一种MIF抑制剂4-IPP在制备治疗脑胶质瘤药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种MIF抑制剂4

【技术实现步骤摘要】
一种MIF抑制剂4
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IPP在制备治疗脑胶质瘤药物的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及MIF抑制剂4
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IPP在制备治疗脑胶质瘤药物方面的应用。

技术介绍

[0002]脑胶质瘤(Gliomas)是最常见的中枢神经系统原发性恶性肿瘤，其浸润性生长、易复发、预后不良，是癌症治疗中最具挑战性疾病之一[1]。脑胶质瘤年发病率约为6/10万，5年平均生存率低于10％[2]；胶质母细胞瘤(Glioblastoma)是WHOⅣ级胶质瘤，恶性度极高，从诊断到死亡平均时间不到18个月[3]。
[0003]目前，手术切除、化疗联合放疗及靶向免疫疗法是治疗胶质瘤的主要方案。但是，由于术后肿瘤残留、放疗敏感性下降、化疗耐药等原因，胶质瘤患者的平均生存时间并没有得到实质性改善。巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一种具有酶、趋化因子和激素等性质的多能细胞因子[4]，MIF直接参与肿瘤细胞的调节，促进肿瘤生长、转移、血管新生[5]。研究发现，MIF在前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、结肠癌和胶质瘤等多种肿瘤中都有高表达[6
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10]。RT
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PCR定量检测恶性胶质瘤细胞中MIF mRNA的表达量比正常脑组织高800倍，并且这与总细胞裂解物和分泌的MIF蛋白水平高有关[11]。还有研究发现过表达MIF诱导血管生成，与胶质瘤的分期和转移扩散相关[4
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5]；MIF表达升高也与胶质母细胞瘤患者肿瘤复发及预后不良有关[12]。因此，MIF可能作为胶质瘤治疗的新型靶点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的是为制备治疗脑胶质瘤药物，提供一种MIF抑制剂4
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碘
‑6‑
苯基嘧啶(4
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IPP)在制备胶质瘤治疗药物中的应用。
[0005]本专利技术的第二目的是提供一种MIF抑制剂4
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IPP在制备胶质瘤细胞增殖抑制药物中的应用。
[0006]本专利技术的第三目的是提供一种MIF抑制剂4
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IPP在制备脑胶质瘤细胞转移抑制药物中的应用。
[0007]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术首次公开了一种MIF抑制剂4
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IPP在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用，本专利技术先在体外实验采用不同浓度4
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IPP处理U87和U251胶质瘤细胞，使用CCK
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8和克隆形成实验检测4
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IPP处理后U87和U251胶质瘤细胞的增殖能力以及克隆形成能力；通过使用Transwell小室进行Migration/Invasion实验检测4
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IPP对U87和U251细胞转移/侵袭的抑制作用。进一步体内实验采用U87构建雄性裸鼠皮下异位移植肿瘤模型，通过对裸鼠分别进行腹膜内注射PBS组(Control组)及20mg/kg 4
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IPP组(治疗组)，观察MIF抑制剂4
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IPP对胶质瘤的治疗作用，计算肿瘤大小、称重肿瘤质量及计算肿瘤体积。研究结果表明，4
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IPP能够有效的抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成和转移，以及治疗胶质瘤。
附图说明
[0008]图1为实施例1的4
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IPP处理U87细胞的CCK
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8增殖实验的效果图；图2为实施例1的4
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IPP处理U251细胞的CCK
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8增殖实验的效果图；图3为实施例1的4
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IPP处理U87和U251细胞的细胞克隆形成实验的效果图；图4为实施例2的4
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IPP处理U87和U251细胞的Migration实验和Invasion实验的效果图；图5为实施例3的PBS组及20mg/kg 4
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IPP组的皮下异位移植肿瘤模型的效果图；
具体实施方式
具体实验方法和结果如下：实施例1一、实验方法：
[0009]1、细胞增殖实验CCK
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8：将一代的U87和U251细胞以2000个/孔数量接种在96孔板中，12小时后分别加入浓度为0.390625μM，0.78125μM，1.5625μM，3.125μM，6.25μM，12.5μM，25μM，50μM，100μM和200μM的4
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IPP溶液。培养24小时后，加入20μL CCK
‑
8试剂盒37℃孵育2小时后用荧光酶标仪检测OD值。
[0010]2、克隆形成实验：取对数生长期的单层培养细胞，胰酶消化并吹打成单个细胞，重悬后进行细胞计数，按照200个/孔的密度铺到六孔板内，摇板分散细胞，置培养箱过夜。第二天分别加入12.5μM，25μM和50μM的4
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IPP，每周换液2次，培养2～3周。隔日观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，固定后使用结晶紫染色，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。二、实验结果：
[0011]图1所示在体外，设置浓度梯度的4
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IPP来处理U87细胞24h后使用CCK
‑
8试剂检测其细胞增殖情况，结果显示4
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IPP可显著抑制U87的增殖能力。图2所示在体外，设置浓度梯度的4
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IPP来处理U251细胞24h后使用CCK
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8试剂检测其细胞增殖情况，结果显示4
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IPP可显著抑制U251的增殖能力。基于CCK
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8实验得到的结果，进一步采用浓度梯度进行克隆实验，图3的结果显示4
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IPP可以有效抑制U87/U251的克隆形成能力。以上结果表明4
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IPP可以有效抑制胶质瘤细胞U87/U251的增殖和克隆形成能力。实施例2一、实验方法：
[0012]1、Migration和Invasion实验：Transwell小室(24孔板)用于进行Migration实验和基质胶包被的Invasion试验。对于Migration实验，取200ul细胞悬液(密度2
×
105)加入Transwell小室，500μl含有不同浓度4
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IPP的完全培养基置于下室，培养24小时后收样。对于侵袭测定，Matrigel基质胶包被上室后铺设200ul细胞悬液(密度2
×
105)，同时将500μl含有不同浓度4
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IPP的完全培养基添加到下室，培养24小时后收样。收样后结晶紫染色，显微镜拍照。二、实验结果：
migrationinhibitory factor antibodies inhibit growth of human prostate cancer本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种如下图所示的小分子化合物巨噬细胞迁移抑制因子MIF抑制剂4
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IPP在制备治疗脑胶质瘤药物方面的应用。2.一种权利要求1所述的小分子化合物4
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【专利技术属性】
技术研发人员：杜延茹，郑琳，
申请(专利权)人：郑琳，
类型：发明
国别省市：