包含靶向TNFα和OX40L的免疫球蛋白单可变结构域的多肽制造技术

本发明专利技术技术旨在提供用于治疗患有自身免疫疾病或炎性疾病的受试者的新型药物。具体地，本发明专利技术技术提供了包含至少四个免疫球蛋白单可变结构域(ISVD)的多肽，所述至少四个免疫球蛋白单可变结构域的特征在于至少两个ISVD与TNFα结合并且至少两个ISVD与OX40L结合。本发明专利技术技术还提供了核酸、载体和组合物。载体和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含靶向TNF
α
和OX40L的免疫球蛋白单可变结构域的多肽
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[0001]本专利技术技术涉及靶向TNFα和OX40L的多肽。它还涉及编码所述多肽的核酸分子和包含所述核酸的载体，并且涉及包含所述多肽、核酸或载体的组合物。本专利技术技术还涉及用于治疗患有自身免疫疾病或炎性疾病的受试者的方法中的这些产品。此外，本专利技术技术涉及产生这些产品的方法。
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技术介绍

[0002]自身免疫疾病或炎性疾病是机体针对其自身组织产生的免疫应答的结果。自身免疫疾病或炎性疾病通常是慢性的，并且甚至可能危及生命。自身免疫疾病或炎性疾病包括炎性肠病(如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、类风湿性关节炎、银屑病、银屑病关节炎和化脓性汗腺炎。炎性肠病(如克罗恩病和溃疡性结肠炎)是涉及肠道炎症并伴有上皮损伤的慢性炎性疾病。其他慢性自身免疫疾病如银屑病、银屑病关节炎和化脓性汗腺炎的特征是发红、干燥、发痒或鳞状皮肤斑块，关节疼痛性炎症，或者皮肤上出现炎症和红肿肿块。已经发现，患有银屑病的患者更可能患有某些合并症，包括糖尿病和炎性肠病(如克罗恩病或溃疡性结肠炎)以及癌症。
[0003]肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种同三聚体细胞因子，其主要由单核细胞和巨噬细胞产生，但已知也由CD4
+
和CD8
+
外周血T淋巴细胞分泌。TNFα可以作为可溶形式或作为跨膜蛋白存在。TNFα的主要作用是调节免疫细胞。TNFα充当内源性热原，并且其产生的调节异常与多种人类疾病有关，包括类风湿性关节炎(RA)、银屑病(Pso)、化脓性汗腺炎(HS)、炎性肠病(IBD)(如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC))、以及移植物抗宿主病(GVHD)。
[0004]FDA目前批准的用于RA和IBD炎性肠病的治疗包括抗TNFα生物制剂(如[戈利木单抗]、[依那西普]、[英夫利昔单抗]和[阿达木单抗])。然而，当前用于RA的抗TNFα治疗仅在少数患者中显示完全疾病缓解，并且仍存在大部分无反应者。类似地，当前用于炎性肠病的抗TNFα治疗面临大量对当前可用治疗无反应的患者，并且大部分患者在治疗12个月后发生对抗TNFα治疗的反应丧失。对于银屑病和银屑病关节炎，仅少数患者用包括[英夫利昔单抗]和[阿达木单抗]的生物制剂进行治疗。已经显示当前治疗至少在患者亚组中对于一些银屑病的治疗是有效的。
[0005]因此，对于自身免疫疾病如例如类风湿性关节炎或银屑病关节炎，迄今还没有生物制剂在大多数患者中展现关于疾病缓解的足够功效，并且反应的缺乏或丧失仍然是个问题。
[0006]OX40L(也称为CD252或TNFSF4)是TNF超家族的成员，并且是OX40受体(也称为CD134或TNFRSF4)的可诱导的共刺激配体。它主要在激活的抗原呈递细胞(APC)上表达，所述抗原呈递细胞包括树突细胞、巨噬细胞和B细胞。另一方面，OX40主要在激活的T细胞和自然杀伤T细胞上表达。OX40L主要表达为膜结合分子，但是也可以以切割的可溶形式被检测
到。OX40L/OX40已经被公认为多种疾病中的免疫共刺激调节剂，所述疾病的特征为协调免疫应答的激活的T细胞。其触发经由OX40的信号传导，从而引起多种活性，包括炎性细胞因子的产生和释放、效应T细胞(例如TH1、TH2、TH17)和细胞毒性T细胞的扩增和积累，以及降低Treg细胞的抑制功效。尽管几项研究表明共刺激OX40L/OX40轴参与自身免疫疾病如RA、Pso或IBD，但是当前没有FDA批准的OX
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40L生物制剂用于其治疗。
[0007]靶向多种疾病因子可以例如通过两种单独的生物制剂(例如与不同的治疗靶标结合的抗体)的共同施用或组合使用来实现。然而，从实用和商业两个角度来看，共同施用或组合使用单独的生物制剂可能具有挑战性。例如，单独产品的两次注射给患者带来了更加不便和更痛苦的治疗方案，这可能对依从性产生负面影响。关于两种单独产品的单次注射，提供允许两种产品在所需浓度下可接受的粘度和合适的稳定性的配制品可能是困难或不可能的。另外，共同施用和共同配制需要产生两种单独的药物，这可能增加总成本。
[0008]已经提出了能够与两种不同抗原结合的双特异性抗体作为解决与单独生物制剂(如抗体)的共同施用或组合使用相关的此类局限的一种策略。
[0009]已经提出了多种形式的双特异性抗体构建体。例如，双特异性抗体形式可能涉及两种抗体或其片段的化学缀合(Brennan，M，等人，Science，1985.229(4708)：第81
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83页；Glennie，M.J.，等人，J Immunol，1987.139(7)：第2367
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2375页)。
[0010]然而，此类双特异性抗体形式的缺点包括：在高浓度下的高粘度使得例如皮下施用具有挑战性，并且在于每个结合单元需要两个可变结构域相互作用以进行特异性高亲和力结合，对多肽稳定性和产生效率具有影响。此类双特异性抗体形式也可能潜在地导致与轻链错配或重链错配有关的化学、制造和控制(CMC)问题。
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技术实现思路

[0011]在一些实施方案中，本专利技术技术涉及同时特异性靶向TNFα和OX40L的多肽(或ISVD构建体)，其导致与单特异性抗TNFα或抗OX40L多肽相比提高的调节炎性反应的效率。
[0012]在一些实施方案中，本专利技术技术的多肽被高效产生(例如在微生物宿主中)并且在高浓度下具有低粘度，这对于皮下施用是有利和方便的。此外，在一些实施方案中，本专利技术技术的多肽对待治疗的受试者中预先存在的抗体(即在第一次用所述抗体构建体治疗之前存在于受试者中的抗体)具有有限的反应性。在优选实施方案中，此类多肽在待治疗的受试者中展现出足够长的半衰期，使得可以方便地将连续的治疗间隔开。
[0013]本专利技术技术的多肽包含至少四个免疫球蛋白单可变结构域(ISVD)或由其组成，其中至少两个ISVD与TNFα特异性地结合，并且至少两个ISVD与OX40L特异性地结合。优选地，与TNFα结合的至少两个ISVD与人TNFα特异性地结合，并且与OX40L结合的至少两个ISVD与人OX40L特异性地结合。
[0014]所述多肽优选地还包含任选地经由一个或多个肽接头连接的一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元，其中与没有所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元的相应多肽相比，所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元为所述多肽提供增加的半衰期。例如，结合单元可以是与血清蛋白结合、优选地与人血清蛋白如人血清白蛋白结合的ISVD。
[0015]还提供了一种能够表达本专利技术技术的多肽的核酸分子、包含所述核酸的核酸或载
体以及包含所述多肽、所述核酸或所述载体的组合物。所述组合物优选地是药物组合物。
[0016]还提供了一种包含编码根据本专利技术技术的多肽的核酸或载体的宿主或宿主细胞。
[0017]还提供了一种产生根据本专利技术技术的多肽的方法，所述方法至少包括以下步骤：
[0018]a.任选地在合适的宿主本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽、包含所述多肽的组合物、或包含含有编码所述多肽的核苷酸序列的核酸的组合物，其中所述多肽包含至少四个免疫球蛋白单可变结构域(ISVD)或由其组成，其中所述ISVD中的每一个包含任选地经由一个或多个肽接头连接的三个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)；并且其中：a.第一ISVD和第二ISVD各自与OX40L特异性地结合并且各自包含i.CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有2或1个氨基酸差异；ii.CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10具有2或1个氨基酸差异；以及iii.CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有2或1个氨基酸差异；并且b.第三ISVD和第四ISVD各自与TNF
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α特异性地结合并且各自包含iv.CDR1，所述CDR1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或与SEQ ID NO:8具有2或1个氨基酸差异；v.CDR2，所述CDR2包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有2或1个氨基酸差异；以及vi.CDR3，所述CDR3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14具有2或1个氨基酸差异。2.根据权利要求1所述的多肽或组合物，其中：a.所述第一ISVD和所述第二ISVD各自包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR3；并且b.所述第三ISVD和所述第四ISVD各自包含含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR3。3.根据权利要求1或2中任一项所述的多肽或组合物，其中：a.所述第一ISVD的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:2的超过90％的序列同一性；b.所述第二ISVD的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:3的超过90％的序列同一性；c.所述第三ISVD的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:4的超过90％同一性的序列同一性；并且d.所述第四ISVD的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:6的超过90％同一性的序列同一性。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽或组合物，其中：a.所述第一ISVD包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；b.所述第二ISVD包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；c.所述第三ISVD包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；并且d.所述第四ISVD包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽或组合物，其中所述多肽还包含任选地经由一个或多个肽接头连接的一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元，其中与没有所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元的相应多肽相比，所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元为所述多肽提供增加的半衰期。6.根据权利要求4或5中任一项所述的多肽或组合物，其中为所述多肽提供增加的半衰
期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单元选自可与血清白蛋白(如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(如IgG)结合的结合单元。7.根据权利要求6所述的多肽或组合物，其中为所述多肽提供增加的半衰期的所述结合单元是可与人血清白蛋白结合的ISVD。8.根据权利要求7所述的多肽或...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：赛诺菲，
类型：发明
国别省市：