的TIL数量小于1000个TIL。9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肿瘤样品来自先前已提交肿瘤样品用于TIL扩增的受试者，其中所述先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自所述前
‑
REP步骤的TIL的扩增倍数小于5倍。10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分解的肿瘤样品包含大小为0.5至4mm3的肿瘤片段。11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分解的肿瘤样品包含消化的肿瘤片段。12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基包含饲养细胞。13.如权利要求12所述的方法，其中所述饲养细胞是外周血单核细胞或抗原呈递细胞。14.如权利要求12或13所述的方法，其中所述饲养细胞表达TCR激动剂、CD28激动剂和/或4
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1BB配体。15.如权利要求14所述的方法，其中所述TCR激动剂、所述CD28激动剂和/或所述4
‑
1BB配体在所述饲养细胞的表面上表达。16.如权利要求14或15所述的方法，其中所述饲养细胞被遗传修饰以表达所述TCR激动剂、所述CD28激动剂和/或所述4
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1BB配体。17.如权利要求16所述的方法，其中所述TCR激动剂是CD3激动剂。18.如权利要求17所述的方法，其中所述CD3激动剂是OKT3。19.如权利要求16所述的方法，其中所述CD28激动剂是CD86。20.如权利要求12
‑
19中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞是抗原呈递细胞。21.如权利要求20所述的方法，其中所述抗原呈递细胞包括K562细胞。22.如权利要求12至21中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞被遗传修饰以表达所述T细胞刺激性细胞因子。23.如权利要求22所述的方法，其中所述T细胞刺激性细胞因子是IL
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2。
24.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述培养基不包含饲养细胞。25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD28激动剂可溶于所述培养基。26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述TCR激动剂是CD3激动剂。27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述TCR激动剂和/或所述CD28激动剂连接到包含聚合物链基质的胶体悬浮液的纳米基质，其中每个纳米基质在其最大维度上的长度为1至500nm。28.如权利要求27所述的方法，其中所述TCR激动剂和所述CD28激动剂附接到相同的聚合物链。29.如权利要求27所述的方法，其中所述TCR激动剂和所述CD28激动剂附接到不同的聚合物链。30.如权利要求27至29中任一项所述的方法，其中所述TCR激动剂以每mg纳米基质25μg附接到所述纳米基质。31.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述TCR激动剂包含可溶性单特异性复合物，所述复合物包含连接在一起的两个抗CD3抗体。32.如权利要求1至26和31中任一项所述的方法，其中所述CD28激动剂包含可溶性单特异性复合物，所述复合物包含连接在一起的两个抗CD28抗体。33.如权利要求1至26、31和32中任一项所述的方法，其中所述培养基包含CD2激动剂。34.如权利要求33所述的方法，其中所述CD2激动剂包含可溶性单特异性复合物，所述复合物包含连接在一起的两个抗CD2抗体。35.一种用于扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群体的方法，其包括使所述TIL群体与包含聚合物链基质的胶体悬浮液的纳米基质接触，其中所述基质附接到CD3激动剂和CD28激动剂，其中所述纳米基质向所述TIL群体提供活化信号，从而活化并诱导所述TIL群体增殖，其中每个基质在其最大维度上的长度为1至500nm，并且其中所述方法不包括在所述TIL群体的扩增期间使用饲养细胞。36.如权利要求35所述的方法，其中与所述纳米基质接触的所述TIL群体还包含肿瘤细胞。37.如权利要求35或36中任一项所述的方法，其中所述TIL群体分离自受试者并且与所述纳米基质接触，其中在使所述TIL群体与所述纳米基质接触之前没有另外的所述TIL群体的扩增过程。38.如权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述CD3激动剂和所述CD28激动剂附接到相同的聚合物链。39.如权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述CD3激动剂和所述CD28激动剂附接到不同的聚合物链。40.如权利要求35至39中任一项所述的方法，其中所述CD3激动剂以每mg纳米基质25μg附接到所述纳米基质。41.如权利要求27至30和35至40中任一项所述的方法，其中所述纳米基质还包含嵌入在所述聚合物链基质之间或之内的磁性、顺磁性或超顺磁性纳米晶体。42.如权利要求27至30和35至41中任一项所述的方法，其中所述聚合物链基质包含葡聚糖聚合物。
43.如权利要求27至30和35至42中任一项所述的方法，其中所述聚合物链是胶体聚合物链。44.如权利要求27至30和35至43中任一项所述的方法，其中纳米基质的体积与TIL的体积的比率大于或等于1:5。45.如权利要求27至30和35至44中任一项所述的方法，其中基质的数量与TIL的数量的比率大于或等于1:500。46.如权利要求27至30和35至44中任一项所述的方法，其中所述CD28激动剂以每mg纳米基质25μg附接到所述纳米基质。47.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述激动剂是重组激动剂。48.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述激动剂是抗体。49.如权利要求48所述的方法，其中所述抗体是人源化抗体。50.如权利要求27至30和35至49中任一项所述的方法，其中所述CD3激动剂是OKT3或UCHT1。51.如权利要求35至50中任一项所述的方法，其中所述待扩增的TIL来自先前已提交TIL样品用于扩增的受试者，其中所述先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自所述前
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REP步骤的TIL数量小于1000个TIL。52.如权利要求35至50中任一项所述的方法，其中所述待扩增的TIL来自先前已提交TIL样品用于扩增的受试者，其中所述先前的TIL扩增包括前
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REP步骤并且其中分离自所述前
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REP步骤的TIL的扩增倍数小于5倍。53.一种用于扩增TIL群体的方法，其包括使所述TIL群体与包含第一、第二和第三可溶性单特异性复合物的组合物接触，其中每个可溶性单特异性复合物包含连接在一起的两个抗体或其片段，其中每个可溶性单特异性复合物的每个抗体或其片段特异性结合至所述TIL群体上的相同抗原，其中所述第一可溶性单特异性复合物包含抗CD3抗体，其中所述第二可溶性单特异性复合物包含抗CD28抗体，并且其中所述第三可溶性单特异性复合物包含抗CD2抗体，并且所述方法不包括在所述TIL群体的扩增期间使用饲养细胞。54.如权利要求53所述的方法，其中与所述组合物接触的所述TIL群体还包含肿瘤细胞。55.如权利要求53或54中任一项所述的方法，其中所述TIL群体分离自受试者并且与所述组合物接触，其中在使所述TIL群体与所述组合物接触之前没有另外的所述TIL群体的扩增过程。56.如权利要求53至55中任一项所述的方法，其中所述可溶性单特异性复合物的浓度为0.2
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25μl/ml。57.如权利要求53...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈卡，
申请(专利权)人：KSQ治疗公司，
类型：发明
国别省市：