【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及一种重组水泡性口炎病毒以及埃博拉出血热感染动物模型的构建方法。
技术介绍
1、埃博拉病毒病(ebola virus disease,evd)是由埃博拉病毒(ebola virus，ebov)引起的一种急性发热伴有严重出血的烈性传染病。埃博拉病毒(ebov)是丝状病毒科埃博拉病毒属的成员之一，可在人类和非人类灵长类动物(nhps)中引起严重的出血性疾病，病死率高达90％。目前，已有两种单克隆抗体用来治疗埃博拉病毒病：mab114(ansuvimab)和regn-eb3(inmazeb)。而研究ebov的难点在于，ebov是四级病原，需要在极高的生物安全等级实验室条件下进行操作，实验条件苛刻且成本较高，阻碍了针对ebov药物和疫苗的开发。因此，迫切需要经济和方便的动物模型以促进预防和治疗ebov的产品的开发。
2、水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,vsv)反向遗传技术已广泛应用于重组病毒构建，具有安全性高的优势。目前虽然已有表达埃博拉病毒囊膜糖蛋白(gp)的重组水泡性口炎病毒的报道，但均为用于疫苗开发和抗体制备的重组病毒，致病性弱，尚未见可用于埃博拉病毒感染动物模型构建的重组病毒及其感染动物模型构建的报道。
技术实现思路
1、本专利技术提供表达埃博拉病毒囊膜糖蛋白的重组水泡性口炎病毒以及埃博拉出血热感染动物模型的构建方法。
2、基于现有技术存在问题，本专利技术旨在基于vsv反向遗传平台构建一种能够在
3、具体地，本专利技术提供以下技术方案：
4、第一方面，本专利技术提供一种重组核酸分子，所述重组核酸分子包含重组水泡性口炎病毒基因组；
5、所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的g基因缺失，并在n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因得到；
6、或者，所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的g基因缺失，在n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因，并在m基因和l基因之间插入标记蛋白编码基因得到。
7、影响重组水泡性口炎病毒感染性和致死性的因素众多，本专利技术在研发过程中意外地发现，埃博拉病毒gp基因在水泡性口炎病毒基因组中的插入位置会对重组病毒的致死性产生较大影响。与其他插入位置相比(例如插入在m基因和l基因之间)，在水泡性口炎病毒基因组的n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因，能够显著提高重组病毒对金黄地鼠的致死性。
8、本专利技术中，水泡性口炎病毒的g基因为编码水泡性口炎病毒糖蛋白(g)的基因，n、p、m、l基因分别为编码水泡性口炎病毒n蛋白、p蛋白、m蛋白和l蛋白的基因。埃博拉病毒gp基因为编码埃博拉病毒囊膜糖蛋白(gp)的基因。
9、以上所述的重组核酸分子优选为重组dna。
10、本专利技术中，所述埃博拉病毒优选为扎伊尔型埃博拉病毒。
11、本专利技术发现，与其他型埃博拉病毒相比，扎伊尔型埃博拉病毒的gp基因更有利于产生致死性感染，更适合用于埃博拉出血热感染动物模型的构建。
12、优选地，所述扎伊尔型埃博拉病毒gp基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
13、在本专利技术的一些实施方式中，所述重组核酸分子中还引入了标记蛋白编码基因，以便于通过检测荧光等标记信号方便重组病毒的检测。对于标记蛋白的种类，本专利技术没有特殊限制。
14、可选地，所述标记蛋白为荧光标记蛋白，包括但不限于绿色荧光蛋白。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述标记蛋白编码基因为egfp基因。
16、在本专利技术的一些实施方式中，所述水泡性口炎病毒基因组为水泡性口炎病毒印第安纳疫苗株(indiana)的基因组，其genbank登录号为j02428.1。
17、优选地，所述重组核酸分子还包含位于所述重组水泡性口炎病毒基因组上游的启动子。
18、优选地，所述重组核酸分子还包含位于所述重组水泡性口炎病毒基因组下游的丁肝病毒核酶序列。
19、优选地，所述启动子为cmv启动子和t7启动子。
20、cmv启动子和t7启动子的序列分别如seq id no.2所示序列的1-204bp、205-223bp所示。
21、丁肝病毒核酶序列如seq id no.2所示序列的11933-12008bp所示。
22、优选地，所述重组核酸分子的核苷酸序列如seq id no.2所示。
23、第二方面，本专利技术提供一种生物材料，所述生物材料为重组载体或宿主细胞；
24、所述重组载体包含以上所述的重组核酸分子；
25、所述宿主细胞包含以上所述的重组核酸分子，或者包含所述重组载体。
26、优选地，所述重组载体为哺乳动物表达质粒。
27、所述重组载体为将以上所述的重组核酸分子插入哺乳动物表达质粒得到。对于哺乳动物表达质粒的种类，本专利技术没有特殊限制，所有能够在动物细胞中进行复制和蛋白表达的质粒均可。
28、在本专利技术的一些实施方式中，所述哺乳动物表达质粒为pcdna3.1。
29、以上所述的重组载体与辅助质粒共转染宿主细胞，能够通过病毒拯救得到表达埃博拉病毒gp蛋白的重组水泡性口炎病毒，且重组水泡性口炎病毒能够进行复制增殖和稳定传代。
30、以上所述的宿主细胞包括微生物细胞或动物细胞。对于宿主细胞的种类，本专利技术没有特殊限制，其中，微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、酵母等；动物细胞包括但不限于金黄仓鼠肾细胞(bsr)等。
31、第三方面，本专利技术提供一种重组水泡性口炎病毒，所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的g基因缺失，并在n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因得到；
32、或者，所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的g基因缺失，在n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因，并在m基因和l基因之间插入标记蛋白编码基因得到。
33、优选地，所述重组水泡性口炎病毒包含水泡性口炎病毒核蛋白、水泡性口炎病毒磷蛋白、水泡性口炎病毒基质蛋白、水泡性口炎病毒rna聚合酶以及埃博拉病毒囊膜糖蛋白(gp)，且不包含水泡性口炎病毒糖蛋白。
34、优选地，所述重组水泡性口炎病毒具有复制增殖能力。
35、优选地，所述埃博拉病毒为扎伊尔型埃博拉病毒。
36、优选地，优选地，所述扎伊尔型埃博拉病毒gp基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
37、在本专利技术的一些实施方式中，所述重组核酸分子中还引入了标记蛋白编码基因，以便于通过检测荧光等标记信号方便重组病毒的检测。对于标记蛋白的种类，本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组核酸分子，其特征在于，所述重组核酸分子包含重组水泡性口炎病毒基因组；
2.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其特征在于，所述埃博拉病毒为扎伊尔型埃博拉病毒；
3.根据权利要求1或2所述的重组核酸分子，其特征在于，所述重组核酸分子还包含位于所述重组水泡性口炎病毒基因组上游的启动子；
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组载体或宿主细胞；
5.一种重组水泡性口炎病毒，其特征在于，所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的G基因缺失，并在N基因和P基因之间插入埃博拉病毒GP基因得到；
6.根据权利要求5所述的重组水泡性口炎病毒，其特征在于，所述埃博拉病毒为扎伊尔型埃博拉病毒；
7.权利要求5或6所述的重组水泡性口炎病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将包含权利要求1～3任一项所述的重组核酸分子的重组载体和辅助质粒导入宿主细胞中，得到重组宿主细胞，培养重组宿主细胞并收获释放的病毒；
8.权利要求1～3任一项所述的重组核酸分子或权利要求4所述的生物材料或权利要求5或6所
9.一种埃博拉病毒感染动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：以权利要求5或6所述的重组水泡性口炎病毒对雌性金黄地鼠进行攻毒；
10.权利要求9所述的构建方法构建得到的埃博拉病毒感染动物模型的以下任一种应用：
...【技术特征摘要】
1.一种重组核酸分子，其特征在于，所述重组核酸分子包含重组水泡性口炎病毒基因组；
2.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其特征在于，所述埃博拉病毒为扎伊尔型埃博拉病毒；
3.根据权利要求1或2所述的重组核酸分子，其特征在于，所述重组核酸分子还包含位于所述重组水泡性口炎病毒基因组上游的启动子；
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组载体或宿主细胞；
5.一种重组水泡性口炎病毒，其特征在于，所述重组水泡性口炎病毒基因组为将水泡性口炎病毒基因组中的g基因缺失，并在n基因和p基因之间插入埃博拉病毒gp基因得到；
6.根据权利要求5所述的重组水泡性口炎病毒，其特征在于，所述埃...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫飞虎，杨婉莹，赵永坤，冯娜，王铁成，夏咸柱，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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