一种选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼的方法技术

本发明专利技术提供一种选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼的方法，即通过SNP位点来进行快速生长的大泷六线鱼亲本的筛选。所检测的SNP位点位于序列为SEQ ID NO：1的核苷酸片段的第361位，其碱基为C或T。本发明专利技术确定大泷六线鱼的生长激素基因内含子的第361位存在与生长性状相关的SNP位点，基因型为CC纯合型个体的生长速率显著高于TT基因型和CT基因型个体。因此，生产中可优先选择该位点的基因型为CC型个体作为亲本或者进行规模养殖。作为亲本或者进行规模养殖。作为亲本或者进行规模养殖。

【技术实现步骤摘要】
一种选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼的方法


[0001]本专利技术属于鱼类遗传选育
，具体提供一种选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼的方法。

技术介绍

[0002]大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)为六线鱼科六线鱼属的鱼类，是一种冷温性海洋鱼类，近海底层栖息，全年生活在沿岸及岛屿的岩礁附近，一般水深在50米以内，温度8～23℃，盐度16～32
‰
；为肉食性鱼类，摄食种类繁多。
[0003]在人工繁育技术突破之前，用于网箱养殖的大泷六线鱼苗种均来自野生苗种，产量不稳定并呈逐年减少趋势，难以满足大规模、高产量的养殖需求；另一方面，从自然界采捕野生苗种，本身就是对自然资源的掠夺和破坏，与渔业资源修复、生态保护等理念相悖。由于过度捕捞和环境变化，大泷六线鱼自然资源几近衰竭，因此人工育苗越来越引起养殖的广泛重视。
[0004]但目前大泷六线鱼的规模化人工繁育还存在问题，因为大泷六线鱼的生活习性决定了其适合海上网箱养殖，不适合工厂化养殖，因此目前大泷六线鱼的人工育苗多采用野生或海上网箱养殖的成鱼，但是无论将野生或是网箱养殖的成鱼转入车间促熟培育，都会导致其生活环境和条件发生巨大改变，易出现聚堆、受惊吓、不摄食等不适应的现象，导致鱼体受伤感染、烂鳍烂尾，降低了鱼体免疫水平，进而导致性腺退化，甚至大量死亡，大大制约了大泷六线鱼亲鱼培育的成功率。
[0005]分子标记辅助育种是快速获得理想家系、品系或品种的现代生物育种方法，分子标记育种已经应用到水产动物的遗传育种领域中，但在已在畜禽及水生动物中得以应用，与传统方法相比，提高了选育效率。但在大泷六线鱼育种领域中还缺少与生长性状相关的分子标记。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼的方法，是通过SNP位点来进行快速生长的大泷六线鱼亲本的筛选。
[0007]本专利技术首先提供一种与大泷六线鱼生长性状相关的SNP位点，所述的 SNP位点位于序列为SEQ ID NO：1的核苷酸片段的第361位，其碱基为C 或T；
[0008]本专利技术提供的SNP位点可作为分子标记来选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼个体。
[0009]本专利技术再一个方面还提供一种筛选具有快速生长潜力的大泷六线鱼个体的方法，是通过检测上述的SNP位点的基因型来进行筛选；
[0010]所述的方法，是通过引物对来扩增待检测的大泷六线鱼个体基因组 DNA，对扩增产物进行测序分析，确定待检测个体是否具有快速生长潜力；
[0011]所述的方法，其中所使用的引物对包含有：
[0012]上游引物:5
′‑
CAATCACAGACAACCAGCGGGA
‑3′
(SEQ ID NO：2)，
[0013]下游引物:5
′‑
GGGTGCAGTTAGCTTCTGGAAG
‑3′
(SEQ ID NO:3)；
[0014]所述的测序分析，是确定SNP位点的基因型，其中基因型为CC纯合型个体的生长速率显著高于TT基因型和CT基因型个体。
[0015]本专利技术确定大泷六线鱼的生长激素基因内含子的第361位存在与生长性状相关的SNP位点，基因型为CC纯合型个体的生长速率显著高于TT 基因型和CT基因型个体。因此，生产中可优先选择该位点的基因型为CC 型个体作为亲本或者进行规模养殖。
附图说明
[0016]图1：SNP标记的TT基因型、CC基因型和CT基因型测序峰图。
具体实施方式
[0017]单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)是指基因组DNA 上由单个核苷酸突变所引起的DNA序列多态性，通过确定SNP及基因型分型进行选种已在水产领域中得到广泛的应用。
[0018]本专利技术通过构建具有生长优势的大泷六线鱼家系，通过对家系成员与非家系成员的生长激素基因的序列比对，筛查出SNP位点，并分析位点基因型频率与大泷六线鱼生长性状的相关性。发现生长激素基因内含子的第 361位存在与生长性状相关的SNP位点，基因型为CC纯合型个体的生长速率显著高于TT基因型和CT基因型个体。因此，生产中可优先选择该位点基因型为CC型个体作为亲本或者进行规模养殖。
[0019]下面通过实施例和附图对本专利技术进行详细的说明。
[0020]实施例1：建立大泷六线鱼家系
[0021]在山东省海洋生物研究院中试基地建立具有生长优势的大泷六线鱼家系。选取野生大泷六线鱼作为亲本繁殖的同一批鱼苗中具有明显生长优势的个体作为亲本，在大泷六线鱼繁殖季节来建立家系。
[0022]其中鱼苗孵化参照常规的大泷六线鱼的受精孵化操作步骤，具体如下：
[0023]1)人工授精
[0024]将雌鱼成熟鱼卵收集放到铺有网片的平板上，其中网片选用硬质聚乙烯平网，网孔孔径0.5—1厘米；剪裁成30厘米
×
30厘米规格。将鱼卵摊开形成一层鱼卵，
[0025]在摊开鱼卵的同时，将雄鱼的精液挤入到装有海水的玻璃杯内激活，轻摇玻璃杯使精液混匀，将精液慢慢倒到单层鱼卵上，使精卵充分接触。
[0026]2)受精卵片固定
[0027]人工授精结束后，用海水冲洗受精卵片。将卵片夹在两层硬质聚乙烯平网之间，并固定好，防止卵片活动损伤受精卵。
[0028]3)受精卵孵化
[0029]将用硬质聚乙烯平网固定好的卵片放入到孵化网箱进行孵化，采用流水、连续充气、16℃水温恒温孵化的方式进行孵化。
[0030]孵化期间每天早8:30
‑
10:00、晚15:00
‑
16:30将受精卵从孵化池中取出并暴露在空气中，在空气中进行日光灯暖光源照射，其中光强为2000lux，光照时间为1.5小时，每隔
15分钟进行一次水流刺激，刺激用水为16℃海水，反复刺激1.5小时后放回孵化池中继续孵化。
[0031]受精卵孵化后，初孵仔鱼集中在孵化网箱底部，待仔鱼上浮后，及时将仔鱼移出到培育池进行苗种培育，培育的苗种作为构建的家系的F1代。
[0032]将F1代的仔鱼培养至性成熟后，再次选择同样条件下生长速度快的个体作为亲本，来构建家系的F2代；同时选择相对生长速率低的个体作为亲本来构建对照家系。
[0033]当大泷六线鱼鱼苗生长至全长为10
‑
12cm时，从构建的F2家系和对照家系中选取100尾鱼苗，采用荧光颜料标记不同家系的鱼苗，标记后的鱼苗混养在同一水体中进行养殖。在养殖8个月后收集各家系鱼苗进行全长和体重测量。每个家系的鱼苗采样5尾进行测量，计算各个家系体重的平均值，结果表明F2家系的平均体重(193
±
5.2)明显大于对照家系(145
ꢀ±
3.5)。
[0034]使用ABI3730测序仪对F2家系的个体和对照家系个体的纯生长激素基因进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与大泷六线鱼生长相关的SNP位点，其特征在于，所述的SNP位点位于序列为SEQ ID NO：1的核苷酸片段的第361位，其碱基为C或T。2.检测权利要求1所述的SNP位点的试剂在选育具有快速生长潜力的大泷六线鱼个体中的应用。3.一种筛选具有快速生长潜力的大泷六线鱼个体的方法，其特征在于，所述的方法是通过检测权利要求1所述的SNP位点的基因型来进行筛选。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的方法是通过引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁廷柱，肖磊，肖爽，宋爽爽，肖众，
申请(专利权)人：山东省海洋科学研究院青岛国家海洋科学研究中心，
类型：发明
国别省市：