球状体形成促进剂制造技术

本发明专利技术涉及一种以具有吸附性的无机颗粒作为有效成分的球状体形成促进剂；以及一种球状体的形成促进方法，其中，将上述球状体形成促进剂的分散液与细胞悬浮液混合，得到上述球状体形成促进剂中包含的具有吸附性的无机颗粒发生了分散的混合物，对所得到的混合物中包含的细胞进行培养，促进球状体的形成。促进球状体的形成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】球状体形成促进剂


[0001]本专利技术涉及球状体形成促进剂、球状体形成用试剂盒、球状体的制造方法以及球状体的形成促进方法。

技术介绍

[0002]近年来，以人为代表的哺乳类的动物细胞作为研究材料被用于各种各样的研究。
[0003]在一直以来进行的动物细胞的平面培养(2D细胞培养)中，细胞以二维方式扩展增殖。因此，为了得到一定数目的培养细胞，需要一定程度的培养面积。此外，由于所培养的细胞是沿二维方向扩展的单层细胞，因此存在细胞本身所具有的功能未必能够再现其在生物体内的状态的课题。
[0004]因此，普遍希望利用粘附性动物细胞本来的凝集反应对细胞进行三维(3D)培养。通过3D细胞培养得到的球状体(凝集块)可发挥出与通过2D细胞培养得到的细胞不同的功能，实现与生物体更相近的细胞环境，并且具有高细胞活性。因此，球状体在药物创制中的药物筛选和毒性试验、作为动物实验的替代的安全性评价模型的构建等中有用，作为能够得到实用信息的生物材料也是非常重要的。
[0005]在通常的3D细胞培养方法中，重要的是控制细胞的粘附性，对适合用于3D细胞培养方法的支架材料、培养容器、培养基等进行了开发。
[0006]例如，作为支架材料使用的多孔质膜、水凝胶等有市售，专利文献1中记载了将通过利用乙酰化剂对壳聚糖进行处理使其凝胶化而制作的壳多糖凝胶用作培养基材来对细胞进行培养的方法。另外，专利文献2中记载了一种在具有特定的平均纤维径、由高分子化合物形成的纤维结构体的纤维表面上固定具有疏水性材料结合部位和细胞粘附部位的嵌合蛋白而成的细胞培养用基材。此外，非专利文献1中记载了通过使用在高分子基体内存在无机层状化合物的水凝胶来控制细胞的粘附性的方案。
[0007]关于培养容器，进行了以非粘附处理为目的的微细加工的板、为了收集细胞而设计的U形底板等可用于3D细胞培养方法，这些培养容器也有市售。
[0008]此外，专利文献3中记载了通过将细胞试样与高分子混合而成的混合物在球状体形成培养用容器内进行培养而促进球状体形成的技术，该高分子是选自由D
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葡萄糖胺、D
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半乳糖胺、D
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葡萄糖醛酸、L
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艾杜糖醛酸以及D
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半乳糖组成的组中的一种以上聚合而成的。专利文献4中记载了在包含抗体、凝集素以及细胞粘附分子中的任一者的外源性细胞凝集剂的存在下进行细胞培养的球状体的制造方法。
[0009]通过像这样使用特殊的支架材料、培养容器或培养基，能够进行3D细胞培养。但是，这样的支架材料、培养容器或培养基通常价格昂贵。因此，在药物创制中的药物筛选、临床样本的原代培养中的药效筛选、有用蛋白质的生产等需要大量球状体的情况下，费用负担大。
[0010]此外，还希望开发出球状体的形成速度高、并且作为对象的生物体组织或细胞种类不受限定的通用性优异的3D细胞培养方法。
[0011]蒙脱石等溶胀性层状硅酸盐是粘土矿物的一种，其具有当吸收水等液体时会发生溶胀而带有粘性的性质。蒙脱石由二维扩展的纳米片构成。另外，蒙脱石被水溶胀而发生分散时，可得到具有粘性和触变性(thixotropy)的胶体分散液。蒙脱石在分散液中以分离到单位层的状态存在。分散液中的蒙脱石的结晶层本身具有永久负电荷，钠离子等阳离子以弥补永久负电荷的形式掺入到结晶层中。利用这样的特性，蒙脱石等溶胀性层状硅酸盐一直以来在产业上得到了广泛应用。
[0012]例如，专利文献5中记载了包含含有氟原子的层状硅酸盐化合物的蛋白质结晶形成控制剂。此外，专利文献6中记载了一种蛋白质结晶化条件探索剂，其包含具有氟原子和羟基的水溶胀性层状硅酸盐，氟原子通过与羟基的同晶置换而与硅酸盐共价键合。
[0013]专利文献7中记载了将采自具有粘膜质体表皮的特定鱼类的从表皮到肌肉组织的部位的体液、或者存在于头足纲的躯干部的体液或由肝脏采集的体液用作球状体形成促进剂的方案。并且，专利文献8中记载了使用硅酸铝或天然水铝英石的粉末除去上述球状体形成促进剂的异味成分以及夹杂物而对球状体形成促进剂进行浓缩或精制的方法。
[0014]但是，目前还没有关于溶胀性层状硅酸盐等无机颗粒材料本身促进球状体的形成的实用性报告例。
[0015]现有技术文献
[0016]专利文献
[0017]专利文献1：日本特开2017
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55727号公报
[0018]专利文献2：日本特开2010
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63411号公报
[0019]专利文献3：日本特开2017
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147944号公报
[0020]专利文献4：日本特开2008
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22743号公报
[0021]专利文献5：日本特开2011
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121789号公报
[0022]专利文献6：国际公开第2012/133695号
[0023]专利文献7：日本特开2011
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62129号公报
[0024]专利文献8：日本特开2019
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163212号公报
[0025]非专利文献
[0026]非专利文献1：Advanced Materials,2013,Volume 25,Issue 30,p.4069
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4086

技术实现思路

[0027]专利技术所要解决的课题
[0028]如上所述，在球状体的制作中，现状是需要使用特殊的支架材料、培养容器或培养基。此外，在球状体的制作中，由于将细胞本来具有的粘附力作为驱动力，因此有时球状体的形成需要长时间。
[0029]因此，利用现有的方法难以简便且迅速地对多样的细胞种类通用地进行球状体形成。
[0030]因此，本专利技术提供能够简便且迅速地制作球状体形态的细胞的球状体形成促进剂。
[0031]另外，本专利技术提供能够简便且迅速地形成球状体的球状体制造方法。
[0032]另外，本专利技术的课题在于提供能够促进细胞的凝集或组织化、迅速地形成球状体
的球状体形成促进方法。
[0033]此外，本专利技术的课题在于提供能够适合用于上述球状体制造方法或球状体形成促进方法的球状体形成用试剂盒。
[0034]用于解决课题的手段
[0035]本专利技术人鉴于上述课题进行了深入研究。其结果发现，由溶胀性层状硅酸盐、高岭石、云母及沸石等硅酸盐、胶态二氧化硅、氧化铝水合物、氧化镁、羟基磷灰石等特定的无机物质构成的颗粒具有促进细胞的凝集或组织化的作用。进而还发现，在将特定的无机颗粒以特定量分散在用于形成球状体的细胞悬浮液中的状态下进行3D细胞培养时，能够以短时间且简便地得到球状体形态的细胞。
[0036]本专利技术是基于这些技术思想而完成。
[0037]本专利技术的上述课题通过下述手段得以解决。
[0038](1)一种球状体形成促进剂，其以具有吸附性的无机颗粒作为有效成分。
[0039](2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种球状体形成促进剂，其以具有吸附性的无机颗粒作为有效成分。2.如权利要求1所述的球状体形成促进剂，其中，所述无机颗粒是由选自硅酸盐、胶态二氧化硅、氧化铝水合物、碳酸盐、氧化镁、氢氧化镁、碳酸镁、硅酸镁、硅酸铝、氢氧化铝、氧化镁
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氧化铝固溶体、水滑石以及羟基磷灰石中的至少一种无机物质构成的颗粒。3.如权利要求1或2所述的球状体形成促进剂，其中，每1mg具有吸附性的所述无机颗粒的牛血清白蛋白吸附量为10μg以上500μg以下。4.如权利要求1～3中任一项所述的球状体形成促进剂，其中，所述无机颗粒是由选自由蒙脱石、锂蒙脱石、硅镁石、皂石、贝得石、绿脱石、锌蒙脱石以及溶胀性云母组成的组中的至少一种溶胀性层状硅酸盐构成的颗粒。5.如权利要求1～3中任一项所述的球状体形成促进剂，其中，所述无机颗粒是由选自由高岭石以及云母族组成的组中的至少一种页硅酸盐矿物构成的颗粒、或者是由选自由沸石族组成的组中的至少一种架状硅酸盐矿物构成的颗粒。6.如权利要求1～3中任一项所述的球状体形成促进剂，其中，所述无机颗粒是由胶态二氧化硅构成的颗粒。7.如权利要求1～3中任一项所述的球状体形成促进剂，其中，所述无机颗粒是由氧化铝水合物构成的颗粒。8.一种球状体形成用试剂盒，其包含权利要求1～7中任一项所述的球状体形成促进剂。9.一种球状体的制造方法，其中，将权利要求1～7中任一项所述的球状体形成促进剂的分散液与细胞悬浮液混合，得到所述球状体形成促进剂中包含的具有吸附性的无机颗粒发生了分散的混合物，对所得到的混合物中包含的细胞进行培养，形成球状体。10.一种球状体的形成促进方法，其中，将权利要求1～7中任一项所述的球状体形成促进剂的分散液与细胞悬浮液混合，得到所述球状体形成促进剂中包含的具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：窪田宗弘，辻川和丈，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：