一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法和应用技术

本发明专利技术属于转基因技术领域，具体地涉及一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法和应用，所述方法包括使用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于转基因
，具体地涉及一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]克罗恩病(Crohn
’
s disease，CD)是一种慢性炎症性肠病，又称局限性肠炎、局限性回肠炎、节段性肠炎和肉芽肿性肠炎。此病可以影响肠道的任何部位，但好发于末端回肠和右半结肠，可能会引起炎症甚至纤维化，导致回肠管壁狭窄。此病易反复发作，目前尚不能治愈。患有克罗恩疾病的人群与普通人群相比较回肠和大肠癌发生率高出90～100倍，克罗恩疾病患者出现阴肛鳞癌、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤等疾病也比较多，小肠部癌变腺癌是最常见的类型，多见于年轻人，患者累及结肠者会增加罹患结肠癌的风险，伴有原发性硬化性胆管炎者会增加患胆管癌和结肠癌的风险。目前克罗恩疾病发病机制尚不十分明确，但资料显示NOD2的基因突变是导致该疾病发生的危险因素。
[0003]随着分子生物学和遗传学研究的深入，NOD2基因与克罗恩病易患体质的关系逐渐明确。NOD2基因的遗传变异是克罗恩病最强烈的遗传风险本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括使用CRISPR
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Cas9靶向敲除小鼠Nod2基因。2.根据权利要求1所述的一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，所述敲除小鼠Nod2基因，为敲除Nod2基因Exon 3~4之间的序列。3.根据权利要求2所述的一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，敲除的序列占Nod2基因整个编码区的63.24%，所敲区域序列为非3倍数，导致移码突变，造成编码区域提前终止。4.根据权利要求3所述的一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：合成gRNA1=SEQ ID NO:1= TCTGTCGTTAGACGTGGGTCGGG;合成gRNA2= SEQ ID NO:2= TGGATGCGTTTCCACTGCTCTGG。5.根据权利要求4所述的一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1）原核注射：将Cas9 mRNA与人工合成的针对Nod2基因敲除的gRNA1和gRNA2混匀后通过显微注射至小鼠受精卵胞质或原核中，得F0小鼠；2）Nod2基因敲除小鼠的PCR鉴定：将F0小鼠进行PCR鉴定，并与野生型小鼠交配获得F1小鼠，鉴定获得克罗恩病小鼠动物模型。6.根据权利要求5所述的一种克罗恩病小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤1）包括以下步骤：选取4~6周龄SPF级雌性小鼠作为卵子供体，小鼠腹腔注射PMSG孕马血清促性腺素，48h后注射hCG人血绒膜促性腺素，随即与生殖能力正常的种公鼠进行交配，从输卵管收集小鼠受精卵，消化洗涤之后置于37℃培养箱中待用；将Cas9 mRNA与人工合成的针对Nod2基因敲除的gRNA1和gRNA2混匀后通过显微...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉，
申请(专利权)人：赛业苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：