用于疫苗开发的改进的流感病毒复制制造技术

提供了分离的重组流感病毒以及制备和使用所述病毒的方法，所述重组流感病毒具有PA、PB1、PB2、NP、NS、M、NA和HA病毒区段，其中所述PB1病毒区段编码在第711位具有除异亮氨酸之外的残基的PB1或者所述M病毒区段编码在第128位具有除甲硫氨酸之外的残基的M1，其中所述重组流感病毒相对于相应流感病毒具有增强的复制，所述相应流感病毒具有编码在第711位具有异亮氨酸的PB1的PB1病毒区段或具有编码在第128位具有甲硫氨酸的M1的M病毒区段。128位具有甲硫氨酸的M1的M病毒区段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于疫苗开发的改进的流感病毒复制
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年5月1日提交的美国申请No.62/841，491的申请日的权益，其公开内容通过引用并入本文。
[0003]政府权利声明
[0004]本专利技术是在国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的HHSN272201400008C的政府支持下完成的。政府在本专利技术中享有一定权利。
[0005]序列表
[0006]本申请包含已通过EFS
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Web以ASCII格式提交并且在此通过引用整体并入的序列表。在2020年5月1日创建的所述ASCII拷贝被命名为800106WO1.TXT并且大小为69,632字节。

技术介绍

[0007]流感(influenza)是一些哺乳动物中的主要呼吸系统疾病，并且每年都会造成大量的发病率和经济损失。另外，流感病毒感染可在一些禽类类物质中引起严重的全身性疾病，导致死亡。流感病毒基因组的分段性质允许在感染了两种或更多种流感病毒的细胞中在病毒复制期间进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.分离的重组流感病毒，其具有PA、PB1、PB2、NP、NS、M、NA和HA病毒区段，其中所述PB1病毒区段编码在第711位具有除异亮氨酸之外的残基的PB1，或者所述M病毒区段编码在第128位具有除甲硫氨酸之外的残基的M1，其中所述重组流感病毒相对于相应流感病毒具有增强的复制，所述相应流感病毒具有编码在第711位具有异亮氨酸的PB1的PB1病毒区段或具有编码在第128位具有甲硫氨酸的M1的M病毒区段。2.权利要求1所述的重组病毒，其中所述PB1病毒区段编码在第711位具有除异亮氨酸之外的残基的PB1，并且所述M病毒区段编码在第128位具有除甲硫氨酸之外的残基的M1。3.权利要求1或2所述的重组病毒，其中所述PA病毒区段编码这样的PA，其在第105位具有除苯丙氨酸之外的残基、在第142位具有除赖氨酸之外的残基、在第149位具有除丝氨酸之外的残基、在第225位具有除丝氨酸之外的残基、在第56位具有除赖氨酸之外的残基、在第357位具有除苏氨酸之外的残基、在第401位残基处具有除精氨酸之外的残基、或在第550位具有除异亮氨酸之外的残基、或其任意组合。4.权利要求1至3中任一项所述的重组病毒，其中所述PB1病毒区段还编码这样的PB1，其在第40位具有除甲硫氨酸之外的残基、在第112位具有除谷氨酸之外的残基、在第180位具有除甘氨酸之外的残基、或在第247位残基处具有除谷氨酰胺之外的残基、或其任意组合。5.权利要求1至4中任一项所述的重组病毒，其中所述PB2病毒区段编码这样的PB2，其在第202位具有除甲硫氨酸之外的残基、在第323位具有除苯丙氨酸之外的残基、或在第504位具有除异亮氨酸之外的残基、或其任意组合。6.权利要求1至5中任一项所述的重组病毒，其中所述NP病毒区段编码这样的NP，其在第74位具有除精氨酸之外的残基、在第116位具有除异亮氨酸之外的残基、或在第417位具有除天冬酰胺之外的残基、或其任意组合。7.权利要求1至6中任一项所述的重组病毒，其中所述NS病毒区段编码这样的NS1，其在第30位具有除丙氨酸之外的残基、在第55位具有除赖氨酸之外的残基、或在第118位具有除精氨酸之外的残基、或其任意组合。8.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB1中第711位具有V、A、L、G、S、T、C或M，在PB1中第40位具有A、L、G、V、S、T、I或C，在PB1中第112位具有A、L、G、V、S、T、I或C，在PB1中第180位具有A、L、W、Y、F、V、S、T、I或C，在PB1中第247位具有H、R、K、D、E、D或E，或其任意组合。9.权利要求1至8中任一项所述的重组病毒，其在NP中第74位具有K、H、D、E、Q或N，在NP中第116位具有L、V、G、A、S、C或T，在NP中第417位具有D、E、Q、K或H，或其任意组合。10.权利要求1至9中任一项所述的重组病毒，其在NS1中第30位具有P、W、F、L、I、V、G、S、C或T，在第55位具有E、D、Q或N，在NS1中第118位具有K、H、D、E、Q或N，在M1中第128位具有L、I、V、G、A、S、C或T，或其任意组合。11.权利要求1至10中任一项所述的重组病毒，其在PA中第142位具有C、L、I、V、G、A或T，在PA中第225位具有C、L、I、V、G、A或T，在PA中第401位具有K、H、D、E、N或Q，或其任意组合。12.权利要求1至11中任一项所述的重组病毒，其在PB2中第504位具有V、A、L、G、S、T、C或M，在PB2中第202位具有A、L、G、S、T、I或C，在PB2中第323位具有A、L、G、S、T、I或C，或其任意组合。
13.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB1中第711位具有V、A、L、G、S、T、C或M，在PB1中第40位具有A、L、G、V、S、T、I或C，在PB1中第180位具有A、L、W、Y、F、V、S、T、I或C；在NP中第116位具有L、V、G、A、S、C或T；在NS1中第30位具有P、W、F、L、I、V、G、S、C或T，在NS1中第118位具有K、H、D、E、Q或N；在M1中第128位具有L、I、V、G、A、S、C或T；在PA中第401位具有K、H、D、E、N或Q；在PB2中第504位具有V、A、L、G、S、T、C或M；或其任意组合。14.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB1中第711位具有V、A、L、G、S、T、C或M，在PB1中第247位具有H、R、K、D、E、D或E；在NP中第74位具有K、H、D、E、Q或N；在NS1中第55位具有E、D、Q或N；在M1中第128位具有L、I、V、G、A、S、C或T；在PA中第142位具有C、L、I、V、G、A或T；在PB2中第202位具有A、L、G、S、T、I或C，在PB2中第323位具有A、L、G、S、T、I或C；或其任意组合。15.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB1中第711位具有V、A、L、G、S、T、C或M，在PB1中第112位具有A、L、G、V、S、T、I或C；在NP中第74位具有K、H、D、E、Q或N，在NP中第417位具有D、E、Q、K或H；在第55位具有E、D、Q或N；在M1中第128位具有L、I、V、G、A、S、C或T；在PA中第225位具有C、L、I、V、G、A或T；在PB2中第504位具有V、A、L、G、S、T、C或M；或其任意组合。16.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PA中具有142N、225C、356R或550L；在PB1中具有112G、247H、507V或644A中的一个或更多个；在PB2中具有202L、323L或504V中的一个或更多个；在NP中具有74K、112L、116L、417D或442A中的一个或更多个；在M1中具有97A和/或100H；和/或在NS1中具有55E和/或140Q，或其任意组合。17.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其具有以下中的至少一个：在PB2中具有202L和/或323L、在PBl中具有247H、或在NP中具有74K，并且任选地具有以下中的至少一个：在PA1中具有142N、在NS1中具有55K、或在M1中具有97A和/或100H。18.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其具有以下中的至少一个：在PB2中具有202L和/或323L、在PB1中具有247H、或在NP中具有74K，并且具有以下中的至少一个：在PA1中具有142N、在NS1中具有55K、或在M1中具有97A和/或100H。19.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB2中具有202L和/或323L或504V。20.权利要求1至7或19中任一项所述的重组病毒，其在PB1中具有247H或40L/180W。21.权利要求1至7或19至20中任一项所述的重组病毒，其在NS1中具有55E或30P/188K。22.权利要求1至7或19至21中任一项所述的重组病毒，其在PA中具有142C或401K。23.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在NP中具有74K或116L。24.权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其在PB2中具有504V、在PB1中具有40L和180W、在PA中具有401K、在NP中具有116L、在NS1中具有30P/118K、或其任意组合。25.权利要求1至7或24中任一项所述的重组病毒，其在NP中具有74K、116L或417D。26.权利要求1至7或24或25中任一项所述的重组病毒，其在NS1中具有30P、55E或118K。27.权利要求1至7或24至26中任一项所述的重组病毒，其在PA中具有225C或401K。28.权利要求1至27中任一项所述的重组病毒，其中所述病毒在PB1中第711位具有V、A、L、G、S、T、C或M。29.权利要求1至27中任一项所述的重组病毒，其中所述病毒在M1中第128位具有L、I、V、G、A、S、C或T。30.权利要求1至29中任一项所述的重组病毒，其在PB1、PB2或PA中任一个的病毒区段
中第4位具有U。31.权利要求1至29中任一项所述的重组病毒，其在PB1、PB2和PA的病毒区段中第4位具有U。32.权利要求1至31中任一项所述的重组病毒，其在PB1中第711位具有V、A、L、G或T，并且在M1中第128位具有L、I、V、G、A或T。33.权利要求1至32中任一项所述的重组病毒，其中所述PA、PB1、PB2、NP、NS和M病毒区段包含以下中至少一个的序列：具有由SEQ ID NO：2编码的氨基酸序列的PB1或与由SEQ ID NO：2编码的PB1具有至少95％氨基酸序列同一性的PB1；具有由SEQ ID NO：3编码的氨基酸序列的PB2或与由SEQ ID NO：3编码的PB2具有至少95％氨基酸序列同一性的PB2；具有由SEQ ID NO：1编码的氨基酸序列的PA或与由SEQ ID NO：1编码的PA具有至少95％氨基酸序列同一性的PA；具有由SEQ ID NO：4编码的氨基酸序列的NP或与由SEQ ID NO：4编码的NP具有至少95％氨基酸序列同一性的NP；具有由SEQ ID NO：5编码的氨基酸序列的M1和/或M2或与由SEQ ID NO：5编码的M1和/或M2具有至少95％氨基酸序列同一性的M1和/或M2；或具有由SEQ ID NO：6编码的氨基酸序列的NS1和/或NS2或与由SEQ ID NO：6编码的NS1和/或NS2具有至少95％氨基酸序列同一性的NS1和/或NS2，或者其中所述PA、PB1、PB2、NP、NS和M病毒区段包含以下中至少一个的序列：具有由SEQ ID NO：10编码的氨基酸序列的PB1或与由SEQ ID NO：10编码的PB1具有至少95％氨基酸序列同一性的PB1；具有由SEQ ID NO：11编码的氨基酸序列的PB2或与由SEQ ID NO：11编码的PB2具有至少95％氨基酸序列同一性的PB2；具有由SEQ ID NO：12编码的氨基酸序列的PA或与由SEQ ID NO：12编码的PA具有至少95％氨基酸序列同一性的PA；具有由SEQ ID NO：13编码的氨基酸序列的NP或与由SEQ ID NO：13编码的NP具有至少95％氨基酸序列同一性的NP；具有由SEQ ID NO：14编码的氨基酸序列的M1和/或M2或与由SEQ ID NO：14编码的M1和/或M2具有至少95％氨基酸序列同一性的M1和/或M2；或具有由SEQ ID NO：15编码的氨基酸序列的NS1和/或NS2或与由SEQ ID NO：15编码的NS1和/或NS2具有至少95％氨基酸序列同一性的NS1和/或NS2。34.具有权利要求1至33中任一项所述的分离的重组病毒的疫苗。35.用于制备重配株的多种流感病毒载体，其包含a)包含与连接于转录终止序列的流感病毒PA DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒PB1 DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒PB2 DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒HA DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒NP DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒NA DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、包含与连接于转录终止序列的流感病毒M DNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体、以及包含与连接于转录终止序列的流感病毒NS cDNA可操作地连接的启动子的用于vRNA之产生的载体，其中所述用于vRNA之产生的载体中的所述PB1、PB2、PA、NP、NS和M DNA来自一种或更多种流感疫苗病毒分离株，其中用于NA vRNA之产生的所述载体中的所述NA DNA具有异源NA的序列，并且其中用于HA vRNA之产生的所述载体中的所述HA DNA具有异源HA的序列，其中所述PB1 DNA编码在第711位具有除异亮氨酸之外的残基的PB1或者所述M DNA编码在第128位具有除甲硫氨酸
之外的残基的M1；以及b)包含与编码流感病毒PA的DNA区段可操作地连接的启动子的用于mRNA之产生的载体、包含与编码流感病毒PB1的DNA区段...

【专利技术属性】
技术研发人员：河冈义裕，加布里埃莱，
申请(专利权)人：威斯康星校友研究基金会WARF，
类型：发明
国别省市：