增殖抑制剂制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种对与分化诱导得到的胰岛素分泌细胞共存的非内分泌性的目标外细胞进行去除的方法。本发明专利技术涉及一种胰岛素产生细胞群的制造方法，所述制造方法包括利用PLK抑制剂对由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群进行处理的步骤。岛素产生细胞群进行处理的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增殖抑制剂


[0001]本专利技术涉及一种对存在于由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群或胰岛β细胞群中的非内分泌性的目标外细胞进行去除的方法。

技术介绍

[0002]目前正在推进由iPS细胞或ES细胞等多能干细胞分化诱导成称为胰岛素产生细胞或胰岛β细胞的胰岛素分泌细胞，并应用于糖尿病治疗的研究。
[0003]迄今为止，已开发并报道了各种用于由多能干细胞分化诱导成胰岛素分泌细胞群的方法(非专利文献1)。然而，在经分化诱导得到的胰岛素分泌细胞群中，除了作为目标的胰岛素分泌细胞，还包含非内分泌性的细胞；为了促进对于糖尿病治疗的利用，期望一种更有效率地取得作为目标的胰岛素分泌细胞的方法。【现有技术文献】【非专利文献】
[0004]【非专利文献1】Stem Cell Research(2015)14,185
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技术实现思路

【专利技术所要解决的技术问题】
[0005]本专利技术者们发现，在由多能干细胞分化诱导成胰岛素产生细胞或胰岛β细胞的细胞群中，除了这些胰岛素分泌细胞(胰岛素产生细胞或胰岛β细胞)，还存在以嗜铬粒蛋白A(以下，描述为“CHGA”)阴性表征的非内分泌性的细胞(以下，有时描述为“CHGA阴性细胞”)。还发现CHGA阴性细胞中，包含以Ki67标记阳性表征的高增殖性的细胞(CHGA阴性且Ki67阳性细胞)。
[0006]在想要将分化诱导得到的胰岛素分泌细胞应用于糖尿病治疗等时，从安全性的观点来看，严格控制胰岛素分泌细胞以外的细胞是极为重要的。此外，具有高增殖性的细胞的混入/残存可能会对接受者产生负面影响或对所移植的胰岛素分泌细胞的长期存活产生影响，这并非是优选的。
[0007]此处，本专利技术的目的在于提供一种对与分化诱导得到的胰岛素分泌细胞共存的CHGA阴性细胞进行去除的方法。【用于解决问题的技术手段】
[0008]本专利技术者们为了解决上述问题而锐意研究的结果是发现通过利用PLK抑制剂对由多能干细胞分化诱导得到的胰腺前体细胞群、优选内分泌前体细胞群、更优选胰岛素产生细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群进行处理，能够抑制CHGA阴性细胞的增殖，可得到这些细胞的含量已被降低的胰腺前体细胞群、内分泌前体细胞群、胰岛素产生细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群。
[0009]本专利技术是基于这些新认知的专利技术，包含以下专利技术。[1]一种胰岛素产生细胞群的制造方法，所述制造方法包括利用PLK抑制剂对由多
能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群进行处理的步骤。[1
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1]一种胰岛素产生细胞群的制造方法，所述制造方法包括利用PLK抑制剂对由多能干细胞分化诱导得到的内分泌前体细胞群进行处理的步骤。[1
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2]一种胰岛素产生细胞群的制造方法，所述制造方法包括利用PLK抑制剂对由多能干细胞分化诱导得到的胰腺前体细胞群进行处理的步骤。[2]根据[1]至[1
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2]中任一项所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以20％及以下的比例包含CHGA阴性细胞。[3]根据[1]至[2]中任一项所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以3％及以下的比例包含CHGA阴性且Ki67阳性的细胞。[4]根据[1]至[3]中任一项所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以15％及以上的比例包含胰岛素阳性且NKX6.1阳性的细胞。[5]根据[1]至[4]中任一项所述的制造方法，所述制造方法进一步包括使经PLK抑制剂处理的细胞群分化的步骤。[6]根据[1]至[5]中任一项所述的制造方法，所述制造方法利用3μM及以下的PLK抑制剂进行处理。[7]一种抑制CHGA阴性细胞的增殖的方法，所述CHGA阴性细胞存在于由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群中，所述方法包括利用PLK抑制剂对所述细胞群进行处理。[7
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1]一种抑制CHGA阴性细胞的增殖的方法，所述CHGA阴性细胞存在于由多能干细胞分化诱导得到的内分泌前体细胞群中，所述方法包括利用PLK抑制剂对所述细胞群进行处理。[7
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2]一种抑制CHGA阴性细胞的增殖的方法，所述CHGA阴性细胞存在于由多能干细胞分化诱导得到的胰腺前体细胞群中，所述方法包括利用PLK抑制剂对所述细胞群进行处理。[8]根据[7]所述的方法，所述方法利用3μM及以下的PLK抑制剂对胰岛素产生细胞群进行处理。[9]根据[7]或[8]所述的方法，所述方法使存在于胰岛素产生细胞群中的CHGA阴性细胞减少到20％及以下的比例。[10]根据[7]至[9]中任一项所述的方法，所述方法使存在于由多能干细胞分化诱导得到的细胞群中的CHGA阴性且Ki67阳性的细胞减少到3％及以下的比例。[11]根据[7]至[10]中任一项所述的方法，所述方法使存在于由多能干细胞分化诱导得到的细胞群中的胰岛素阳性且NKX6.1阳性的细胞增加到15％及以上的比例。[12]一种细胞群，所述细胞群以20％及以下的比例包含CHGA阴性细胞，且为经PLK抑制剂处理的由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群。[13]根据[12]所述的细胞群，所述细胞群以3％及以下的比例包含CHGA阴性且Ki67阳性的细胞。[14]根据[12]或[13]所述的细胞群，所述细胞群以15％及以上的比例包含胰岛素阳性且NKX6.1阳性的细胞。
[15]根据[12]至[14]中任一项所述的细胞群，所述细胞群用于移植。[16]一种用于治疗糖尿病的药物，所述药物包含[12]至[15]中任一项所述的细胞群。[17]一种用于治疗或预防糖尿病的方法，所述方法包括将经PLK抑制剂处理的由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群进行移植的步骤。[18]根据[1]至[6]中任一项所述的制造方法，其中，PLK抑制剂为PLK1抑制剂或PLK4抑制剂。[19]根据[1]至[6]中任一项所述的制造方法，其中，PLK4抑制剂为PLK4的50％抑制浓度(IC
50
)少于5nM的物质。[20]根据[1]至[6]中任一项所述的制造方法，其中，PLK4抑制剂为(1S,2R)
‑2‑
[3
‑
[(1E)
‑2‑
[4
‑
[[(2R,6S)
‑
2,6
‑
二甲基
‑4‑
吗啉基]甲基]苯基]乙烯基]‑
1H
‑
吲唑
‑6‑
基]‑
5'
‑
甲氧基
‑
螺[环丙烷
‑
1,3'
‑
[3H]吲哚]‑
2'(1'H)
‑
酮(CAS No.1338800
‑
06
‑
8)或其盐。[21]根据[1]至[6]中任一项所述的制造方法，其中，PLK1抑制剂为PLK1的50％抑制浓度(IC
50
)少于5nM的物质。[22]根据本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种胰岛素产生细胞群的制造方法，所述制造方法包括利用PLK抑制剂对由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群进行处理的步骤。2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以20％及以下的比例包含CHGA阴性细胞。3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以3％及以下的比例包含CHGA阴性且Ki67阳性的细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的制造方法，其中，所制造的细胞群以15％及以上的比例包含胰岛素阳性且NKX6.1阳性的细胞。5.根据权利要求1至4中任一项所述的制造方法，所述制造方法进一步包括使经PLK抑制剂处理的胰岛素产生细胞群分化的步骤。6.根据权利要求1至5中任一项所述的制造方法，所述制造方法利用3μM及以下的PLK抑制剂对胰岛素产生细胞群进行处理。7.一种抑制CHGA阴性细胞的增殖的方法，所述CHGA阴性细胞存在于由多能干细胞分化诱导得到的胰岛素产生细胞群中，所述方法包括利用PLK抑制剂对所述细胞群进行处理。8.根据权利要求7所述的方法，所述方法利用3μM及以下的PLK抑制剂对胰岛素产生细胞群进行处理。9.根据权利要求7或8所述的方法，所述方法使存在于胰岛...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐久间健介，山添则子，豊田太郎，小长谷周平，
申请(专利权)人：千纸鹤治疗公司，
类型：发明
国别省市：