依曲韦林在抗狂犬病病毒中的应用和抗狂犬病病毒药物的筛选方法技术

本发明专利技术提供了一种依曲韦林在抗狂犬病病毒中的应用和抗狂犬病病毒药物的筛选方法，涉及抗狂犬病病毒药物技术领域。本发明专利技术发现依曲韦林具有抗狂犬病病毒活性，确定了依曲韦林在抗狂犬病病毒中的作用。同时本发明专利技术提供了抗狂犬病病毒药物的筛选方法，通过使用荧光标记的狂犬病病毒感染细胞，使用候选药物处理感染病毒的细胞，再观察细胞的荧光强度，能够通过荧光显微镜以连续和非损害方式来分析和定量病毒的复制。毒的复制。毒的复制。

【技术实现步骤摘要】
依曲韦林在抗狂犬病病毒中的应用和抗狂犬病病毒药物的筛选方法


[0001]本专利技术涉及抗狂犬病病毒药物
，尤其是涉及一种依曲韦林在抗狂犬病病毒中的应用和抗狂犬病病毒药物的筛选方法。

技术介绍

[0002]狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus，RABV)引起的一种高度致死性的人兽共患传染病，以侵害中枢神经系统为特征，引起人和其他哺乳动物的脑炎。到目前为止，狂犬病仍是一种无法治愈的疾病，唯一的预防方法是在暴露前或暴露后进行疫苗接种。一旦出现临床症状，病死率高达100％。因此，急需寻找更多的有效的抗RABV药物。
[0003]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的在于提供依曲韦林在非诊断和治疗目的的抗狂犬病病毒中的应用，本专利技术发现依曲韦林具有抗狂犬病病毒活性，确定了依曲韦林在抗狂犬病病毒中的作用。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供依曲韦林在制备用于预防和/或缓解细胞狂犬病病毒感染的药物，或制备用于治疗和/或预防狂犬病的药物中的应用。
[0006]本专利技术的第三目的在于提供一种抗狂犬病病毒药物的筛选方法。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0008]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了依曲韦林在非诊断和治疗目的的抗狂犬病病毒中的应用。
[0009]优选地，所述狂犬病病毒包括狂犬病病毒株PV株、PM株、Flury株、 SAD株、aG株、CVS株或CTN株；优选为CVS株，更优选为CVS
‑
11株。
[0010]优选地，所述应用包括：预防细胞感染狂犬病病毒；和/或抑制细胞中狂犬病病毒的生长和增殖。
[0011]优选地，所述细胞包括N2A细胞和BHK细胞。
[0012]根据本专利技术的一个方面，本专利技术还提供了依曲韦林在制备用于预防和/ 或缓解细胞狂犬病病毒感染的药物中的应用。
[0013]根据本专利技术的一个方面，本专利技术还提供了依曲韦林在制备用于治疗和/ 或预防狂犬病的药物中的应用。
[0014]根据本专利技术的一个方面，本专利技术还提供了抗狂犬病病毒药物的筛选方法，包括如下步骤：
[0015](a)使用荧光标记的狂犬病病毒感染细胞；
[0016](b)使用候选药物处理感染狂犬病病毒的细胞；
[0017](c)观察细胞的荧光强度。
[0018]优选地，所述荧光标记的狂犬病病毒为荧光标记的CVS
‑
11，优选为 EGFP标记的CVS
‑
11重组病毒。
[0019]优选地，使用荧光标记的狂犬病病毒感染N2A细胞。
[0020]优选地，所述筛选方法包括如下步骤：
[0021](a)使用EGFP标记的CVS
‑
11重组狂犬病病毒感染N2A细胞；
[0022](b)使用候选药物处理感染CVS
‑
11重组狂犬病病毒的N2A细胞；
[0023](c)观察N2A细胞中的荧光强度。
[0024]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0025]本专利技术通过实验发现依曲韦林具有抗RABV的活性，依曲韦林能够有效的抑制细胞中RABV的增殖，细胞感染RABV后，在培养基中含有依曲韦林的生长环境下，细胞中的RABV的生长和增殖能够得到有效的抑制，经荧光定量PCR检测和免疫印迹实验鉴定，RABV的P基因的mRNA和P 蛋白的表达量显著降低。因此可以将依曲韦林应用于非诊断和治疗目的的抗RABV领域中。
[0026]基于本专利技术发现的依曲韦林的抗RABV的活性，本专利技术提供的依曲韦林在制备用于预防和/或缓解细胞RABV感染的药物中的应用以及在制备用于治疗和/或预防狂犬病的药物中的应用，为抗RABV的药物的选择，和治疗狂犬病的候选药物提供了新的活性成分供进一步的研究。
[0027]本专利技术提供的抗RABV药物的筛选方法，能够在荧光显微镜下直接观察细胞中外源表达的荧光蛋白。此外，与携带荧光素酶报告基因的重组病毒相比，检测荧光信号时表达荧光蛋白的重组病毒不需要加入任何底物。所以，可以通过荧光显微镜以连续和非损害方式来分析和定量病毒的复制。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0029]图1为N2A细胞感染CVS
‑
11或CVS
‑
11
‑
EGFP后，分别于感染后0h、 12h、24h、48h、72h和96h收获细胞上清，检测病毒滴度得到的病毒生长曲线；
[0030]图2为N2A细胞分别感染CVS
‑
11和CVS
‑
11
‑
EGFP后，分别于感染后 0h、12h、24h、48h、72h、96h细胞经蛋白裂解液裂解后经Western blotting，检测病毒P蛋白的表达结果；
[0031]图3为N2A细胞感染CVS
‑
11
‑
EGFP后，使用候选抗病毒化合物小分子处理感染细胞，于感染后48h进行病毒的检测，通过直接免疫荧光实验检测病毒增殖情况，图中分别为加入Etravirine、Abacavir、Delavirdine和 Nevirapine后，以及未加入药物和空白对照的荧光观察结果；
[0032]图4为N2A细胞感染CVS
‑
11后，使用Etravirine、Abacavir、Delavirdine 和Nevirapine处理感染细胞后，CVS
‑
11的P基因mRNA的表达量；
[0033]图5为N2A细胞感染CVS
‑
11后，使用Etravirine、Abacavir、Delavirdine 和Nevirapine处理感染细胞后，细胞经蛋白裂解液裂解后经Western blotting 检测病毒P蛋
白的表达结果。
具体实施方式
[0034]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了依曲韦林在非诊断和治疗目的的抗RABV中的应用。
[0036]依曲韦林(Etravirin)是一种非核苷类逆转录酶抑制剂，具有抗HIV感染作用。本专利技术通过实验发现依曲韦林具有抗RABV的活性，细胞感染 RABV后，在培养基中含有依曲韦林的生长环境下，细胞中的RABV的生长和增殖能够得到有效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.依曲韦林在非诊断和治疗目的的抗狂犬病病毒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述狂犬病病毒包括狂犬病病毒株PV株、PM株、Flury株、SAD株、aG株、CVS株或CTN株；优选为CVS株，更优选为CVS
‑
11株。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括：预防细胞感染狂犬病病毒；和/或抑制细胞中狂犬病病毒的生长和增殖。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细胞包括N2A细胞和BHK细胞。5.依曲韦林在制备用于预防和/或缓解细胞狂犬病病毒感染的药物中的应用。6.依曲韦林在制备用于治疗和/或预防狂犬病的药物中的应用。7.抗狂犬病病毒药物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)使用荧光标记的狂犬病病毒感染细胞；...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂忠忠，涂长春，刘艳，冯烨，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，
类型：发明
国别省市：